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1、PCRClean DXDNA 样品纯化Catalog Numbers：C-1003-5，C-1003-50，C-1003-200内容操作手册2.1简介2流程简介2产品说明2操作过程-96 孔4操作过程-384 孔51简介PCRClean DX 纯化试剂盒基于独特的磁珠技术，快速、高效地纯化 PCR 产物和其他酶切产物， 且纯化回收率高。PCRClean DX 选择一种最有效的缓冲液用于磁珠，可以选择性地结合大于120bp 的 DNA 片段。主要由结合、漂洗和洗脱三个步骤组成。经过结合和漂洗过程，去除了反响中引物、核苷酸、盐和酶等杂质。经纯化的 DNA 样品无污染，用于 Sanger 测序或 N
2、GS 文库制备。而且，PCRClean DX 还可以有效去除引物二聚体和接头。PCRClean DX 应用PCR测序Sanger 或 NGS 文库构建 基因分型和检测突变酶切反响纯化芯片样品制备引物步移克隆和其它分子试验PCRClean DX 适用于自动化平台流程简介1. 每 10ul PCR 产物参加 18ul PCRClean DX，利于 DNA 和磁珠结合2. 从杂质中分别 DNA 磁珠微粒3. 80%的乙醇洗涤两次，以除去盐等杂质或70%乙醇4. 洗脱磁珠上纯化的 DNA产品说明PCRClean DX 试剂盒可以使用离心管、96 孔或 384 孔板。依据样品量选择适宜的 PCRClea
3、n DX试剂盒。产品规格如下表：PCRClean DXPCRClean DX-5ml PCRClean DX-50ml PCRClean DX-200ml货号C-1003-5 C-1003-50 C-1003-200反响次数DNAulC-1003-5次C-1003-50次C-1003-200次10277277711111201381388555550555552222材料试剂盒内容PCRClean DX 磁珠试剂保存：0-4，12 个月使用前，室温充分悬浮磁珠。名称推举模板96 孔 PCR 反响板96 孔 PCR 反响板96 孔圆底微孔板96 孔循环板384 孔循环板供给商和 P/NCorni
4、ng,Inc.3797, corning Fisher Scientific 07-200-105, fishersci Bio-RadLaboratories,HSP-3801, bio-rad ABgene Limited,AB-0800,AB-1000,AB-1400, abgene worldwide and Fisher Science fishersci in the U.S.磁力 PCR 板96 孔环形架AmbionInc.,(acquiredbyAppliedBiosystems),AM10050, PCR 板密封盖384 孔磁性分别器易分别的箔纸Promega Corpora
5、tion,V8241, promega ABgeneLimited,AB-3739和AB-3739/s, abgene worldwide and Fisher Science fishersci in the U.S.液体处理工作站排枪产品信息仪器成分应用80%乙醇或 70%乙醇10mM TRIS-Cl，PH8.0灭菌双蒸水漂洗洗脱 DNA10mM TRIS-Cl，PH8.0，1mM EDTA试剂操作过程-96 孔1. 假设 PCR 体积超过了 PCR 板容纳体积的 2.8 倍，则 PCR 样品需要转移至 300ul 的圆底平板PCR 体积ul10PCRClean DX1.8 倍ul1820
6、3650902. 温顺颠倒混匀 PCRClean DX 试剂，使磁珠充分悬浮。PCRClean DX 试剂参加量如下表：注：用下面的公式计算 PCRClean DX 的使用量每次反响 PCRClean DX 使用量=1.8*PCR 体积3. PCR 样品和 PCRClean DX 上下颠倒混匀 5 分钟注：混匀后，颜色清楚4. 室温放置 5 分钟，使 DNA 和磁珠充分结合注：大于 120bp 的 PCR 产物与磁珠结合5. 置于 96 孔磁力板上，放置 3 分钟，直至溶液澄清注：进展下一步操作前保证溶液澄清6. 吸弃上清液注：在磁力板操作，避开磁珠分散7. 每孔参加 200ul 80%乙醇，
7、室温放置 30 秒，吸弃上清液。重复两次注：在磁力板上操作。不要搅拌磁珠，尽量移除乙醇，避开残留8. 室温放置 5 分钟，磁珠过干，影响回收率9. 参加 40ul 的洗脱液双蒸水，10mM Tris-Cl PH8.0，或 TE 缓冲液 注：洗脱液可以大于 40ul。假设小于 40ul，不能充分溶解 PCR 产物10. 磁力板上放置 1 分钟11. 吸取上清，保存或进展后续试验操作过程-384 孔PCR 体积ul5PCRClean DX 体积ul9712.6189014251. 温顺颠倒混匀 PCRClean DX 试剂，使磁珠充分悬浮。PCRClean DX 试剂参加量如下表：注：用下面的公式
8、计算 PCRClean DX 的使用量每次反响 PCRClean DX 使用量=1.8*PCR 体积2. PCR 样品和 PCRClean DX 混匀 5 分钟注：混匀后，颜色清楚3. 置于 384 孔磁力板上，放置 1 分钟注：溶液澄清再进展下一步操作4. 吸弃上清液注：在 384 孔磁力板上进展。尽量不要触及磁珠，以免污染5. 每孔参加 200ul 80%70%乙醇，室温孵育 30 秒，吸弃乙醇。重复两次注：在磁力板上进展。不要搅拌磁珠，尽量移除乙醇，避开有残留6. 室温放置 5 分钟，以使乙醇残留完全蒸发。留意不要磁珠过干磁珠外表消灭裂痕，否则，DNA 回收率降低7. 参加 15ul 洗
9、脱缓冲液双蒸水，10mM Tris-Cl PH8.0，或 TE 缓冲液注：务必使 15ul 洗脱液与吸住充分接触。洗脱液可以大于15ul。假设小于15ul，可能不能充分溶解 PCR 产物，影响回收产量8. 吸取上清，进展后续试验ALINE PureSEQ-MP Kit 测序反响纯化操作手册Sanger 测序 Dye Teminator 纯化试剂盒Catalog Numbers：P-3005-5，P-3005-50，P-3005-BULK内容操作手册2.3简介2产品说明2材料2操作过程3请登录 :/ alinebiosciences 关注操作手册和操作的安全留意事项或化学危急品的更内容。1简介P
10、ureSEQ-MP 利用特有的基于磁珠的测序纯化体系，有效地纯化 Sanger 测序反响和移除BigDye。简洁、敏捷，能够用于自动化操作平台。广泛用于高通量测序和人工操作。产品说明平台96 孔384 孔5mlP-3005-5反响次数50050mlP-3005-50反响次数5000100010000依据测序反响体系和测序平台来确定测序反响中PureSEQ-MP 的使用量。请参考下表格每个试剂盒的反响次数材料ALINE PureSEQ-MP4保存 12 个月使用前 PureSEQ-MP 混匀避开试剂凝固其它材料： 磁力板：96 孔平台：ALINE Biosciences,cat.No.:MagP
11、-96EB384 孔平台：384 磁力板MagnaBot384 磁性分别器，Promega 公司，V8241 或 Beckman Agencourt SPRIPlate 384 磁力板反响板：96 孔平台：96 孔循环板，ABGene AB-1000 或 AB-1004384 孔平台：384 孔 Hardshell 循环板，ABGene Diamond AB-1111排枪：10ul 和 100ul试剂：85%乙醇ACS 级，Sigma-Aldrich96 孔板每孔 25ml 85%乙醇注：假设是配制的 85%乙醇最好 1-3 天内使用，密闭容器存储洗脱缓冲液：灭菌双蒸水或 0.01mM EDT
12、A(PH 8.0)注：依据化学荧光染料和反响条件来选择洗脱液ABI BigDye Terminator 纯化试剂盒-96 孔操作过程1. 使用前，温顺振荡 PureSEQ-MP 试剂，使磁珠充分悬浮注：试剂没有沉淀。开盖后，4保存2. 每个样品参加 10ul PureSEQ-MP3. 参加 85%乙醇量，如下表：PureSEQ-MP for 96-well BigDye Terminator Removal注：为了样品和磁珠完全结合，乙醇和PureSEQ-MP 应当充分混合测序反响体系ul85%乙醇体积ul53110421552206225734. 反响板在 96 孔磁力板上 3-5 分钟，直
13、到溶液澄清5. 缓慢吸弃上清液注：在磁力板上进展。移液器枪尖要伸入孔底，避开磁珠分散6. 参加 100ul 85%的乙醇，放置 30 秒以上7. 尽量移弃乙醇8. 反响中使用 Dye Teminator 4ul 或更多，须重复 6、7 步一次以上9. 室温晾干 10 分钟10. 参加 40ul 洗脱液如下表，室温下放置5 分钟以溶解注：测序上样前，不要使样品变性洗脱液的选择标准可参考下表：2.0ulBigDye 的 PCR 产物2.0ulBigDye 的 PCR 产物2.0ulBigDye 的质粒2.0ulBigDye 的质粒ABI 3100/3130 0.01mM EDTA0.01mM ED
14、TA0.01mM EDTA质粒双蒸水ABI3700 0.01mM EDTA质粒双蒸水质粒双蒸水质粒双蒸水ABI3730 0.01mM EDTA0.01mM EDTA0.01mM EDTA质粒双蒸水11. 取下反响板，放置 3-5 分钟。移取 35ul 纯化的样品至的板子，用于测序注：纯化产物密封，4保存 24 小时。超过 24 小时，于-20保存，-20可以储存 3个月ABI BigDye Terminator 纯化试剂盒-384 孔操作过程1. 每次使用前，温顺振荡 PureSEQ-MP 试剂，使磁珠充分悬浮注：观看是否有沉淀2. 每个样品参加 5ul PureSEQ-MP参加 85%乙醇量
15、，如下表：PureSEQ-MP for 384-well BigDye Terminator Removal测序反响体系ul585%乙醇体积ul14.31021.41528.63. 反响板放在 384 孔磁力板放置 3-5 分钟，直到溶液澄清4. 缓慢吸弃上清液5. 每个孔参加 30ul 85%的乙醇，放置 30 秒以上6. 尽量移除乙醇注：须在磁力板上进展。将枪尖伸入到孔底，避开搅动磁珠。尽量移除多余的荧光染料和杂质7. 参加 85%的乙醇，重复 6、7 步一次以上8. 室温晾干 10 分钟9. 参加 15-30 ul 洗脱液如下表，室温放置5 分钟以溶解注：测序上样之前，不要使样品变性洗脱
16、液的选择标准可参考下表：2.0ulBigDye 的 PCR 产物2.0ulBigDye 的 PCR 产物2.0ulBigDye 的质粒2.0ulBigDye 的质粒ABI 3100/3130 0.01mM EDTA0.01mM EDTA0.01mM EDTA质粒双蒸水ABI3700 0.01mM EDTA质粒双蒸水质粒双蒸水质粒双蒸水ABI3730 0.01mM EDTA0.01mM EDTA0.01mM EDTA质粒双蒸水10. 取下反响板，放置 3-5 分钟。移取 35ul 纯化的样品至的板子，用于测序注：纯化产物密封，4保存 24 小时。假设超过24 小时，于-20保存，-20可以储存 3 个月