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1、2023/5/13蛋白质组学技术 Proteomic Technologyu蛋白质组（蛋白质组（proteomeproteome）：由一个基因组，或：由一个基因组，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质一个细胞、组织表达的所有蛋白质(19951995年年Marc WilkinsMarc Wilkins提出提出)。u蛋白质组学（蛋白质组学（proteomicsproteomics）：）：研究生物体全套研究生物体全套蛋白质的组成、结构与功能的科学。蛋白质的组成、结构与功能的科学。主要内容第一节 蛋白质凝胶电泳与检测 一、蛋白质凝胶电泳（PAGE）二、蛋白质免疫印迹技术（Western Blotting）
2、第一节第一节 蛋白质凝胶电泳与检测蛋白质凝胶电泳与检测 在溶液中，在溶液中，带电粒子带电粒子在外加电在外加电场的作用下，向场的作用下，向相反相反电极方向电极方向移动的现象，称为移动的现象，称为。一、电泳概念二、电泳的一般原理二、电泳的一般原理 许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所在介质的pH。在某一pH溶液中，混合物中各组分电荷性质、电荷数量不同，加之其分子量不同，方向和速度也各异，而达到分离鉴定各组分的目的。泳动率(mobility)-在单位电场强度时的泳动速度在单位电场强度时的泳动速度.M=Q Q 6rQQ：颗粒上的有效电荷颗粒上的有效电荷r r：颗粒半径：颗粒半
3、径：颗粒半径：颗粒半径；缓冲液黏度；缓冲液黏度；缓冲液黏度；缓冲液黏度三、电泳分类 根据有无固体支持物，可分为两大类根据有无固体支持物，可分为两大类:(1)(1)界面电泳界面电泳-在溶液中进行在溶液中进行 (2)(2)区带电泳区带电泳-在在支持物支持物上进行，通电后各种带上进行，通电后各种带 电粒子可以形成许多清晰的电粒子可以形成许多清晰的区带区带。分离效果分离效果远远 比界面电泳比界面电泳好好 区带电泳：是样品物质在一惰性支持物上进行电泳的过程是样品物质在一惰性支持物上进行电泳的过程。在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶样品溶液液，然后在介质上加，然
4、后在介质上加电场电场，带电颗粒在支持介质上或，带电颗粒在支持介质上或支持介质内支持介质内迁移迁移，在电泳过程中，不同的离子成分在，在电泳过程中，不同的离子成分在缓冲液系统中分离成独立的缓冲液系统中分离成独立的区带区带，可用，可用染色染色方法显示方法显示出来。出来。根据支持物的不同，常用的区带电泳可分为：1.纸上电泳 2.醋酸纤维素薄膜电泳 3.琼脂糖凝胶电泳 4.聚丙烯酰胺凝胶电泳 等 按按实验装置实验装置分类分类:纸电泳纸电泳 薄膜电泳薄膜电泳 凝胶电泳凝胶电泳 毛细管电泳毛细管电泳垂直板凝胶电泳垂直板凝胶电泳毛细管电泳毛细管电泳四、电泳仪 -提供稳定直流电源的装置 根据仪器的电压范围将其分
5、成3类:(1)常压电泳仪(600V)(2)高压电泳仪(3000V)(3)高压电泳仪(3000050000V)五、常用电泳技术五、常用电泳技术（1）醋酸纤维素薄膜电泳（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE）（3）SDS-PAGE（4）PAGE等电点聚焦（5）琼脂糖凝胶电泳（6）毛细管电泳（一）（一）（一）（一）醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳 采用采用醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳法。为支持物的电泳法。血清蛋白质的血清蛋白质的等电点等电点一般低于一般低于pH7.0，在，在pH8.
6、6的条件下电泳时，由于其等电点、分的条件下电泳时，由于其等电点、分子量和分子形状的不同，向子量和分子形状的不同，向正极移动正极移动的速的速度亦异，从而分离成数条度亦异，从而分离成数条区带区带。经染色后。经染色后由正极向负极依次为清蛋白、由正极向负极依次为清蛋白、1-球蛋白、球蛋白、2-球蛋白、球蛋白、-球蛋白、球蛋白、-球蛋白五条带。球蛋白五条带。A 清蛋白清蛋白清蛋白清蛋白 1 1 1 1 2 2 2 2 清蛋白清蛋白清蛋白清蛋白 1 1 2 2 B血血 清清 蛋蛋 白白 电电 泳泳 图图 谱谱（二）蛋白质凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electropho
7、resis,PAGE）是目前分离蛋白质最可靠的技术之一。1、PAGE 原理u聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（acrylamide，Acr）单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（N.N methylene bis-acrylamide，Bis）通过化学催化剂过硫酸铵（ammonium persulfate，AP）以及加速剂四甲基乙二胺（TEMED）催化聚合作用形成的多孔三维网状结构。在此结构中在电场作用下，根据分子量大小，形状或电荷将被分离物质各组分分开。uAcr和Bis有神经毒性，可经皮肤、呼吸道等吸收，故操作时要注意保护。2、蛋白质的SDS-PAGESDS-PAGE是在蛋白质样品中加入十二烷基硫酸钠（
8、SDS）和-巯基乙醇。SDS是一种离子型去垢剂,带大量负电荷，能断裂分子内和分子间的氢键，使蛋白质去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。强还原剂-巯基乙醇使半胱氨酸残基间的二硫键断裂，从而破坏蛋白质的三、四级结构。SDS变性蛋白质，所带负电荷远超天然蛋白质，依靠蛋白质分子量差异分离蛋白质。PAGE示意图示意图上电极液下电极液不连续缓冲系统不连续缓冲系统凝胶的浓度不同（浓缩胶4%，分离胶12%），缓冲液pH不同（6.8,8.9）。具有电荷效应、分子筛效应和浓缩效应。浓缩胶缓冲液为pH6.8的Tris-HCl，浓度小，孔径大。分离胶缓冲液为pH8.8 Tris-HCl，浓度大，孔径小。浓缩胶分离胶S
9、DS-PAGESDS-PAGE测定蛋白质分子量测定蛋白质分子量当蛋白质的分子量在15200kDa时，蛋白质的电泳迁移率与蛋白质分子量的对数呈线性关系：lgMr=K-bx lgMr=K-bx (Mr(Mr为分子量，为分子量，k,bk,b为常数，为常数，x x为相对迁移率）为相对迁移率）将已知分子量的标准蛋白质在SDS-PAGE中的电泳迁移率对分子量的对数作图，即可得到一条标准曲线。只要测得未知蛋白质在相同条件下的电泳迁移率，就能根据标准曲线求得其分子量。蛋白质分子量的测定蛋白质分子量的测定相对迁移率相对迁移率=蛋白质分子的迁移距离（蛋白质分子的迁移距离（cm)/染料迁移距离（染料迁移距离（cm)
10、电泳槽装置电泳槽装置 梳子梳子电泳槽电泳槽 本本 体体滑滑块块滑滑块块螺栓螺栓电泳槽中的玻璃夹心电泳槽中的玻璃夹心制胶架制胶架凸轮凸轮66kDaM 1 2 3 4 597kDa31kDa图：图：原核重组蛋白GST-SGK2表达的SDS-PAGE分析鉴定M:蛋白质中低分子量标准 1.空质粒pGEX-4T-3转化的BL21菌裂解液上清2.经IPTG诱导空质粒pGEX-4T-3转化的BL21菌裂解液上清，3.重组质粒PGEX4T-3-SGK2转化的BL21菌裂解液上清4.经IPTG诱导重组质粒PGEX4T-3-SGK2转化的BL21菌裂解液上清，5.纯化的GST-SGK2蛋白（二）非变性蛋白质凝胶电
11、泳不加入SDS和-巯基乙醇巯基乙醇蛋白质保持生物活性和天然构象，用于酶鉴定、同工酶分析等。明胶酶谱实验（非变性明胶酶谱实验（非变性PAGE）二、凝胶上蛋白质的固定与检测二、凝胶上蛋白质的固定与检测考马斯亮蓝染色考马斯亮蓝染色银染色银染色荧光染色荧光染色其他如：负染法、放射自显影法等其他如：负染法、放射自显影法等 是是最常用最常用的蛋白质染色方法之一的蛋白质染色方法之一 考马斯亮蓝与蛋白质非共价键结合，形成复合物。考马斯亮蓝与蛋白质非共价键结合，形成复合物。包括包括R-150R-150、R-250R-250、R350R350、G250G250等。等。检测限度为检测限度为3030300ng300n
12、g蛋白质蛋白质 优点优点：操作简便，无毒，：操作简便，无毒，重复性好重复性好，染色后背景和对比度好，染色后背景和对比度好，不影响后续质谱鉴定。不影响后续质谱鉴定。缺点缺点：灵敏度偏灵敏度偏低低，是银染法的是银染法的1/1001/100，对对低丰度蛋白质低丰度蛋白质难以显色难以显色（一）考马斯亮蓝染色（一）考马斯亮蓝染色原原理理：在在酸酸性性硝硝酸酸银银溶溶液液中中蛋蛋白白质质与与银银离离子子发发生生作作用用，然然后后在在碱碱性性pHpH条条件件下下，银银离离子子被被甲甲醛醛还还原原成成银银颗颗粒粒沉沉淀在蛋白质上而呈显棕黑色。淀在蛋白质上而呈显棕黑色。优点：优点：灵敏度高灵敏度高，试剂盒可达，
13、试剂盒可达0.1ng/0.1ng/蛋白点。蛋白点。缺点：缺点：染色深浅与蛋白质量不成比例染色深浅与蛋白质量不成比例 操作繁琐操作繁琐 重复性不如考染重复性不如考染 存在存在“雪崩雪崩”效应效应（二）银染色（二）银染色银染色条带的深浅与蛋白质的量不成比例，银染色条带的深浅与蛋白质的量不成比例，不能定量蛋白质的多少。不能定量蛋白质的多少。(三三)荧光染料染色荧光染料染色是一种较理想的蛋白质染色方法是一种较理想的蛋白质染色方法商品化的荧光染料：商品化的荧光染料：SYPRO Red、SYPRO Orange,SYPRO Tangerine优点：优点：操作简便，操作简便，灵敏度高灵敏度高（1 12ng/
14、2ng/蛋白点），蛋白点），与质谱检测完全相容。与质谱检测完全相容。缺点：缺点：价格昂贵价格昂贵 蛋白质印迹技术蛋白质印迹技术 Western blottinguBlotting(Blotting(印迹法）：是指将印迹法）：是指将样品样品转移到转移到固固相载体相载体上，而后利用相应的上，而后利用相应的探针探针或者或者抗体抗体来来检测样品的一种方法。检测样品的一种方法。uSouthern印迹，将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。uNorthern印迹，将RNA变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上的过程。u免疫印迹，是70年代末80年代初发展起来的一项蛋白质测定技术。West
15、ern blot，是将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，转移至到固相载体(如硝酸纤维素薄膜)上，用抗体通过免疫学反应检测目的蛋白，分析基因的表达程度。Western Blotting 的目的的目的u检测样品中特异性蛋白质是否存在检测样品中特异性蛋白质是否存在（定性分析）（定性分析）u对特异性蛋白进行半定量分析（定量对特异性蛋白进行半定量分析（定量分析）分析）一、蛋白质印迹技术的原理一、蛋白质印迹技术的原理经经聚丙烯酰胺凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEPAGE）分离的蛋白质样品，分离的蛋白质样品，转移到转移到固相载体固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体
16、以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原抗原，与对应的，与对应的抗抗体体起免疫反应，再与起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过起反应，经过底物显色底物显色或或放射自显影放射自显影进行检测。进行检测。特点：特点：Western blottingWestern blotting结合了凝结合了凝胶电泳的胶电泳的高分辨率高分辨率和固相免疫测定和固相免疫测定的的特异敏感特异敏感等多种特点，可检测到
17、等多种特点，可检测到低至低至1 15ng5ng（最低可到（最低可到1010100pg100pg）的靶蛋白。的靶蛋白。Western blotting流程流程底物显色底物显色抗体杂交抗体杂交封闭封闭样品制备样品制备转膜转膜SDS-PAGESDS-PAGE上半部分实验上半部分实验下半部分实验下半部分实验二、蛋白质印迹技术方法特点（步骤）二、蛋白质印迹技术方法特点（步骤）1 1、蛋白质样品的制备、蛋白质样品的制备 （1 1）直接用加样缓冲液裂解细胞）直接用加样缓冲液裂解细胞 （2 2）制备细胞蛋白质提取液）制备细胞蛋白质提取液2 2、SDS-PAGE3、蛋白质的电转移、蛋白质的电转移4、靶蛋白的免疫
18、学检测、靶蛋白的免疫学检测（封闭、靶蛋白与（封闭、靶蛋白与第一抗体反应、第二抗体反应、显色）第一抗体反应、第二抗体反应、显色）转移膜的选择转移膜的选择最常用于最常用于Western BlotWestern Blot的转移膜主要是的转移膜主要是硝酸硝酸纤维素（纤维素（Nitrocellulose，NC）膜）膜和聚偏二氟和聚偏二氟乙烯（乙烯（Polyvinylidene Fluoride,PVDF）膜，）膜，此外也有用尼龙膜、此外也有用尼龙膜、DEAEDEAE纤维素膜做蛋白印纤维素膜做蛋白印迹。尼龙膜和迹。尼龙膜和NCNC膜的特点相似膜的特点相似,主要用于核酸主要用于核酸杂交。杂交。转膜系统转膜系
19、统湿转湿转半干转半干转湿转操作步骤：湿转操作步骤：1 1、起胶、起胶：将凝胶从玻璃板中取出，切除浓缩胶及溴酚蓝：将凝胶从玻璃板中取出，切除浓缩胶及溴酚蓝下部的分离胶，剩下的含有目的蛋白的分离胶浸泡于下部的分离胶，剩下的含有目的蛋白的分离胶浸泡于转膜缓冲液中，防止胶凝固、变形。转膜缓冲液中，防止胶凝固、变形。2 2、润湿、润湿：准备：准备2 2张张Whatman 3#Whatman 3#滤纸、滤纸、1 1张张NCNC膜，尺寸与凝膜，尺寸与凝胶大小相仿（滤纸与胶一样大，膜比胶大一些），胶大小相仿（滤纸与胶一样大，膜比胶大一些），NCNC膜先放入水中膜先放入水中3 3分钟，再放入分钟，再放入转膜缓冲
20、液转膜缓冲液中中1010分钟。分钟。（若用（若用PVDFPVDF膜，应先在膜，应先在100%100%甲醇中浸泡，否则很难润甲醇中浸泡，否则很难润湿。甲醇可反复利用。）湿。甲醇可反复利用。）转膜缓冲液：含转膜缓冲液：含20%V/V20%V/V的甲醇，其作用是去除的甲醇，其作用是去除SDS-SDS-蛋白质复合物中的蛋白质复合物中的SDSSDS3 3、三明治的制作、三明治的制作：按顺序在转移夹内放置预先经：按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、转移缓冲液浸泡的海绵、1 1层层Whatman3#Whatman3#滤纸、凝滤纸、凝胶、硝酸纤维素膜、胶、硝酸纤维素膜、1 1层层Whatman3#
21、Whatman3#滤纸、海绵，滤纸、海绵，保证每层之间没有气泡。组装顺序：保证每层之间没有气泡。组装顺序：转膜夹黑色转膜夹黑色面（负极）面（负极）海绵垫海绵垫滤纸滤纸胶胶 膜膜滤纸滤纸海绵垫海绵垫红色面（正极）红色面（正极）切记：切记：每层之间用滴管每层之间用滴管/玻棒将其中的气泡全部玻棒将其中的气泡全部赶出，绝不允许气泡存在！赶出，绝不允许气泡存在！4 4、转膜、转膜：将转移夹放入转移槽，加入：将转移夹放入转移槽，加入4 4 预冷的预冷的转膜缓冲液，将凝胶面与负极相连，硝酸纤维素转膜缓冲液，将凝胶面与负极相连，硝酸纤维素膜与正极相连。膜与正极相连。凝胶：凝胶：1 1）氨基黑）氨基黑10B 1
22、0B 脱色快，背景低脱色快，背景低 2)2)考马斯亮蓝考马斯亮蓝 脱色慢，背景高脱色慢，背景高NCNC膜：膜：丽春红染色，可脱色丽春红染色，可脱色 以便进行氨基酸分析以便进行氨基酸分析 转膜后检测（此步可省略）转膜后检测（此步可省略）封闭封闭S为避免作为检测试剂的特异性为避免作为检测试剂的特异性第一抗体第一抗体与膜与膜发生非特异性结合，使非特异性背景提高，发生非特异性结合，使非特异性背景提高，需对膜上的蛋白质潜在结合位点进行封闭处需对膜上的蛋白质潜在结合位点进行封闭处理。一般封闭液的有效浓度理。一般封闭液的有效浓度不超过不超过5%5%。S常用常用5%5%脱脂奶粉脱脂奶粉（室温孵育（室温孵育1-
23、2h1-2h或或44过夜）过夜）一抗、二抗孵育一抗、二抗孵育把把PVDFPVDF膜放在密闭塑料袋或者培养皿中，根据膜面积膜放在密闭塑料袋或者培养皿中，根据膜面积以以0.1mL/cm0.1mL/cm2 2的量的量加入一抗溶加入一抗溶液，摇床上液，摇床上平缓摇动平缓摇动，于于室温孵育室温孵育1-21-2小时或小时或44过夜过夜。TBSTTBST漂洗膜漂洗膜3 3次，每次次，每次10min10min。加入加入用封闭液配制的用封闭液配制的二抗二抗（按比例稀释按比例稀释），摇床上缓），摇床上缓慢摇动，于慢摇动，于室温孵育室温孵育1-21-2小时小时。用用TBSTTBST漂洗膜漂洗膜3 3次，每次次，每次
24、10min10min。室温：室温：25（冬天应适当延长时间）（冬天应适当延长时间）显显 色色1 1、放射自显影、放射自显影2 2、底物化学发光（、底物化学发光（ECLECL）HRPHRP+H H2 2O O2 23 3、底物、底物DABDAB显色显色 HRPHRP催化底物催化底物3 3，3-3-二氨基联苯胺二氨基联苯胺（DABDAB）与）与H H2 2O O2 2反应产生反应产生棕色棕色条带。条带。Western BlotWestern Blot结果分析结果分析目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。Western Blot结果分析软件Gel-Pro
25、Analyzer 4 绿色版（附动画演示教程）http:/ Western blot方法检测方法检测N24P55PIK对对Akt 表达的影响表达的影响1:231/pEGFPC1;2:MDA-MB-231;3:231/GFP-N24Western Blot常见问题分析常见问题分析所用试剂3030丙烯酰胺贮备液：丙烯酰胺贮备液：29.2g 29.2g 丙烯酰胺，丙烯酰胺，0.8g 0.8g 甲叉双丙烯酰胺，加甲叉双丙烯酰胺，加重蒸水至重蒸水至100ml100ml。浓缩胶缓冲液：浓缩胶缓冲液：0.5mol/L Tris-HCl0.5mol/L Tris-HCl，pH6.8pH6.8。分离胶缓冲液：分
26、离胶缓冲液：3mol/L Tris-HCl3mol/L Tris-HCl，pH8.9pH8.9。1010过硫酸铵过硫酸铵(w/v)(w/v)：临用前用蒸馏水配制。临用前用蒸馏水配制。1010SDS(w/v)SDS(w/v)1010TEMEDTEMED电极缓冲液：甘氨酸电极缓冲液：甘氨酸 14.1g14.1g，SDS 0.5gSDS 0.5g，Tris 3gTris 3g，加水至，加水至1000ml1000ml，pH8.3pH8.3。每组配。每组配500ml500ml样品缓冲液：样品缓冲液：0.1mol/L Tris-HCl0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，缓冲液，pH6.8pH6.8，
27、2020甘油，甘油，4 4SDSSDS，1010巯基乙醇，巯基乙醇，0.0050.005溴酚兰溴酚兰考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250R250染色液：考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝R250 0.25gR250 0.25g，30%30%乙醇，乙醇，10%10%冰乙冰乙酸。酸。脱色液：乙醇脱色液：乙醇6ml6ml，冰乙酸，冰乙酸2ml2ml，加水至，加水至20ml20ml 灌胶前的准备 将两块玻璃板洗净然后，嵌入电泳装置的凹槽中，长玻板朝外，短玻板朝内，两块玻璃板之间就形成了凝胶室。合上滑块，拧螺栓锁紧凝胶室。然后将以上组合放入制胶架，插入并旋转凸轮，加入蒸馏水检查漏水否后，倾去水。即可灌胶。5聚丙烯酰胺
28、凝胶的配制聚丙烯酰胺凝胶的配制胶液浓度%分离胶 浓缩胶 12%4%30%贮备液(ml)3.20.53分离胶缓冲液(ml)2浓缩胶缓冲液(ml)1.0重蒸水(ml)2.662.3610%SDS(ul)8040混匀后再加入以下试剂：10%TEMED(ul)804010过硫酸铵(ul)4020总体积(ml)84催化聚合，最后时刻加入催化聚合，最后时刻加入灌 胶 分离胶的制备：将配制好的分离胶液(最后时刻加入催化剂)倒入两块玻璃板之间的空腔中，待胶液加至距短玻璃板顶端约3cm处(预先标记)时停止灌胶，然后在胶液表面上小心加入厚约0.5cm的水层，以保持分离胶面平整，同时隔绝空气（空气中的氧对凝胶的聚合
29、有阻碍作用）。待凝胶和水之间出现清晰折射界面时，说明分离胶已聚合，大约需30min完成聚合。浓缩胶的制备：倒去分离胶上层的水，用滤纸吸干，将配制好的浓缩胶液加到分离胶上，至接近短玻璃板的顶端，插上样品梳，放置30-60min待其聚合。蛋白样品的制备5ul5ul人血清人血清+70ul+70ul水水+25ul+25ul样品缓冲液（样品缓冲液（4x)4x)密封煮沸密封煮沸5 5分钟分钟10000rpm10000rpm离心离心2 2分钟分钟取上清取上清（另按说明书制备好蛋白质分子量标准样品（另按说明书制备好蛋白质分子量标准样品)上 样加入电极缓冲液垂直拔出样品梳按样品按样品-标准蛋白标准蛋白-空空-样
30、品的顺序上样，样样品的顺序上样，样品分别加品分别加10ul10ul，标准，标准蛋白20ul 电泳：浓缩胶8 80V0V，分离胶120V120V电泳，当溴酚蓝指示剂前沿到达距底部1cm1cm左右时，停止电泳,需要3-4h3-4h。切胶：电泳完毕，取出胶，切出两条胶带，一条含样品及标准蛋白，用考马斯亮蓝R250R250染色；另一条含样品的胶条用于转印和酶联免疫染色。胶条保存：将两个胶条用保鲜袋包好，贴上标有自己名字的标签-20 冻存先纵切再横切！先纵切再横切！溴酚蓝溴酚蓝 前沿前沿 安全注意事项安全注意事项1 1.丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺有神经毒性，注意不要沾在皮肤上，如有沾染可用水洗净。聚合成聚丙烯酰胺后毒性即消失。2.药品使用后必须盖好放回原处！3.电泳槽只能用水冲洗，不能用刷子刷，以免刷断铂电极丝。4.注意保护玻璃板。5.电泳完毕后的凝胶必须扔到垃圾桶中，不能扔在水槽中。作业：1.叙述SDS-PAGE电泳的原理及操作过程。2.叙述Western blot的原理及操作过程。