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1、专题25发酵工程1.(2021江苏）14.某同学选用新鲜成熟的葡萄制作果酒和果醋，下列相关叙述正确的是()A果酒发酵时，每日放气需迅速，避免空气回流入发酵容器B.果酒发酵时，用斐林试剂检测葡萄汁中还原糖含昼变化，砖红色沉淀逐日增多C.果醋发酵时，发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵时D.果醋发酵时，用重铭酸钾洌定醋酸含谥变化时，溶液灰绿色逐日加深【答案】J【解析】【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类刑为异养兼性仄氧刑。参与果酣制作的微生物是醋酸困，其新陈代谢类型是异养需氧型。果船制作的原理：当氧气、糖源都充足时，酌酸西将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙酌，再
2、将乙醒变为醋酸。【详解】A、酒精发酵是利用酵母菌的尤氧呼吸，果酒发酵时，每门放气需迅速，避免空气回流入发酵容器，影响酒粘发酵，A正确；B、果酒发酵时，发酵液中的葡萄糖小断被消耗，因此用斐林试剂检割葡萄汁中还原糖含量变化，砖纠色沉淀逐日减少，B铅误；C、若以酒粘为底物进行醋酸发酵，酒精与氧气发生反应产生醋酸和水，几乎没有气泡产生，发酵液产生的气泡址明显少于果酒发酵时，若以葡萄糖为底物进行醋酸发酵，发酵液产生的气泡扯与果酒发酵时相当，C错误；D、重络酸钾用十检测酒精，不能用千测定醋酸含扯，D错误。故选A。2.(2021江苏）（不定项）18.为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布千石油为唯一碳源的
3、固体培养基上，以致死率为90的辐照剂痲诱变处理，下列叙述不合理的是（)A.将培养基分装千培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率B.涂布用的菌浓度应控制在30300个mLC.需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间D.挑取培养基上长出的较大单菌落，给纯化后进行降解效率分析【答案AB【解析】【分析】培养基的配制：计算一称麓一溶化一灭菌一倒平板。微生物的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。预实验可以为正式实验进一步的投索条件，可以检验实验设计的科学性和可行性，避免人力、物力和财力的浪费。【详解】A、培养基应先灭曲冉分装千培养皿中，A错误；B、涂布用的菌浓度应控制在JO叮音，以避免
4、苗种重叠而不能得到单荫落，B错误；C、面通过预实验考察辐射时1间对存活率的影响，再进行正式实验，以确定最佳诱变时间，C错误；D、石油降解菌能分解石油获得碳源，形成菌落，挑取培养基上长出的较人单菌落，给纯化后进行降解效率分析，以获得能高效降解石油的菌种，D正确。故选AB。3.(2021 1月浙江选考）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是()A.将白萝卜切成小块B.向容器中通入无菌空气c.添加已经腌制过的泡菜汁D.用沸水短时处理白萝卜块【答案】B【分析】l、泡菜腌制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌，在无氧条件下乳酸菌无氧呼吸产生乳酸。2、泡菜的制作流程是：选
5、择和处理原料、洗净泡菜坛、调味装坛、密刲发酵。【详解】A、将白萝卜切成小块可以扩大白萝卜与腌料的接触血积，缩短腌制时间，A正确；B、泡莱制作所需菌种为乳酸菌，制作过程中应保持尤氧环境，向容器中通入无菌空气不利千腌制，B错误；C、泡菜汁中含有一定旦的发酵荫种，所以在腌制过程中，加入一些已经腌制过泡菜汁可缩短腌制时制，C正确；D、用沸水短时处押，可抑制某些微牛物的繁姐，提高泡菜品质，也可缩短腌制时间，D正确。4.(2021山东高考12)葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（)A.无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖B.自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌C.葡萄酒颜色是葡萄皮中的
6、色素进入发酵液形成的D.制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含扯增加【答案】D【解析】酵母菌进行有氧呼吸获得能僭大景繁殖，尤氧条件下，发酵产生酒精，故无氧条件下酵母菌能进行无氧呼吸存活但不能大量繁殖，A正确；自然发酵制作葡萄洒时起主要作用的菌是葡萄皮上的野生和酵母菌，B止确：葡萄皮中的色素进入发酵液使葡萄酒呈现颜色，c,+确：制作过程中随若发酵的进行发酵液中糖含臣减少，D错误。5.(2021湖北）3.中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述正确的是()A.泡菜制作过程中，酵母菌将葡萄糖分解成乳酸B.役头制作过程中，酵母菌进行呼吸作用产生CO2C.米酒制作过程中，将容器密封可以促进酵
7、母菌生长D.酸奶制作过程中，后期低温处理可产生大量乳酸杆菌【答案】B【解析】【分析】1、参与腐乳制作的怓生物主婓是毛将，其新陈代谢类型是异养需氧型腐乳制作的原理：毛需等微生物产生的蛋白酌能将豆腐中的蛋白质分解成小分了的肤和氨祜酸：脂肪酌可将脂肪分解成甘油和脂肋酸。2、参与泡菜制作的微生物是乳酸菌，泡菜制作的原理；（l)乳酸团在无氧条件下，将糖分解为乳酸。(2)利用乳酸荫制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化。3、醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒杜）氧化成醋酸；呏氧气、糖源都充足时，醋酸酌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸苗牛长的最佳温度是在30C35C。【详解】A、泡菜
8、制作过程中，主要是乳酸菌将葡萄糖分解形成乳酸，A错误；B、做慢头或面包时，经常要用到酵母菌，酵母荀可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳和酒精，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得饺头或面包喧软多孔，B正确；C、酵母菌在有氧条件下可以人扯繁殖，在密封也就是无氧条件下产生酒精，C错误；D、酸奶制作过程中，后期低温处理时大部分乳酸杆菌已死亡，不会大量繁殖，D错误。故选B。6.(2021海南）17.关千果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（)A.发酵所利用的微生物都属于原核生物B.发酵过程都在无氧条件下进行C.发酵过程都在同一温度下进行【答案】D【分析】D.发酵后形成的溶液都
9、呈酸性参与果洒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型；参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型；泡菜的制作离不丿1乳酸菌。【详解】A、参与果酒制作的微生物是酵母菌，屈千真核生物，A错误；B、参与果醋制作的醋酸菌是好氧菌，因此果醋发酵而要有氧条件，B错误；C、不同的发酵产物需要的温度不同C错误；D、果酒、果醋和泡菜发酵后形成的溶液都呈酸性，D正确。故选D。7.(2021辽宁）8.利用疲萝蜜制作果醋的大致流程为：先在灭菌的果肉匀浆中接种酵母菌，发酵6天后，再接入活化的醋酸杆菌，发酵5天。下列有关叙述错误的是（)A.乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖B.酵母菌和
10、醋酸杆伯均以有丝分裂的方式进行增殖C.酵母菌和醋酸杆菌发酵过程中控制通气的情况不同D.接入醋酸杆菌后，应适当升高发酵温度【答案】B【解析】【分析】l、果酒制作的菌种是酵母菌，来源千葡萄皮上野生荆酵母菌或者菌种保藏中心，条件是无氧、适宜温度是1825C,pll值呈酸性。2、参与果醋制作的微生物是酌酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果酌制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙酪，再将乙酌变为醋酸。最适温度为3035C。【详解】A、当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醒，再将乙醒变为醋酸，同时乙醇还可以抑制杂菌繁殖，A正确B、酵母陌一般以出芽的
11、方式繁姐，醋酸杆荫以二分裂的方式进行增姐，B错误；C、酵母菌发酵过程中先通气使其大岱繁殖，再密闭发酵产乙醇；醋酸杆菌为好氧菌，需持续通入尤菌氧气，C正确；D、酵母曲适宜温度是1825C，醋酸杆曲最适温度为3035C,D正确。故选B。8.(2021天津）1.下列操作能达到灭菌目的的是()A用免洗酒精凝胶擦手B.制作泡菜前用开水烫洗容器C.在火焰上灼烧接种环【答案】C【解析】D.防疫期间用石炭酸喷洒教室【分析】灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外切微生物的细胞、芽袍和袍子的过程，常用的方法有灼烧火菌、干热火菌和高压蒸汽火菌。消毒是指用较为温和的物理或化学力法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过
12、程，常用的方法有点沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。【详解】A、用免洗酒精凝胶擦手屈千消毒，A铅误；B、制作泡菜前用开水烫洗容器屈丁消毒过程，B错误；C、在火焰上灼烧接种坏能达到灭稍目的，C正确；D、防疫期间用石炭酸喷洒教室，屈于消毒，D错误。故选C。9.(2021 6浙江月选考）下列关千原生质体和细胞计数的叙述，错误的是()A测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数c涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用千细胞计数D酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度【答案】C【解析】【分析】微生物常见的接种的力
13、法：CD平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养illl制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的月始部分，微生物往往连在一起生长，随若线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大臣稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌浴。其中稀释涂布平板法可以用来进行微生物的计数，而平板划线法不能。【详解】A、可用血细胞计数板对原生质体进行计数，一般计数总数不少于300个细胞，A正确；B、活细胞的细胞膜具有选择透过性，红墨水中的色素分了不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红黑水中的色素分子能进入细胞，所以可用红眼水检测细胞的存活状态并计数，
14、B正确；C、划线分离法不能用千细胞计数，C错误；D、酵母细胞的密度与浑浊度指标存在一定的数豐关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。故选C。10.(2021山东高考14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等世接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（)A.甲菌属千解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【解析】根
15、据题干信息“甲稍菌落周围呈现探蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘汕和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶古琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌屈千解脂菌，A正确；乙菌落周田没有出现深蓝色，说明乙俏落不能产牛脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙荀落也可以在培养基上牛存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，史加直观，C正确；可以利用该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以以菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。11.(2021北京）12.人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是（)A对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B.使
16、用无菌棉拭子从皮肤表面取样C.用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D.观察菌落的形态和颜色等进行初步判断【答案】C【解析】【分析】实验室常用的消毒和灭菌方法的比较：l、消毒：煮沸消击法（一般物品）、巴氏消冉法（一些不耐高温的液体，如牛奶）、化学药剂消诸法（如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等）、紫外线消诉法（接种室、操作台）；2、灭苗：灼烧灭闭（接种工具）、干热灭酌（玻璃器皿、金屈用具）、高压蒸汽灭荫（培养基及容器）。【详解】A、为避免杂菌污染干扰，需对配制的培养基进行高比蒸汽灭菌，A正确；B、葡萄球菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂菌污染，故需要使用无菌棉拭了从皮肤农面取样，B正确；C、棉拭
17、子上的微生物需要用平板划线法在培养拈上进行接种，C错误；队根据微生物在固体平板培养基农面形成的伯落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别，1）正确。故选C。12.(2021山东高考20)（不定项）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁桉结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁按的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是()甲乙A.乙菌的运动能力比甲菌强B.为不影响菌的运动需选用液体培养基C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接
18、种技术的核心是防止杂菌的污染【答案】B【解析】从图中可以看出甲曲在试管中分布范闱小千乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；为不影响荫的运动斋选用半固体培养基，B错误；该实验可以根据黑色沉淀的多少初步比较细菌产生硫化氢的能力，但不能测定产生硫化氢的散，C正确；微生物接种技术的核心是防止杂拍的污染，D正确。13.【2020年浙江7月高考卷，19】下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（)A利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHc酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化答案：A 解析：利
19、川尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固休培养菲并不直桵杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿索为氮源，无法在尿索固体培养基巾存活，A钻误：不同的微牛物牛长所斋的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏酸环境，因此配制铭养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH,B正确；利用糯米酿酒而要先进行糖化，酵母团不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆酌的发酵底物为一定浓度的酒水混合物，适宜浓度的酒精使醋化醋杆荫活化，D正确。14.【2020年山东卷，12】我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。齐民要术记载：将蒸熟的米和酒曲混合前需浸曲发，如鱼眼汤，净淘米八斗
20、，炊作饭，舒令极冷。意思是将酒曲浸到活化，冒出鱼眼大小的气泡，把八斗米淘净，蒸熟，摊开冷透。下列说法错误的是（)A.浸曲发“过程中酒曲中的微生物代谢加快B.“鱼眼汤”现象是微生物呼吸作用产生的CO2释放形成的C.“净淘米”是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施D.舒令极冷的目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的微生物死亡答案：C 解析：山题意可知，“浸曲发”是将洒曲浸泡活化，在活化的过程中微生物代谢加快，A正确；“鱼眼汤”是指旨出鱼哏大小的气泡，气泡是微生物进行呼吸作用产生的CO2释放形成的，B正确；酿酒过程中酵母曲进行无氧呼吸产牛的酒精会抑制具他微牛物的牛长，而“净淘米”是防止一些杂质
21、影响酒的品质，C错误；由题意可知，“舒令极冷”是将蒸熟的米摊开冷透，其目的是防仆蒸熟的米温度过庇使酒曲中的微生物死亡，D错误。15.【2020年山东卷，20】（不定项）野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是（)A操作过程中出
22、现杂菌污染B.M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸c混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质D混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变答案：B 解析：若橾作过程中出现杂菌污染，则拈本培养基七会有杂面生长，从而出现菌落，A正确；若M、N莉株互为对方提供所缺失的氨基酸，则M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，焙养后会出现许多由单个细函形成的菌落，但由于M、N菌株的遗传物质没有改变，将这些菌落分别接种到基本培养基上时，培养后不会再有拍落出现，B错误；若混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质或菌株中已突变的基因再次发生突变，都会造成遗传物质改变，则混合培养一段时间，充分稀
23、释涂布到基本培养基卜培养后会有困落出现，将这些伯落再分别接种到基本培养基卜培养后，也会有菌落出现，C、D让确。16.【2020年天津卷，9】阅读下列材料，回答l、2题。甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，风味受蚕豆蛋白分解产生的氨基酸影响，也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物影响。其生产工艺如下图所示。加盐水某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺（盐度15%，温度37C,发酵30天）进行了改良，改良后甜瓣子风味得以提升。新工艺参数如下表所示。时期时段（天）盐度（）前期012 6 温度(C)12 中期后期60 l3 26 ll 6 15 37 37 两种工艺的结果比较见下图。期后功 吵/v。877,(
24、婪uu茹l)忑动汜尽三OYi.o 足0-传让工艺沪尸汛:老。2沁.!Ii 0 遠L吓妞，后，期0 6 12 18 24 30 发酵时间(d)1.下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是（)A发酵开始阶段的微生物主要来源千制曲过程的积累B蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源c温度与盐度都影响微生物的生长繁殖D.定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数2下列对实验结果的分析，错误的是（)A新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致B新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致c新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性D新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总
25、数高和氨基酸终产量高均有关答案：1.D;2.B 解析：1根据工艺流程可知，蚕豆瓣制曲形成豆瓣曲，说明发酵开始阶段的微生物主要米源千制曲过程的积累，A正确；蚕豆辦含有丰富的糖类和蛋白质，因此蚕豆瓣可为微生物的生长繁殖提供碳源和氮源，B正确；根据图中发酵前期、中期和后期的活霉菌、活细菌总数变化以及表格数据可知，温度与盐度都影响微生物的生长繁殖，C正确；定期取样，使用稀释涂布平板法统计活细菌总数，D错误。2与前期相比，中期的盐度不变，温度上升，因此新飞艺中期活霉菌总数下降与温度升高有关，A正确；与中期相比，新工艺后期温度不变，盐度升高，因此新工艺后期活细菌总数下降是由盐度升高导致的，B钻误；与前期未
26、相比，新工艺巾期氨基酸产牛速率加快，是囚为温度由12c升高到37C，温度升高提高了蛋白酶活性，C正确；综合分析三图中两条曲线的变化，新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数的和氨基酸终产扯的均存在密切关系，l)正确。17.【2020年江苏卷，18】某同学在线提交了在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋的实验报告，他的做法错误的是（)A选择新鲜的葡萄略加冲洗，除去枝梗后梓汁B将玻璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁c酒精发酵期间，根据发酵进程适时拧松瓶盖放气D酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵答案：B 解析：制作葡萄酒时，选择新鲜的葡萄，梓汁前先将葡萄略加冲洗，并除去枝梗，A正确；发酵瓶要清洗
27、丁净，用体积分数为70的酒枯消毒，或用洗洁精洗涤，葡萄汁装入发酵瓶时，要留有大约1/3的空侚，不能装满，这样既可以为酵母菌人扯繁殖提供适址的氧气，又可以防止发酵旺盛时发酵液溢出，B错误；洒精发酵过程中会产生一氧化碳，为f释放出二氧化碳，要根据发酵进程适时拧松瓶盖放气，C正确；山于醋酸发酵使用的曲种为醋酸菌，醋酸曲为好氧细菌，为了给醋酸发酵提供充足的氧气，并防止空气中的杂陌污染，酒粘发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵，D正确。18.【2020年江苏卷，19】为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如下图所示。下列叙述正确的是（)A倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图
28、中I、II区的细菌数谥均太多，应从III区挑取单菌落c该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色答案：B 解析：倒平板后无需间歇晃动，A钻误；图中I区、II区的细阴数臣太多，III区的细菌数臣较少，可从III区挑取单菌落，B正确；III区中存在单菌落，该实验结果能达到菌种纯化的目的，C错误；刚果红能与纤维素形成红色复合物，但不能和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖形成红色复合物，因此陌落周围的纤维素被降解后，不能被刚果红染成红色，D错误。19.(2021 湖南高考真题）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达1238kg。大
29、熊猫司利用竹子中8的纤维素和27的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属千培养基。(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路。(4)为高效降解农业秸杆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37C条件下进行玉米秸秤降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株，理由是菌
30、株秸杆总觅(g)秸杆残匪(g)秸杆失重（）纤维素降解率(%)A 2.00 1.51 24.50 16.14.B 2.00 1.53 23.50 14.92 C 2.00 l.42 29.00 23.32【答案】(l)C1酶、CX酶和葡萄糖昔酌纤维素选择(2)为了杀死培养基中的所有微牛物（微牛物和芽袍、抱子）不接种培养（或空白培养）(3)将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0令lmL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布三个半板），对荀落数在30300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便巾纤维素分解陌活荫数(4)C 接种C曲株后秸杆失茧最多，纤维素降解率砐大【分析】l、分解纤维素的微生
31、物分离的实验原理：(l)土壤中存在若人扯纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酌。纤维素酌是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长；(2)在培养基中加入刚朱红，可与培养基中的纤维系形成红色复合物，当纤维素被分韶后，红色复合物不能形成，培养某中会出现以纤维素分解由为中心的透明圉，从而可筛选纤维素分解由。2、消击和灭茼消击灭闭使用较为温和的物理或化学力法杀死物体使用强烈的理化因素杀死物体内概念农面或内部的部分微生物（不包芽袍和袍外所用的微生物（包括芽袍和袍子）
32、子）常用煮沸消毒法、巴氏消谄法、化学药剂诮毒法、灼烧灭菌、干热灭菌、高比蒸汽灭方法紫外线消毒法苟适用操作空间、某此液体、双手等接种坏、接种针、玻璃器皿、培养对象基等【详解】(1)纤维索酶是一种复合酶，一般认为它至少包括二种组分，即C)酶、Cx酶和葡萄糖背酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种车以纤维素为唯碳源的固体培养拈上进行培养：培养拈从功能上分类可分为选择培养基和鉴别培养基，故该培养基从功能上分类屈丁选择培养基。(2)配制培养基
33、的常用高压蒸汽火齿，即将坢养基置丁压力100kPa、温度121c条件下维持1530分钟，由的是为了杀处培养基中的所有微生物（微生物和芽抱、玸子）。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，即将未接种的培养基在适宜条件下焙养一段时间，若在适宜条件下培养无由洛出现，说明培养拈灭菌彻底，否则说明培养拈灭菌不彻底。(3)为测定大熊猫新鲜粪便中纤维索分解陌活荀数，常采用桸释涂布平板法，在适宜的条件下对大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌进行纯化并计数时，对照组应该涂布等榄的尤菌水。将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.lmL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布二个平板），对菌落数在30300的平板进行计数，则可
34、根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数。(4)测定酌活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少挝或产物的增加扯来表示。由衣格可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸杆失币最多，纤维素降解率最大，说朋该菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最大。【点睛】本题考查微生物的实验室培养，要求考生识记计数微生物的方法；识记培养基的种类及功能：掌握纤维素分解分离和鉴别的原理，能结合所学的知识准确答题。20.(2021 1月浙江高考真题）回答下列（一）小题：（一）某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。(1)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或
35、法，两种方法均能在固体培养基上形成。对分离的菌株进行诱变、和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。(2)固定化菌株的制备流程如下；O将菌株与该公司研制的特定介质结合；用蒸饿水去除;检验固定化菌株的。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是(3)对外，只提供固定化菌株有利千保护该公司的知识产权，推测其原因是【答案】（一）（1)涂布分离单菌落筛选(2)未固定的细团降解富营养化污水污染物的能力包埋法和吸附法(3)特定介质能为菌株繁殖提供X【分析】l、分离纯化细稍最常用的方法是划线分离法（平板划线法）和涂布分离法（
36、稀释涂布平板法）。接种的目的是使聚栠在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群休菌落。划线分离法，方法简单；涂布分离法，单荫落更易分开，但操作复杂些。2、固定化酌(insolubleenzyme)就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水面又有酶活性的制剂。固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。【详解】（一）分析题意可知，本实验目的是从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备固定化菌株。(l)分离纯化细齿最常用的力法是划线分离法或涂布分离法，两种力法均能在固体培养基上形成单菌落。为了获得能高效降解富营养化
37、污水污染物的面株，还需对分离的面株进行诱变处埋，再经筛选和鉴定。(2)固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。山千菌株与特定介版的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，故可以采用的2种方法是包埋法和吸附法。(3)由千该苗株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖，叶推测特定介质能为闭株繁姐提供x,故该公司对外只提供固定化菌株，有利千保护该公司的知识产权。【点睛】本题考查了特定微生物的分离、固定化技术及某因工程，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。21.(2021 广东高考真题）中国科学家运用合成生物学方
38、法构建了一株嗜盐单胞菌H,以糖蜜（甘庶梓糖后的废弃液，含较多庶糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘庶的整体利用价值。工艺流程如图。拫挂器盐需门废弃原料理开放式发酵系统回答下列问题：（1)为提高菌株I-I对庶糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将庶糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有等。（答出两种方法即可）(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培
39、养基盐浓度设为60g/L,pl-!为10,菌株I-I可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。（答出两点即可）(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产谥均未达到预期，并产生了少谥乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PI-IA，说明其能分泌【答案】（1)唯一碳源血细胞计数板计数诱变育种、基囡工程育种(2)盐浓度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡：pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制(3)氧气俾或
40、溶解氧）(4)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等【分析】微牛物的筛选和计数方法；(1)实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：人为提供有利千日的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微牛物牛长。(2)微生物常见的接种方法：稀释涂布平板法、平板划线法。(3)测定微生物数扯的方法：直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。间接计数法：常用稀释平板计数法，平板焙养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。【详解】(1)根据题意分析，该实验的门的是提高菌株II对庶糖的耐受能力和利用效率，结合微生物的代谢需求，其液体培养基应该以庶糖作为唯一碳源。并不
41、断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得日标菌株。培养过程中定期取样并厅血细胞计数板计数的方法进行酌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良陌株的方法还有诱变育种、基因工程育种等。(2)已知，拍株II具有嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，因此芍培养某盐浓度为60g/L,pl!为10时，菌株H可正常持续发酵60d以上，而盐浓度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为JO的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制，故该系统不衙要火菌。(3)分析题意，扩大培养时，营养物浓度、温度、pH等条件下适宜，面发酵液中谊株H细胞增殖和PHA产量
42、均未达到预期，并产生（少量乙醇等物版，说明发酵条件中氧气不足，使荫种进行无氧呼吸产生乙醇，即氧气(02或溶解氧）是限制茼密度培养的重要因素。(4)根据酌的专一件可知，困株H之所以能通过分解主要含蛋白质、淀粉、油脂等的径厨垃圾来生产PHA,说明其能分泌蛋臼酶、淀粉酶、脂肪酶等。【点睛】本题考查微生物的分离和计数的相关知识，意在考查考生运用所学知识解决实际问题的能力，难度适中。22.(2022年1月浙江）29.回答下列（一）、（二）小题：（一）红曲繇合成的红曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者进行了红曲色素的提取及红色素的含量测定实验，流程如下：丑(1)取红曲霉菌种斜面，加适量洗
43、下菌苔，制成菌悬液并培养，解除休眠获得菌种。经液体发酵，收集红曲霉菌丝体，红曲霉菌丝体与70乙醇溶液混合，经浸提、，获得的上清液即为红曲色素提取液。为进一步提高红曲色素得率，可将红曲霉细胞进行处理。(2)红曲色素包括红色素、黄色素和橙黄色素等，红色素在390nm、420nm和505nm液长处均有较大吸收峰。用光电比色法侧定红曲色素取液甲的红色素含量时，通常选用505nm波长测定的原因是测定时需用作空白对照。(3)生产上提取红曲色素后的残渣，经处理后作为饲料添加剂或有机肥，这属于废弃物的无害化和处理。【答案】（l)无菌水活化离心破碎(2)其它色素对该波长光的吸收相对较少，干扰相对较小70乙醇溶液
44、(3)O灭菌资源化【解析】【分析】l、无泊操作包括灭伯和消毒两种方式。消毒的方法有巳氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有丁热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。2、微生物接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。3、平板划线法：通过接种环在琼脂固体焙养基表曲连续划线的操作，将聚共的菌种逐步稀杆分散到培养基表面。【小问l详解】防止污染，洗稍苔可加适旦的无峦水，制成菌悬液并培养，解除休眠获得活化菌种。红曲森荫丝体与70%乙醇溶液混合，经浸提、离心，获得的上消液即为红曲色素提取液。为进一步提高红曲色素得率，可将红曲霉细胞进行破碎
45、处押，使细胞内的红曲色素释放出来。【小问2详解】用光电比色法侧定红曲色素取液甲的红色素含址时，通常选用505nm波长测定的原因是其它色素对该波长光的吸收相对较少，下扰相对较小。山丁提取红曲色素是用的70乙醇溶液，故测定时面用70乙醇溶液作空白对照。【小问3详解】生产上提取红仙色素后的残渣，经灭菌处理残渣后，作为饲料添加剂或有机肥，这屈千废弃物的无害化和资源化处押。23.(2021 河北高考真题）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。回答下列问题：(1)皮渣中含有较多的天然食用色素花色昔，可用萃取法提取。萃取前将原料
46、干燥、粉碎的目的分别是，萃取效率主要取决千萃取剂的。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色昔。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色昔的提取率，原因是(2)为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入901nL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.lmL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数呈分别为78、91和95,则每克皮渣中微生物数量为个。(3)皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是醇作为。培养筛选得到的醋
47、酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙(4)皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌。（简要写出实验步骤和预期结果）【答案】(1)利千萃取剂溶解花色昔、仗原料与萃取剂充分接触性质和使用侬分解纤维素酶、果胶酶可破坏细胞壁，有利千提高花色甘的提取率(2)8.8 X 106(3)中性或偏碱使培养基不透明，从而使酣酸曲菌落周围出现透明圈碳源(4)实验步骤：将平板置千无氧环境下继续培养，观察菌落形态和透明圈大小预期结果：若菌落继续生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若伯落不能继续生
48、长，透明图不再扩大，则为醋酸菌菌落【分析】(l)萃取的效率主要取决千萃取剂的性质和使用兄，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水旦、节取的湍度和时间等条件的影响。一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶韶，萃取效果就好。(2)区分筛选半板上的醋酸菌和乳酸拍，可根据二者代谢类型的不同，在尤氧条件下进行培养，观察菌落生长情况。【详解】(l)大然食用色素花色昔可用萃取法提取，萃取剂与水应不混溶，萃取前将原料干燥，有利十萃取剂溶解化色节，提高溶解率；粉碎的目的是使原料与萃取剂允分接触；萃取效率主要取决千萃取剂的性队和使用攒。萃取过程盂要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色
49、昔分解。萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理，可破坏细胞壁，有利千提高花色什的提取率。(2)为f解皮涾中微生物的数量，取10g皮涾加入90ml无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.lmL稀释液接种千培养基上。104倍稀释对应的二个平板中荫落数互分别为78、91和95,则二个平板中平均菌落数为(78+91+95)-:-3=88,每克皮渣中微生物数量为88-:-0.1 X 10=8.8 X 106个。(3)醋酸菌屈于细世，制备酣酸面初筛平板时，需要将培养基的pH调至中性或弱碱性，灭语后在未凝困的培养基中加入无菌碳酸钙粉未、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙可使培养基不透明，醋酸荫产生的醋酸可分解
50、碳酸钙，产生透明刚，根据这一特点可筛选出醋酸菌，在缺少糖源的液休培养基中醋酸曲以乙醇为碳源，先把乙醇氧化为乙酕，再把乙酘氧化为乙酸。(4)醋酸菌为好氧菌，与兼性厌氧型的乳酸菌菌落形态相似，且二者产生的代谢产物均可使碳酸钙分解，区分筛选平板上的酌酸苗和乳酸菌，可将平板置于无氧环埮下继续培养，观察菌落形态和透明圈人小。若菌落继续生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧和的乳酸菌菌落，若菌落不能练续生长，透明圈不再扩大，则为醋酸菌菌落。【点睛】本题考查植物成分的提取和微生物的分离，考查考生对植物成分提取力法和原理、微生物培养、分离、计数方法的理解和识记。解答本题，需充分利用题干信息，如醋酸菌、乳酸菌代谢类型