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1、培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培育基的制备与灭菌试验报告 陕西师范高校远程教化学院 生物学试验报告 报告题目培育基的制备与灭菌 姓 名 刘 伟 学 号 专 业 生 物 科 学 批次/层次 指导老师 学习中心 培育基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 驾驭微生物试验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 驾驭培育基的配置原则和方法。 3. 驾驭高压蒸汽灭菌的操作方法和留意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培育基： 是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细胞生长繁殖所须要的最基本的养分物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温
2、使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀接着加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点上升，获得高于101的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、试验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培育皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在运用
3、前必需洗刷干净。将三角瓶、试管、培育皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2灭菌前玻璃器皿的包装 （1） 培育皿的包扎：培育皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培育皿包 成一包，或者将几套培育皿干脆置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培育皿须经灭菌之后才能运用。 （2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避开外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约11.5cm。塞棉花时可
4、用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧相宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端 放在长条报纸的一端，约成45角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，打算灭菌。 （二）液体及固体培育基的配制过程 1液体培育基配制 （1）称量（假定配制1010ml培育基） 按培育基配方比例依次精确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1010ml刻度搪瓷杯）中牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入
5、烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所须要的水量（如约730ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1010ml）；假如配制固体培育基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最终补足所损失的水分。 （3）调pH 调pH：一般用pH试纸测定培育基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培育基中蘸一下，观看其pH范围，如培育基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调整。调整pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培育基中成分。边加边搅拌，并时常用pH试纸测试
6、，直至pH达7.4-7.6。反之，用1molLHCl进行调整。 2固体培育基的配制 配制固体培育基时，应将已配好的液体培育基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.52)加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。接着加热至琼脂全部溶化，最终补足因蒸发而失去水分。 （三）培育基的分装 依据不同须要，可将已配好培育基分装入试管或三角瓶内，分装时留意不要使培育基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不当心，培育基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培育基，并将脱脂棉弃去。 1试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，
7、用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培育基干脆流入试管内。装入试管培育基的量视试管大小及须要而定，若所用试管大小为15150 mm时，液体培育基可分装至试管高度14左有为宜；如分装固体或半固体培育基时，在琼脂完全溶化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培育基的分装量为管高15(约34mI)，半固体培育基分装量为管高的13为宜。 2三角瓶的分装 用于振荡培育微生物时，可在250 m1 用于制作 平板培育基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml 粉(按2计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被溶化。 （四）棉塞的制作及试管
8、、三角瓶的包扎 为了培育好气性微生物，需供应优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必需对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。 1试管棉塞的制作 制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的一般棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中心压入团孔中制成棉塞然后干脆压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。 制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的23在试管内，13在试管外。目前也有采纳硅胶塞代替棉塞干脆盖在试管口上。 将装好培育基并塞好棉塞或硅
9、胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培育基名称及配制日期，灭菌待用。 2三角瓶棉塞制作 通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培育加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采纳硅胶塞干脆盖在瓶口上。 在装好培育基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。 （五）培育基的灭菌 将上述培育基以0.103MPa，l21，20min高压蒸气灭菌。 灭菌过程： 1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇 管，与三角搁架相平为宜。切勿遗忘检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起
10、炸裂事故。 2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。留意不要装得太挤，以免阻碍蒸 汽流通而影响灭菌效果。装有培育基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。 3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖， 对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一样，勿使漏气，并打开排气阀。 4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排 气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。 5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，接着加热，锅内
11、压力起先上升。 6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，限制电源，起先计时并维持压力至所 需的时间。如本试验中采纳0.1Mpa，121.5，20分钟灭菌。 灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必需完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。 7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力 表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力肯定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培育基或 试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。 （六
12、）斜面和平板的制作 1斜面的制作 将已灭菌装有琼脂培育基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l2为宜。如制作半团体或固体深层培育基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。 2平板的制作 将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培育基溶化后，待冷至50左右倾入无菌培育皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50，培育基易于凝固而无法制作平板。 平板的制作应在火旁进行，左手拿培育皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培育皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入1015mL培育基，快速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培育
13、基匀称分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。 （七）培育基的灭菌检查 灭菌后的培育基，一般需进行无菌检查。最好取出12管(瓶)，置于37温箱中培育12天，确定无菌后方可运用。 篇二：培育基的制备与灭菌试验报告(具体) 一、试验题目：培育基的制备与灭菌 二、试验目的： 1、明确培育基的配置原则，驾驭配置方法。 2、了解灭菌的原理，学习驾驭灭菌器的运用方法。 三、试验器材： 1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器：三角瓶、培育皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、试验原理： 1、培育基的制备 包括一下几种成分： （1）水分：主要成分。 （2）N源：包括无机
14、氮和有机氮。 （3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 （4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。 微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。 有些还须要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。 2、培育基配置的原则 依据不同的培育对象及培育目的，选用不同的培育基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。 培育基有以下分类： 按成分：自然培育基、合成培育基、半合成培育基 按状态：固体培育基、半固体培育基、液体培育基 按用途：基础培育基、养分培育基、鉴别培育基、选择培育基 培育基配好后应马上灭菌，防止养分物质中的微生物富集。 3、灭菌： 用理化手段杀灭一切微生物的养分体，
15、包括芽孢和孢子，在试验中应对全部仪器、操作场所、药品及培育基灭菌或消毒。 （1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121、1530min可以彻底灭菌，本次试验灭菌20min。若是含糖培育基，110、30min。 （2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。 （3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。 （4）过滤除菌：试验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22m）。除病菌需更小。 五、试验步骤： 1、
16、牛肉膏蛋白胨培育基的制备 依次精确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入101mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。加上棉塞，快速拔出能发出嘹亮声响即可，用报纸包住并系好麻绳。 2、包移液管和培育皿 （1）包一包培育皿（一包五个）：用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇摆没有培育皿相互碰撞的声音即可。 （2）包2支移液管：用棉花塞好移液管尾部，露出12cm即可。取长条报纸，一端折 90角，紧密严实沿30角卷好移液管，尾部叠好防止散开。 3、高压蒸汽灭菌 （1）灭菌前要先看水位是否合适。 （2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培
17、育基。 （3）加盖，两两对称旋紧螺栓。 （4）设定条件：0.1MPa、121、20min，进行加热。 （5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。 （6）结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀取出物品。 4、干热灭菌 （1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。 （2）设定条件：160173，恒温2h。 （3）结束后，切断电源，自然降温，降到73以下后开箱取物。 六、思索题： 1、你配制的是什么培育基？ 选择培育基。 2、选择培育基与鉴别培育基的区分？这两种培育基的应用状况。 选择培育基是指依据某种微生物的特别养分要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培育基。其功能是使混合菌样
18、中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培育基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时，可添加适量的青霉素、四环素或链霉素，以抑制细菌和放线菌的生长。 鉴别培育基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能便利地从近似菌落中找到目的菌菌落的培育基，此类培育基一般用于鉴定不同微生物。如EMB即伊红美乳糖造就基。大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸，可染上酸性伊红，伊红和美兰结合，菌落被染成深紫色，从菌落外貌的放射光中还可以看到绿色金属发光。 篇三：试验二 培育基的配制和灭菌 试验二 培育基的配制和灭菌 一、 试验目的 微生
19、物的生长发育都有肯定的养分须要，培育基即人工培育微生物、为其生长发育供应所需养分的基质。培育基配好后必需经过灭菌方能用于分别培育微生物试验，因此培育基的配制和灭菌是植物病理试验室中最基本的工作，通过本次试验学习植病试验室中常用培育基的配制方法和高压灭菌锅的运用方法。 二、内容、材料和方法 (一)培育基的配制 培育基按组成成分及对这些成分了解的程度分为自然培育基、半组合培育基和组合培育基三类，从物理性质上又分为液体培育基和固体培育基两类，培育基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次试验仅配制马铃薯琼脂培育基和牛肉膏蛋白胨培育基。1马铃薯蔗糖琼脂培育基（PSA） 这是植病试验室最常用的培育基
20、(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分别和培育，有时也用于植物病原细菌。 成分：马铃薯200克 蔗 糖 1020克 琼 脂 1720克 加水至1010毫升 方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。马铃薯蔗糖琼脂培育基略带酸性，培育真菌无需调整pH，培育细菌则调整pH至中性，此培育基留作下次试验分别培育病原真菌用，故不必调整pH。 5人分作一组，1、2组各作此培育基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250300毫升的三角
21、瓶中，每瓶装101毫升左右，灭菌后妥当保存，留待下次试验运用。 2肉汁胨培育基（BPA） 这种培育基主要用于细菌的分别和培育 成分：牛肉浸膏 3克 蛋白胨 510克 蔗糖 10克 酵母浸膏 1克 琼脂 1720克 加水至 1010毫升 方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调整pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。 牛肉浸膏和酵母浸膏非常粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再起先沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。调整培育基pH至中性的方法如下：配成1N的HCl和NaOH，并另分别稀释配成1/20
22、N的HCl和NaOH。取培育基2毫升，加蒸馏水7.5毫升，加指示剂溴一百零一里酚蓝指示剂5滴，这时如培育基的测样呈黄色则用有刻度吸管加入1/20 N的NaOH若呈蓝色则加入1/2O N的 HCl，使培育基最终呈草绿色即调整到中性，此刻所加酸或碱的毫升数的25倍即等于在1010毫升培育基中所须要加入lN 的NaOH或HCl的毫升数(留意这次是作500毫升培育基)，加蒸馏水稀释的目的防止调整过程中培育基凝固。 调整pH至中性的简便方法是用石蕊示纸。也可以用多孔白色瓷板，在孔中加少量培育基和溴一百零一里酚蓝或其它指示剂12滴，依据颜色反应，在所配的培育液中加入少量lN的NaOH或HCl，然后再取样测
23、定，如此反复多次，达到所需求的反应为止。 5人分为一组，3、4两组各作此培育基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约101毫升，灭菌后摆成斜面，其余300毫升分装在3个250300毫升的三角瓶中，每瓶装101毫升左右，灭菌后妥当存放，留待下次试验运用。 此外，1、2、3、4各组均制备15管试管装和2瓶三角瓶装的无菌水。 (二)培育基的灭菌 为了得到某种病原物的纯培育，配好的培育基必需经过灭菌才能运用，灭菌是指用物理或化学方法完全杀死器物表面及其内部的全部微生物，灭菌与消毒的概念不同，消毒则是指歼灭器物或植物组织表面的某些微生物(能常称杂菌)，而不是歼灭全部的微生物。 灭菌的方法许多，植病试
24、验室常用的有干热灭菌和高压蒸汽灭菌两种方法，一般培育皿、吸管等玻璃仪器用干热灭菌法进行灭菌。而培育基和试验用的土壤，则用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，详细灭菌方法和步骤如下： 1干热灭菌法 (1)将培育皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用旧报纸包好，或装入特制的铁筒中(每个吸管用纸包好后装入铁筒)，包纸时应将吸取的一端放在取时先折开的一端，以便取用时手勿触及要求灭菌的一端。 (2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有肯定的空隙以便流通空气。 (3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到肯定程度时，闭上排气孔，接着加热至肯定温度后，用定温固定温度，灭菌温度一般165175保持1小时
25、即可。 (5)待自然降温冷却后(60以下)才能开门取出玻璃器皿，避开由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。 2高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法又称湿热灭菌，它的原理是利用高压来提高蒸汽的温度，达到灭菌的目的，其操作步骤如下： (1)关好排水阀门放入清水至标度为止，留意水量肯定要加足，否则简单造成事故。 (2)将要灭菌的培育基、灭菌水等装入铁丝笼中，并用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖，旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到肯定程度(不要太紧)，然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。 (3)通电加温，同时打开排气活门，排尽锅内的空气，即活门冲出的全部是蒸气时则表示
26、彻底，此时可关闭排气活门，假如过早关闭活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。通常当压力表指针升至5磅时，打开排气活门放气，降至零点，再关闭活门。 (4)压力表的指针上升时，锅内温度也渐渐上升，当压力表指针升至15磅时，蒸气温度相当于120121(等于一个大气压)，此时起先计算灭菌时间，限制热源，使处于15磅压力保持30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。 (5)略微打开一点排气活门，使锅内蒸气缓慢解除，然后渐渐开大活门，气压缓缓下降，留意勿使排气过快，否则会使锅内的培育基沸腾而冲脱或沾湿棉花塞，但排气太慢又使培育基在锅内，受高温处理时间过长，这样对培育基也是不利的。一般从排气到打开
27、锅盖以10分钟左右为好。 (6)当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，打开锅盖取出培育基，如需制备固体斜面培育基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。 (7)最终将高压灭菌器内的剩余水排出。 (8)抽取上述灭菌的培育基，放入25温箱中，48小时后不见杂菌生出，便证明培育基已达到灭菌目的，可以运用。 此外，有些培育基在经高压灭菌后，其养分成分简单分解而失去运用价值，此时可采纳间歇蒸气灭菌法，即将培育基放入高压灭菌器内，加热至101，保持1小时，每天灭菌一次，连续进行三次，即可达到灭菌的目的，又不至使养分物质分解。 三、思索题 1培育基有哪几种类别? 各有什么特点
28、和用途? 2干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何? 电热烘箱和高压锅如何操作? 各有哪些运用留意事项? 3怎样检查培育基灭菌是否彻底? 关于微生物试验-培育基的配制和灭菌的思索题！急！ 2022-5-8 19:32 提问者： 喜爱和爱123 |阅读次数：1520次 1.在一般状况下为什么试管或三角瓶培育基要用棉花塞而不用软木塞或橡皮塞？ 2.高压蒸汽灭菌过程中为什么肯定要排放锅内的冷空气？ 我来帮他解答 2022-5-8 19:58 满足回答 1.棉花起到过滤、透气的作用啊！并且棉花的开头大小是可以尽可能变更的，而不须要非得找到合适的软木或橡皮塞！ 2.高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加
29、压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，接着加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于101的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在运用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的解除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 灭菌更彻底！ 常用培育基的制备、灭菌与消毒 2022-09-20 00:00:00来源：评论：0我要评论 一、试验目的 了解培育基的配制原理；驾驭配制培育基的一般方法
30、和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理 及方法；驾驭干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、试验原理 培育基是人工按肯定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所须要的养分物质的混合物。培育基的原材 一、试验目的 了解培育基的配制原理；驾驭配制培育基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；驾驭干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、试验原理 培育基是人工按肯定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所须要的养分物质的混合物。培育基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。依据微生物的种类和试验目的不同，培育基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培育基是一种应
31、用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细胞生长繁殖所须要的最基本的养分物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 1.灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培育皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、试验内容 1.称量溶化调pH过滤分装加塞包扎灭菌无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品升温恒温降温开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水装物品加盖加热排冷空气加压恒压降压回零排汽取物无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌连接压滤无菌检查
32、清洗灭菌 五、关键步骤及留意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.干热灭菌要留意物品不要堆放过紧，留意温度的时间限制，73oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要留意物品不要过多，加热后解除冷空气，到时降压回零取物。 环节的操作技术与应用。 （3） 学习并驾驭培育基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。 二、试验原理 培育基的制备原理 培育基是根据微生物生长发育的须要，用不同组分的养分物质调制而成的养分基质。人工制备培育基的目的，在于给微生物创建一个良好的养分条件。把肯定的培育基放入肯定的器皿中，就供应了人工繁殖微生物的环境和场所。自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不
33、同的养分类型，对养分物质的要求也各不相同，加之试验和探讨上的目的不同，所以培育基在组成原料上也各有差异。但是，不同种类和不同组成的培育基中，均应含有满意微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。此外，培育基还应具有相宜的酸碱度(pH值)和肯定缓冲实力及肯定的氧化还原电位和合适的渗透压。 依据制备培育基对所选用的养分物质的来源，可将培育基分为自然培育基、半合成培育基和合成培育基三类。根据培育基的形态可将培育基分为液体培育基和固体培育基。依据培育基运用目的，可将培育基分为选择培育基、加富培育基及鉴别培育基等。 培育基的类型和种类是多种多样的，必需依据不同的微生物和不
34、同的目的进行选择配制，本试验分别配制常用培育细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培育基、高氏一号合成培育基和马铃薯蔗糖培育基等固体培育基。 固体培育基是在液体培育基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份改变。琼脂在95的热水中才起先溶化，溶化后的琼脂冷却到45才重新凝固。因此用琼脂制成的固体培育基在一般微生物的培育温度范围内(25-37)不会溶化而保持固体状态。 高压蒸气灭菌原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
35、待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，接着加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于101的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其缘由有三：一是湿热中细菌菌体汲取水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低(表-2)，二是湿热的穿透力比干热大(表-3)；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在101时，由气态变为液态时可放出 2.26kJ(千焦)的热量。这种潜热，能快速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 表-2 蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵自蛋白含水量(%) 50 25 18 6 30分钟内凝固所需温度() 56 74-80 80-90 145 160-173 第24页 共24页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页第 24 页 共 24 页