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1、刘淑萍教授前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介固相微萃取分离法属于非溶剂型萃取法。其中直接固相微固相微萃取分离法固相微萃取分离法 1.1.方法原理方法原理方法原理方法原理 固相微萃取分离法是20世纪90年代初发展起来的试样预分离富集方法，它集试样预处理和进样于一体，将试样纯化、富集后，可与各种分析方法相结合而特别适用于有机物的分析测定。顶空固相微萃取分离法是将涂有高分子固相液膜的石英纤维停放在试样溶液上方进行顶空萃取，这是三相萃取体系，要达到固相、气相和液相的分配平衡，由于纤维不与试样基体接触，避免了基体干扰，提高了分析速度。萃取分离法是将涂有高分子固相液膜的石英
2、纤维直接插入试样溶液或气样中，对待分离物质进行萃取，经过一定时间在固相涂层和水溶液两相中达到分配平衡，即可取出进行色谱分析。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介固相微萃取分离法的装置见下图 固相微萃取装置图 1.压杆 2.筒体 3.压杆卡持螺钉 4.Z形槽5.筒体视窗 6.调节针头长度的定位器 7.拉伸弹簧8.密封隔膜 9.注射针管 10.纤维联结管 I1.熔融石英纤维 前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 石英纤维表面涂有高分子固相液膜，对有机物具有吸附和富集作用；定位器用于精确调节不锈钢针套伸出的位置；压杆卡持螺钉可通过Z形槽使不
3、锈钢针套内石英纤维伸出或收入；不锈钢注射针管对石英纤维起保护作用，以免石英纤维在穿过密封隔膜时受到损失。此法简单，操作方便，已实现自动控制，而且特别适用于现场分析。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 b.搅拌效率的影响 搅拌效率是影响分离萃取速度的重要因素。在理想搅拌状态下，平衡时间主要由分析物在固相中的扩散速度决定。在不搅拌或搅拌不足情况下，被分离物质在液相扩散速度较慢，更主要的是固相表面附有一层静止水膜，难以破坏，被分离物质通过该水膜进入固相的速度很慢，使得萃取时间很长。前一页 后一页一些新的
4、分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 c.温度的影响 温度升高，被分析物扩散系数增大，扩散速度随之增大，同时升温加强了对流过程，因此升温有利缩短平衡时间，加快分析速度。对于土壤、沙石、污泥等固体和半干态试样，加热有助于被分离物质脱离复杂的基体，进入气相。但是，升温会使被分离物质的分配系数减小，在固相的吸附量减少。所以在使用此方法时应寻找最佳工作温度。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 d.盐的作用和溶液酸度的影响 由于被分离物质在固相和液相之间的分配系数受基体性质的影响，当基体变化时，分配系数也会改变。在水溶液中加入NaCl,Na2SO4等可增强水溶液的
5、离子强度，减小被分离有机物的溶解度，使分配系数增大，提高分析灵敏度。控制溶液的酸度也可改变被分离物在水中的溶解度。例如，采用固相微萃取分离法分离脂肪酸时需要控制溶液较小的pH使溶液中的脂肪酸主要以分子形式存在，以降低溶解度，增大分配系数，提高分离萃取效率。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介超临界流体萃取分离法超临界流体萃取分离法 1 1基本原理基本原理基本原理基本原理 超临界流体萃取分离法是利用超临界流体作萃取剂在两相之间进行的一种萃取方法。超临界流体是介于气液之间的一种既非气态又非液态的物态，它
6、只能在物质的温度和压力超过临界点时才能存在。超临界流体的密度较大，与液体相仿，所以它与溶质分子的作用力很强，像大多数液体一样，很容易溶解其他物质。另一方面，它的粘度较小，接近于气体，所以传质速率很高；加上表面张力小，容易渗透固体颗粒，并保持较大的流速，可使萃取过程在高效、快速又经济的条件下完成。超临界流体萃取中萃取剂的选择随萃取对象的不同而改变，通常用二氧化碳作超临界流体萃取剂分离萃取低极性和非极性的化合物；用氨或氧化亚氮作超临界流体萃取剂分离萃取极性较大的化合物。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介超临界流体萃取分离法的流程如下图所示。CO2钢瓶 高压泵 试样管
7、 吸收管 溶剂洗脱泵 收集器前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 超临界流体萃取分离的操作方式分为动态、静态、循环萃取三种。动态法是超临界流体萃取剂一次直接通过试样萃取管，使被分离的组分直接从试样中分离出来进入吸收管的方法。它简单、方便、快速，特别适用于萃取那些在超临界流体萃取剂中溶解度大的物质，且试样基体又很容易被超临界流体渗透的场合。静态法是将萃取的试样“浸泡”在超临界流体内，经过一定时间后再把含被萃取溶质的萃取剂流体输入吸收管。静态法适合于萃取与试样基体较难分离或在萃取剂流体内溶解度不大的物质
8、，也适合于试样基体较为致密、超临界流体不易渗透的场合。循环法是动态法和静态法的结合，它首先将萃取剂流体充满试样萃取管，然后用循环泵使萃取管内的流体反复多次经过管内的试样，最后输入吸收管。它比静态法效率高，同时克服了动态法的缺点，适合于动态法不宜萃取的试样和场合。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介b.温度的影响 萃取温度温度的变化也会改变超临界流体萃取的能力，它体现在影响萃取剂的密度和溶质的蒸气压两个因素。在低温区（仍在临界温度以上），温度升高降低流体密度，而溶质蒸气压增加不多，因此萃取剂的溶解能力
9、降低，升温可以使溶质从流体萃取剂中析出；温度进一步升高到高温区时，虽然萃取剂密度进一步降低，但溶质的蒸气压迅速增加起了主要作用，因而挥发度提高，萃取率反而增大。吸收管和收集器的温度吸收管和收集器的温度也会影响到回收率，因为萃取出的溶质溶解或吸附在吸收管内，会放出吸附或溶解热，降低温度有利于提高收集率。有时在吸收管后附加一个冷阱可提高回收率。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 c.萃取时间萃取的时间取决于两个因素：被萃取物质在流体中的溶解度，溶解度越大，萃取效率越高，速度也越快；被萃取物质在基体中的传质速率，速率越大，萃取越完全，效率也越高。d.其它溶剂的影响在超
10、临界流体中加入少量其他溶剂可改变它对溶质的溶解能力。通常加入量不超过10%，而且以极性溶剂如甲醇、异丙醇等居多。加入少量的其他溶剂可使超临界萃取技术的适用范围扩大到极性较大的化合物。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 超临界流体萃取分离法被广泛地用于从各种香料、草本植物、中草药中提取有效成分，如啤酒中常用的酒花中的苦味素，从椰子、花生、大豆及葵花籽中提取植物油等。它也用于除去少量杂质或有害成分，如从咖啡豆中除去对人体有害的兴奋剂咖啡因，用二氧化碳作超临界流体，在70-90，16-27MPa压力下，
11、可将绿咖啡豆中咖啡因的质量分数从0.7%3%降至0.02%，而使咖啡豆的其他成分保持不变。它被用于活化或再生各种吸附剂，如活性碳、分子筛等。它还被应用于环境污染物的分离富集中，例如用该法萃取土壤、沉积物、大气颗粒物等试样中的多环芳烃、多氯联苯、农药、蒽醌、石油烃类、有机胺以及酚类等。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 超临界流体萃取的另一个特点是它能与其他仪器分析方法联用，从而避免了试样转移时的损失，减少了各种人为的偶然误差，提高了方法的精密度和灵敏度。例如，超临界流体萃取一气相色谱、超临界流体萃取一高效液相色谱等。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新
12、的分离和富集方法简介液膜萃取分离法液膜萃取分离法 1 1基本原理基本原理基本原理基本原理 液膜萃取分离法吸取了液一液萃取的特点，又结合了透析过程中可以有效除去基体干扰的长处，具有高效、快速、简便、易于自动化等优点。液膜萃取分离法的基本原理是由浸透了与水互不相溶的有机溶剂的多孔聚四氟乙烯薄膜把水溶液分隔成两相一萃取相与被萃取相；其中与流动的试样水溶液系统相连的相为被萃取相，静止不动的相为萃取相。试样水溶液的离子流入被萃取相与其中加入的某些试剂形成中性分子（处于活化态）。这种中性分子通过扩散溶入吸附在多孔聚四氟乙烯上的有机液膜中，再进一步扩散进入萃取相，一旦进入萃取相，中性分子受萃取相中化学条件的
13、影响又分解为离子（处于非活化态）而无法再返回液膜中去。其结果使被萃取相中的物质离子通过液膜进入萃取相中。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 下页图表示水溶液中的酸根、胺基、金属离子在萃取过程中是如何从被萃取相中通过液膜进入萃取相的。当这些离子流入被萃取相与其中加入的对应试剂，即相应的H+，OH-及配位体作用，分别形成相应的中性分子或络合物溶入有机液膜层，再进一步扩散进入萃取相。当它们进入萃取相时，受萃取相中化学条件的变化，即加入的酸、碱、络合物分解剂的作用，解离为原有的酸根离子、胺基离子、金属离子等，从而使它们不可逆地留在萃取相中。前一页 后一页一些新的分离和富
14、集方法简介一些新的分离和富集方法简介液膜萃取酸根、胺基及金属离子示意图 前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 a.改变被萃取相与萃取相的化学环境如调节溶液的pH就可以把各种pK不同的物质有选择地萃取出来。下页图表示一个含阳离子、阴离子及中性分子的水溶液体系。以萃取阴离子为例，只要把水溶液的pH调至酸性即可进行萃取。此时阴离子和氢离子结合成相应酸的分子，它和溶液中原有的中性分子一起透过液膜进入萃取相，而阳离子则随水溶液流出（下页图a）。进入萃取相的酸分子若遇到碱性环境，则与周围的氢氧根离子作用又释放出
15、阴离子。而中性分子因为自由来往于液膜两侧，随着洗涤过程进入清洗液（下页图b）。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介阴离子（A-）、阳离子（BH+）及中性分子（N）在液膜中分离的示意图（图 a 萃取过程）（图 b 洗涤过程）前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 结果是水溶液中的阴离子从被萃取相中有选择地进入了萃取相，而阳离子与中性分子则被排除在外。同时，适当调节萃取相的pH,也可以使进入萃取相的中性分子有的电离（失去活化态），有的仍保持分子状态（活化态），从而进一步提高了对萃取相中溶质的选择性。对阳离子而言，情形完全相同，只是条件相反。
16、需要强调指出调节pH的目的在被萃取相和萃取相中是不同的，前者是为了使被萃取物质由非活性态转为活性态；而后者则相反，由活性态变为非活化态。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介3 3应用应用应用应用 液膜萃取分离法广泛用于环境试样的分离与富集。例如大气中微量有机胺的分离；水中铜和钴离子的分离；水体中酸性农药的分离测定等。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介毛细管电泳分离法毛细管电泳分离法 1 1基本原理基本原理基本原理基本原理 电泳是荷电物质（离子）在电场中因受吸引或排斥而
17、引起的差速运动，电泳分离是依据在电场中溶质不同的迁移速率。毛细管电泳分离法是在充有流动电解质的毛细管两端施加高电压，利用电位梯度及离子淌度的差别，实现流体中组分的电泳分离。对于给定的离子和介质，淌度是该离子的特征常数，是由该离子所受的电场力与其通过介质时所受的摩擦力的平衡所决定的。带电量大的物质具有的淌度高，而带电量小的物质淌度低。离子的迁移速度分别与电泳淌度和电场强度成正比。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介毛细管电泳基本仪器结构示意图 HV.高压电源（030kV）C.毛细管 E.电极槽 Pt.
18、铂电极 D.在柱检测器S.试样 DA.数据采集处理系统 前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 毛细管电泳分离法中的一个基本的组成部分是电渗流（EOF），电渗流是毛细管壁表面电荷所引起的管内液体的整体流动，它通过对溶质的淌度叠加一个体相流速而影响溶质在毛细管内的停留时间。由于引起流动的推动力沿毛细管均匀地分布，不会在毛细管内形成压力差，所以流速到处接近相同，使电渗流具有平面流型的性质。电渗流可以使几乎所有的物种，不论其电荷性质如何，向同一方向运动。在一般情况下（带负电的毛细管表面），电渗流的方向是由正极到负极。由于电渗流可以比阴离子的淌度大一个数量级，它可将阴离子推
19、向阴极。因此，阴离子、中性物质以及阳离子可以向同一方向“迁移”而在一次分析中得到电泳分离。其中，阳离子迁移与电渗流同向，故其迁移速度最快；中性物质也可以随电渗流迁移但彼此不能分离；而阴离子则因为其迁移与电渗流反向而迁移速度最慢（见下页图）。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介毛细管区带电泳中溶质的差速迁移与EOF的叠加 毛细管电泳分离法具有取样少(110 nL)，分离效率高（柱效达100万理论塔板数），分离速度快(1030 min)，灵敏度高（检测限为10-15 10-20 mol/L）等特点。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介2
20、2操作方式及应用操作方式及应用操作方式及应用操作方式及应用 根据操作方式的不同，毛细管电泳分离法包括毛细管区带电泳（CZE）、胶束电动色谱（MEKC）、毛细管凝胶电泳（CGE）、毛细管等电聚焦电泳（CIEF）和毛细管等速电泳（CITP）。在大多数情况下，可以通过改变缓冲溶液的组成来实现不同的操作方式。a.毛细管区带电泳（CZE）依据溶液的淌度进行分离。其应用主要集中在生物学领域，包括氨基酸分析、多肽分析、离子分析、广泛的对映体分析及许多其它离子态物质的分析。例如，在蛋白质分析领域，毛细管区带电泳被用于进行蛋白质的纯度鉴定、变体筛选和构象研究。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离
21、和富集方法简介 b.胶束电动色谱(MEKC)是由电泳技术与色谱技术的交叉产生，分离机理是基于胶束与中性分子间的相互作用。对于带电的和不带电的物质以及广泛的具有亲水性或疏水性的物质，都可以用该方法进行分离。其应用范围包括氨基酸、核酸、维生素、药物、芳烃化合物和易爆性物质等。c.毛细管凝胶电泳（CGE）它是基于分子尺寸，让溶质在合适的起“分子筛”作用的聚合物内进行电泳分离。毛细管凝胶电泳在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广泛的应用，例如，寡聚核苷酸的纯化、反应基因疗法、DNA测序、原蛋白和SDS结合蛋白的分离等。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介 d.毛细管等电聚焦
22、电泳(CIEF)是依据PI(等电点)进行多肽或蛋白质分离的“高分辨”电泳技术。它被成功地用于测定蛋白质等电点，分离异构体，分离用其它方法难于分离的蛋白质，例如免疫球蛋白和血红蛋白，以及分析稀的生物溶液等。e.毛细管等速电泳（CITP）是“移动界面”的电泳技术，用两种缓冲体系造成使所有被分离的区带等速迁移的状态，待分离区带被夹在前导电解质和尾随电解质之间，可同时分离正离子和负离子。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介微波萃取分离法微波萃取分离法 1 1基本原理基本原理基本原理基本原理 微波萃取分离法是利用微波能强化溶剂萃取的效率，使固体或半固体试样中的某些有机物成分
23、与基体有效地分离，并能保持分析对象的原本化合物状态。微波萃取分离法包括试样粉碎、与溶剂混合、微波辐射、分离萃取液等步骤，萃取过程一般在特定的密闭容器中进行。由于微波能的作用，体系的温度和压力升高；且因微波能是内部均匀加热，热效率高，所以萃取效率大大提高；可实行时间、温度、压力的控制，故能保证萃取分离过程中有机物不发生分解。微波萃取分离法具有快速、节能、节省溶剂、污染小等优点；有利于萃取热不稳定性的物质，并可同时处理多份试样，特别适合于大量试样的快速萃取分离；其适应面宽，较少受被萃取物极性的限制；其仪器设备简单廉价。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介2.2.影响因
24、素影响因素影响因素影响因素 影响微波萃取率的因素很多，例如试样的种类、含量，溶剂，基体的水含量，微波能的强弱，照射时间的长短等。溶剂的选择直接影响到萃取效率，通常极性试样采用极性溶剂；非极性试样采用非极性溶剂；有时用混合溶剂比单一溶剂可以得到更为理想的效果。常用的溶剂有甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二氯甲烷、正己烷、异辛烷、苯和甲苯等。累计辐射时间越长，对提高萃取效率只是在开始时有利，经过一段时间后萃取效率便不再增加。由于每次辐射时间不宜过长，以免溶剂沸腾损失试样，所以必须增加照射次数以提高萃取率，一般为5至7次。前一页 后一页一些新的分离和富集方法简介一些新的分离和富集方法简介3 3应用应用应用应用 微波萃取分离法应用很广。例如，提取土壤和沉积物中的多环芳烃、杀虫剂、除草剂、多种酚类化合物和其他中性、碱性有机污染物；中提取芳香油和其他油类，从薄荷、海欧芹、雪松叶和大蒜中提取天然产物等。提取沉积物中的有机锡化合物、磷酸三烷基酯；提取食品中的某些有机物成分，植物种子和鼠粪中的某些生物活性物质及肉食品中的药物残留；从植物和鱼组织