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1、会计学1检测检测(jin c)CDCDT淋巴细胞的意义续淋巴细胞的意义续第一页，共56页。第1页/共55页第二页，共56页。HIVHIV在人体内在人体内(t ni)(t ni)的复制的复制n n1.1.1.1.吸附及穿入：吸附及穿入：吸附及穿入：吸附及穿入：gp120+CCR5 GP41gp120+CCR5 GP41gp120+CCR5 GP41gp120+CCR5 GP41和膜融合和膜融合和膜融合和膜融合核衣壳穿入宿主细胞核衣壳穿入宿主细胞核衣壳穿入宿主细胞核衣壳穿入宿主细胞n n2.2.2.2.脱衣壳和逆转录：脱衣壳和逆转录：脱衣壳和逆转录：脱衣壳和逆转录：P24+P24+P24+P24+
2、亲环素亲环素亲环素亲环素出壳出壳出壳出壳RNARNARNARNA依赖的依赖的依赖的依赖的DNADNADNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶逆转录逆转录逆转录逆转录cDNAcDNAcDNAcDNAn n3.3.3.3.环化：环化：环化：环化：cDNA cDNA cDNA cDNA 双链环状双链环状双链环状双链环状DNA DNA DNA DNA n n4.4.4.4.整合：双股整合：双股整合：双股整合：双股DNADNADNADNA整合入宿主细胞染色体整合入宿主细胞染色体整合入宿主细胞染色体整合入宿主细胞染色体DNADNADNADNA中中中中前病毒前病毒前病毒前病毒n n5.5.5.5.转录：前病毒转
3、录：前病毒转录：前病毒转录：前病毒DNA RNA mRNA DNA RNA mRNA DNA RNA mRNA DNA RNA mRNA n n6.6.6.6.翻译与装配：翻译与装配：翻译与装配：翻译与装配：GagGagGagGag蛋白与病毒的蛋白与病毒的蛋白与病毒的蛋白与病毒的RNARNARNARNA结合装配成核壳体。结合装配成核壳体。结合装配成核壳体。结合装配成核壳体。n n7.7.7.7.病毒成熟、出芽：芽生方式病毒成熟、出芽：芽生方式病毒成熟、出芽：芽生方式病毒成熟、出芽：芽生方式(fngsh)(fngsh)(fngsh)(fngsh)释放释放释放释放第2页/共55页第三页，共56页。
4、第3页/共55页第四页，共56页。AIDS发病发病(f bng)机理机理 HIV侵入人体后主要攻击的是一种带CD4抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞）。这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞进行性下降，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷。临床表现为各种各样机会(j hu)性感染与肿瘤。第4页/共55页第五页，共56页。AIDS发病发病(f bng)机理机理HIV进入进入(jnr)人体后能选择性地人体后能选择性地侵犯有侵犯有CD4受体的淋巴细胞，受体的淋巴细胞，当病毒颗粒释放出来后，继续当病毒颗粒释放出来后，继续攻击其他攻击其他CD4T淋巴细胞。大量
5、淋巴细胞。大量的的CD4+T淋巴细胞被淋巴细胞被HIV攻击攻击后，首先引起细胞功能的障碍。后，首先引起细胞功能的障碍。HIV病毒在细胞内大量繁殖，导致病毒在细胞内大量繁殖，导致细胞的溶解和破裂。细胞的溶解和破裂。第5页/共55页第六页，共56页。AIDS发病发病(f bng)机理机理3.HIV3.HIV在细胞内复制后，以芽生方在细胞内复制后，以芽生方式释出时可引起细胞膜的损伤。式释出时可引起细胞膜的损伤。由于由于HIVHIV可抑制细胞膜磷脂的合可抑制细胞膜磷脂的合成从而成从而(cng r)(cng r)影响细胞膜的功影响细胞膜的功能，导致细胞病变。能，导致细胞病变。4.HIV4.HIV还可以感
6、染骨髓干细胞导致还可以感染骨髓干细胞导致CD4+TCD4+T淋巴细胞减少。淋巴细胞减少。第6页/共55页第七页，共56页。AIDS发病发病(f bng)机理机理5.5.5.5.当受当受当受当受HIVHIVHIVHIV感染感染感染感染(gnrn)(gnrn)(gnrn)(gnrn)的的的的CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴细胞表面存在的淋巴细胞表面存在的淋巴细胞表面存在的淋巴细胞表面存在的gp120gp120gp120gp120发生表达后，它可以与未感染发生表达后，它可以与未感染发生表达后，它可以与未感染发生表达后，它可以与未感染(gnrn)(gnrn)(gnrn)(gnrn)的的的的
7、CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞CD4CD4CD4CD4分子结合，形成融合细胞，从而分子结合，形成融合细胞，从而分子结合，形成融合细胞，从而分子结合，形成融合细胞，从而改变细胞膜的通透性，引起细胞的溶解和破坏。改变细胞膜的通透性，引起细胞的溶解和破坏。改变细胞膜的通透性，引起细胞的溶解和破坏。改变细胞膜的通透性，引起细胞的溶解和破坏。6.6.6.6.游离的游离的游离的游离的gp120gp120gp120gp120也可以与未感染也可以与未感染也可以与未感染也可以与未感染(gnrn)(gnrn)(gnrn)(gnrn)的的的的CD4+TCD4+TCD4+TC
8、D4+T淋巴细淋巴细淋巴细淋巴细胞结合，作为抗体介导依赖性细胞毒作用的抗原，胞结合，作为抗体介导依赖性细胞毒作用的抗原，胞结合，作为抗体介导依赖性细胞毒作用的抗原，胞结合，作为抗体介导依赖性细胞毒作用的抗原，使使使使CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴细胞成为靶细胞，受淋巴细胞成为靶细胞，受淋巴细胞成为靶细胞，受淋巴细胞成为靶细胞，受K K K K细胞攻击而损伤。细胞攻击而损伤。细胞攻击而损伤。细胞攻击而损伤。第7页/共55页第八页，共56页。AIDS发病发病(f bng)机理机理 HIV HIV HIV HIV感染后一般首先出现感染后一般首先出现感染后一般首先出现感染后一般首先出现C
9、D4TCD4TCD4TCD4T淋巴细胞轻度至淋巴细胞轻度至淋巴细胞轻度至淋巴细胞轻度至中度降低，该细胞总数可持续数年不变，反中度降低，该细胞总数可持续数年不变，反中度降低，该细胞总数可持续数年不变，反中度降低，该细胞总数可持续数年不变，反应病毒为免疫应答所抑制。历经应病毒为免疫应答所抑制。历经应病毒为免疫应答所抑制。历经应病毒为免疫应答所抑制。历经(l jn)(l jn)(l jn)(l jn)一一一一段时间后，段时间后，段时间后，段时间后，CD4+T CD4+T CD4+T CD4+T细胞逐渐进行性下降，表细胞逐渐进行性下降，表细胞逐渐进行性下降，表细胞逐渐进行性下降，表明病毒逐渐逃脱了免疫
10、应答的控制。当明病毒逐渐逃脱了免疫应答的控制。当明病毒逐渐逃脱了免疫应答的控制。当明病毒逐渐逃脱了免疫应答的控制。当CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴细胞一旦下降至淋巴细胞一旦下降至淋巴细胞一旦下降至淋巴细胞一旦下降至200200200200细胞细胞细胞细胞/l/l/l/l或更低时，或更低时，或更低时，或更低时，则就可出现机会性感染。则就可出现机会性感染。则就可出现机会性感染。则就可出现机会性感染。第8页/共55页第九页，共56页。HIVHIV感染的三种感染的三种(sn zhn)(sn zhn)结局结局n n典型进展者：典型进展者：8-10年内免疫功能逐渐下降，年内免疫功能逐渐下降，
11、最后最后(zuhu)发展成为艾滋病。发展成为艾滋病。n n快速进展者：快速进展者：CD4+细胞计数在细胞计数在2-5年内迅速年内迅速下降，抗下降，抗HIV抗体水平很低，抗体水平很低，HIV感染后有感染后有较高的病毒载量。较高的病毒载量。n n长期存活者（长期不进展者）：感染后维持长期存活者（长期不进展者）：感染后维持健康状态健康状态12年以上，且年以上，且CD4+计数维持正常。计数维持正常。第9页/共55页第十页，共56页。HIVinfectionJ.Coffin,XI International Conf.on AIDS,Vancouver,1996艾滋病的病程就象一列迫近悬崖艾滋病的病程就
12、象一列迫近悬崖的火车的火车(huch)病毒载量病毒载量=火车火车(huch)的速的速度度 CD4 计数计数=离悬崖的距离离悬崖的距离第10页/共55页第十一页，共56页。第11页/共55页第十二页，共56页。从从 HIV HIV感染感染(gnrn)(gnrn)发展到艾滋发展到艾滋病病 HIV HIV一旦进入人体，这个人就成为一旦进入人体，这个人就成为HIVHIV感染者。经感染者。经过急性感染期过急性感染期潜伏期，以后潜伏期，以后(yhu)(yhu)逐渐发展逐渐发展成艾滋病病人。处于潜伏期的感染者免疫功能没成艾滋病病人。处于潜伏期的感染者免疫功能没有受到严重破坏，因而没有明显的临床症状。从有受到
13、严重破坏，因而没有明显的临床症状。从感染者到艾滋病病人这段潜伏期时间的长短与感感染者到艾滋病病人这段潜伏期时间的长短与感染途径染途径感染病毒的数量感染病毒的数量感染者的年龄、生活感染者的年龄、生活条件、心理、生理状况等多种因素有关，短则几条件、心理、生理状况等多种因素有关，短则几年，长则年，长则2020年。发达国家较长，发展中国家短些。年。发达国家较长，发展中国家短些。资料表明，经输血传播的潜伏期较短，经性接触资料表明，经输血传播的潜伏期较短，经性接触传播的潜伏期较长。传播的潜伏期较长。第12页/共55页第十三页，共56页。检测检测(jin c)CD4(jin c)CD4、CD8TCD8T淋巴
14、细淋巴细胞的意义胞的意义n n淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细胞，在正常胞，在正常(zhngchng)(zhngchng)机体内各淋巴细胞亚群机体内各淋巴细胞亚群相互作用，维持机体正常相互作用，维持机体正常(zhngchng)(zhngchng)免疫功能。免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列病理变化。可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列病理变化。因此，因此，T T淋巴细胞亚群的免疫分型能够提供有关患淋巴细胞亚群的免疫分型能够提供有关患者免疫状态的重要信息
15、。者免疫状态的重要信息。AIDSAIDS是由是由HIVHIV引起的一组引起的一组综合症，综合症，HIVHIV主要侵犯人主要侵犯人CD4TCD4T淋巴细胞，导致其数淋巴细胞，导致其数量上的减少和功能缺陷，使机体免疫平衡被打破量上的减少和功能缺陷，使机体免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最终导致各种机会感染和肿造成免疫功能低下，最终导致各种机会感染和肿瘤瘤第13页/共55页第十四页，共56页。检测检测检测检测(jin c)CD4(jin c)CD4(jin c)CD4(jin c)CD4、CD8TCD8TCD8TCD8T淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义(续续续续)n nCD4
16、TCD4T淋巴细胞绝对值的检测在淋巴细胞绝对值的检测在HIVHIV感染和艾滋病病感染和艾滋病病人治疗以及病毒治疗疗效方面发挥了重要的作用人治疗以及病毒治疗疗效方面发挥了重要的作用n n1.1.了解机体的免役状态以确定疾病分期了解机体的免役状态以确定疾病分期(fn q)(fn q)n n2.2.监测疾病进程监测疾病进程n n3.3.评估疾病预后评估疾病预后n n4.4.制定抗病毒治疗及机会性感染预防性治疗方案制定抗病毒治疗及机会性感染预防性治疗方案n n评估抗病毒药物疗效评估抗病毒药物疗效第14页/共55页第十五页，共56页。检测检测检测检测(jin c)CD4(jin c)CD4(jin c)
17、CD4(jin c)CD4、CD8TCD8TCD8TCD8T淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义淋巴细胞的意义(续续续续)n n因而，对HIV感染者和AIDS病人定期进行CD4、CD8T淋巴细胞检测具有十分重要的意义。n n美国疾病预防控制中心就是(jish)以此为基础制订了HIV感染者/AIDS病人的诊断和分类标准，目前国内外仍被采纳应用。第15页/共55页第十六页，共56页。规范规范(gufn)的的AIDS治疗治疗 目目前前我我国国HIVHIV治治疗疗范范围围逐逐渐渐扩扩大大，国国家家示示范范区区大大批批(dp)(dp)的的治治疗疗已已经经开开始始。我我省省也也于于20042004年
18、年启启动动了了对对AIDSAIDS的的治治疗疗。但但是是由由于于检检测测费费用用昂昂贵贵，大大批批(dp)(dp)治治疗疗中中50%50%以以上上病病人人不不进进行行规规范范检检测测.一一旦旦出出现现耐耐药药病病人人，后后果果将将不不堪堪设设想想。所所以以规规范范的的实实验验室室检检测测是是非非常常重重要的一个环节。要的一个环节。第16页/共55页第十七页，共56页。实实 验验 室室 条条 件件 1.人员 进行HIV感染者和病人CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受(jishu)过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。第17页/共55页第十八页，共56
19、页。实实 验验 室室 条条 件件(续续)设施和设备样品处理区：生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转(xunzhun)震荡器、精确移液器（5ul50u1、20u1200u1、200u11000u1)。流式细胞仪检测区：流式细胞仪第18页/共55页第十九页，共56页。实实 验验 室室 条条 件件(续续)功能分区功能分区 实验室应分为样品处理区和流式细胞仪检测区，各区的实验室应分为样品处理区和流式细胞仪检测区，各区的功能是：功能是：样品处理区应达到生物安全样品处理区应达到生物安全级实验室级实验室要求要求(yoqi)(yoqi)，用于样品处理、流式检测样品制备。流式，用于样品处理、流式检测样品制备。
20、流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。第19页/共55页第二十页，共56页。方方 法法n n目前用于CD4和CD8T淋巴细胞计数的检测方法分为自动检测方法和手工(shugng)操作法。自动检测方法包括流式细胞仪（主要有多平台三级程序法和单平台一步法）和专门的细胞计数仪。手工(shugng)操作法包括几种手工(shugng)操纵试验，需要显微镜或酶联免疫试验设备。第20页/共55页第二十一页，共56页。方方 法法n n检测CD4T淋巴细胞数的标准方法为流式细胞仪，可得出CD4,CD8等淋巴细胞及比值。为确保检测的准确性，应建立内部质量(zhling)控制
21、及参加国家室间评价。第21页/共55页第二十二页，共56页。流式细胞仪流式细胞仪 (FACS Calibur,BD)第22页/共55页第二十三页，共56页。简易简易简易简易(ji(ji ny)ny)流式细胞仪器（流式细胞仪器（流式细胞仪器（流式细胞仪器（FACSCount,FACSCount,BD)BD)第23页/共55页第二十四页，共56页。免疫免疫(miny)指标的检测指标的检测 CD4/CD3 CD8/CD3 CD3 CD4/CD8第24页/共55页第二十五页，共56页。全省全省CD4CD4流氏细胞流氏细胞(xbo)(xbo)仪分布仪分布n n山西省艾滋病确证(qu zhn)中心实验室n
22、 n运城市艾滋病确证(qu zhn)实验室n n临汾市艾滋病确证(qu zhn)实验室n n太原市艾滋病确证(qu zhn)实验室n n大同市艾滋病确证(qu zhn)实验室n n长治市艾滋病初筛中心实验室第25页/共55页第二十六页，共56页。CD4CD4细胞样本采集细胞样本采集(cij)(cij)运送运送检测检测要求要求第26页/共55页第二十七页，共56页。1.成功的临床治疗效果评定(pngdng)依赖于有保障的标本采集、保存、检测，以及数据处理等等。在研究前期就要有计划的设计研究项目，确定所需要的标本类型。比如：所有的血液标本是否需要抗凝处理、是否需要无菌等 标标 本本 采采 集集 的
23、的 要要 求求第27页/共55页第二十八页，共56页。标本采集标本采集(cij)(cij)的要求的要求(续续)2.2.2.2.采采采采集集集集的的的的标标标标本本本本应应应应该该该该长长长长期期期期(chngq)(chngq)(chngq)(chngq)保保保保存存存存，至至至至少少少少要要要要求求求求保保保保存存存存至至至至此此此此项项项项目目目目完完完完成成成成。血血血血液液液液标标标标本本本本可可可可用用用用于于于于CD4TCD4TCD4TCD4T淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞 、抗抗抗抗原原原原、抗抗抗抗体体体体检检检检测测测测，病病病病毒毒毒毒分分分分离，离，离，离，PCRPCRP
24、CRPCR检测检测检测检测.3.3.3.3.血血血血液液液液标标标标本本本本应应应应尽尽尽尽量量量量在在在在24242424小小小小时时时时内内内内处处处处理理理理，尤尤尤尤其其其其是是是是CD4TCD4TCD4TCD4T淋巴细胞检测、病毒分离，淋巴细胞检测、病毒分离，淋巴细胞检测、病毒分离，淋巴细胞检测、病毒分离，PCRPCRPCRPCR检测检测检测检测.第28页/共55页第二十九页，共56页。标标 本本 的的 采采 集集(续续)选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。用于血液学检测的抗凝剂用于血液学检测
25、的抗凝剂 K3EDTA K3EDTA（1.50.15mg/ml1.50.15mg/ml血液血液)。枸橼酸钠枸橼酸钠 (3)(3)肝素肝素 在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过(chogu)30h(chogu)30h，不检测超出抗，不检测超出抗凝时间范围的样品。凝时间范围的样品。用于流式细胞仪的抗凝剂主要是用于流式细胞仪的抗凝剂主要是K3EDTAK3EDTA 第29页/共55页第三十页，共56页。标标本本(biobn)的的采采集集第30页/共55页第三十一页，共56页。标标 本本 的的 采采 集集采集用品采集用品采血管采血管 真空、负压真空
26、、负压(f y)(f y)抗凝（抗凝（EDTAEDTA或枸橼酸钠）或枸橼酸钠）无菌无菌针头针头 蝶形针头蝶形针头第31页/共55页第三十二页，共56页。采集用品：采集用品：采集用品：采集用品：采血套管采血套管采血套管采血套管固定采血管位置，方便操作；保护固定采血管位置，方便操作；保护固定采血管位置，方便操作；保护固定采血管位置，方便操作；保护(boh)(boh)(boh)(boh)操作者操作者操作者操作者的安全的安全的安全的安全注意：切勿将采血针头的套管回套！注意：切勿将采血针头的套管回套！注意采血后器具的放置注意采血后器具的放置(fngzh)(fngzh)、消毒、处理、消毒、处理 标标 本本
27、 的的 采采 集集(续续)第32页/共55页第三十三页，共56页。标本标本(biobn)(biobn)的采集的采集(续续)采血后应立即握住试管两端，颠倒混匀多次，将血液与抗凝剂混匀，以防止凝采血后应立即握住试管两端，颠倒混匀多次，将血液与抗凝剂混匀，以防止凝固。固。准备适当数量的样品管准备适当数量的样品管当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在同一实验室内进行当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在同一实验室内进行(jnxng)(jnxng)时，用一个装有时，用一个装有K3EDTAK3EDTA的试管即可。的试管即可。对所有样品编号，并写明日期和时间。对所有样品编号，并写明日期和时间
28、。第33页/共55页第三十四页，共56页。标标 本本 的的 运运 输输在在标标本本运运输输过过程程中中，应应确确保保标标本本能能够够及及时时、准准确确运运输输到到指指定定地地点点。要要求求提提前前与与对对方方联联系系，确确定定时时间间，对对方方应应提提前前做做好好相相关关实实验验的的准准备备工工作作，尽尽快快进进行行标标本本处处理理运运输输的的所所有有标标本本都都应应有有(yn yu)送送检检单单给给接接受受样样品品的实验室。每张送检单都应详细填写所要求的内容的实验室。每张送检单都应详细填写所要求的内容.第34页/共55页第三十五页，共56页。样样 品品 的的 运运 输输 运运 送送(续续)n
29、 n尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。n n如需运送样品到其它地点时，应将装样品的试管放于一个防漏的如需运送样品到其它地点时，应将装样品的试管放于一个防漏的容器中，并将此容器放于一个装有吸水性物质的指罐中，以防止容器中，并将此容器放于一个装有吸水性物质的指罐中，以防止震动并可吸收震动并可吸收(xshu)(xshu)所有试管破裂漏出的血液。盖紧指罐，用所有试管破裂漏出的血液。盖紧指罐，用橡皮带系紧。橡皮带系紧。n n应选择特定的方案，并且安排合适的时间和运输样品。应选择特定的方案，并且安排合适的时间和运输样品。第35页/共55页第三十六页，共56页。
30、样样 品品 的的 接接 收收 样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。不可不可(bk)(bk)检测溶血或结冰样品。检测溶血或结冰样品。不可不可(bk)(bk)检测凝血和乳糜的样品。检测凝血和乳糜的样品。如果样品的采集时间已超过如果样品的采集时间已超过48H48H，不于接收，不于接收.第36页/共55页第三十七页，共56页。标标 本本 的的 处处 理理一般一般(ybn)(ybn)采集采集HIV-1HIV-1感染者全血感染者全血10-20ml10-20ml 血浆血浆(xujing)（含有血小板）（含有血小板）淋巴细胞层淋巴细胞层红细胞层红细胞层1 抗抗 凝凝
31、 2 无无 菌菌3 室室 温温4 24h内处理内处理第37页/共55页第三十八页，共56页。实现实现(shxin)CD4,CD8,CD3 绝对计数绝对计数FACSCountFACSCount结果可信度：结果可信度：绝对计数绝对计数质控质控内置错误自动内置错误自动(zdng)报警报警第38页/共55页第三十九页，共56页。FACSCountFACSCount内置微处理器实现(shxin)数据自动分析自动打印(d yn)质控与病人的检测结果简单(jindn)易用的系统控制面板配套的样本制备工作台样本制备方法简捷，避免细胞损失第39页/共55页第四十页，共56页。FACSCount 试剂试剂(shj
32、)与对照与对照FACSCount 工作台工作台FACSCount 完善完善(wnshn)的系统的系统第40页/共55页第四十一页，共56页。每管加入 50ml 全血加入，混匀，室温避光孵育1h无需溶血1每管加入 50ml 固定液，混匀，室温避光孵育30min无需离心洗涤2FACSCount上机检测.无需血球计数仪，直接得到绝对值结果33步测定步测定CD4,CD8，CD3 绝对绝对(judu)计计数数第41页/共55页第四十二页，共56页。预配试剂预配试剂(shj)FACSCount 完善完善(wnshn)的的系统系统第42页/共55页第四十三页，共56页。FACSCount 完善完善(wnsh
33、n)的系统的系统检测试剂盒组成（检测试剂盒组成（5050人份人份(rnfn)/(rnfn)/盒）盒）荧光试剂荧光试剂2 2个组合个组合/人份人份(rnfn)(rnfn)CD4PE/CD3PE-CY5CD4PE/CD3PE-CY5CD8PE/CD3PE-CY5CD8PE/CD3PE-CY5固定液固定液效期效期 28 0C 28 0C储存储存6 6个月个月第43页/共55页第四十四页，共56页。FACSCount 完善完善(wnshn)的系统的系统n n质控试剂盒（质控试剂盒（5050人份人份(rnfn)/(rnfn)/盒）盒）n n零，低，中，高零，低，中，高 4 4种靶值微球种靶值微球n n效
34、期效期 28 0C 28 0C储存储存1 1个月个月第44页/共55页第四十五页，共56页。FACSCount3步测定步测定(cdng)CD4,CD8，CD3 绝绝对计数对计数第45页/共55页第四十六页，共56页。每管加入 50ml 全血加入，混匀，室温(sh wn)避光孵育1h无需溶血1FACSCount第46页/共55页第四十七页，共56页。FACSCount每管加入 50ml 固定(gdng)液，混匀，室温避光孵育30min无需离心洗涤2第47页/共55页第四十八页，共56页。FACSCount上机检测(jin c).无需血球计数仪，直接得到绝对值结果3FACSCount第48页/共5
35、5页第四十九页，共56页。打印打印(d yn)结果结果 对照对照 病人标本病人标本FACSCount 分析分析(fnx)第49页/共55页第五十页，共56页。实验实验(shyn)资料的记录资料的记录n n实验(shyn)应及时、准确地记录结果。n n实验(shyn)记录中应包括以下内容：日期、操作者、所有样品、实验(shyn)内容、过程（步骤）、结果及有无事故等。n n整个实验(shyn)室的实验(shyn)资料要统一有专人负责，按固定格式记录在案。n n计算机生成的实验(shyn)结果，存档备案：定期拷贝计算机结果文档，备案保存。第50页/共55页第五十一页，共56页。HIV/AIDS CD
36、4HIV/AIDS CD4检测时间检测时间n n一经抗-HIV确证的HIV/AIDS，应立即进行CD4细胞检测。（基线）n nCD4细胞数200个/UL,每半年进行CD4细胞计数检测。n nCD4细胞数200个/UL，立即进入(jnr)治疗。n n进入(jnr)治疗的AIDS,严格按照3月、6月、12月、18月、24月时间来进行采血检测。第51页/共55页第五十二页，共56页。CD4CD4细胞检测报告细胞检测报告(bogo)(bogo)时间时间n n经CD4流式细胞仪细胞检测后，一周内将结果反馈送检(sn jin)单位第52页/共55页第五十三页，共56页。CD4CD4细胞细胞(xbo)(xbo)检测注意事项检测注意事项n n3.运送样本要求(yoqi)，春、秋季室温（18C23C），夏季冷藏，冬季保温。n n4.样本量应按负压管的要求(yoqi)采集。n n5.溶血、乳糜和凝血的样本不于接收。n n6.送检表和样本不得放在同一容器内。第53页/共55页第五十四页，共56页。谢谢谢谢(xi xie)各位各位第54页/共55页第五十五页，共56页。感谢您的观看感谢您的观看(gunkn)。第55页/共55页第五十六页，共56页。