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1、专题26细胞工程1.(2022年1月浙江）7.农作物秸杆的回收利用方式很多，其中之一是将秸杆碎化后作为食用菌的栽培基质。碎化秸杆中纤维所起的作用，相当千植物组织培养中固体培养基的（)A.琼脂庶糖C.激素无机盐【答案】A【解析】B.庶糖激素D.无机盐琼脂【分析】植物组织培养基主要成分是无机营养物（1:要山大辇元素和微量元素两部分组成）、有机物（维生素、庶糖、琼脂等）和牛长调节物质（柏物生长素类、细胞分裂素、赤毒素等）。培养基中的碳水化合物通常是庶糖，作为培养拈内的碳源和能源外，对维持培养某的渗透压也起觅要作厅。培养拈中添加了琼脂，主要是作为培养基的支待物，使培养基呈固体状态，而成为固体培养基。秸
2、杆是食用菌栽培的主要基压，其中的纤维索和木丿贞素在食用菌菌丝生长过程中大量降解，秸杆栽培食用菌是秸杆利用的最佳途径。【详解】据题T的信息，“秸杆碎化后作为食用菌的栽培基顶，秸杆中的纤维素在食用菌菌丝生长过程中大址降解，提供碳源和能源，这相当十植物组织培养基中添加的庶糖；秸杆中的纤维素是固体，可以作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，这相当千梢物组织培养基巾添加的琼脂。故选A。【点睛】本题主要考查柏物组织培养的相关知识，总在考查考牛对所学知识的识记和辨析的能力。2.(202江苏）11.下列关于哺乳动物胚胎工程和细胞工程的叙述，错误的是（)A.细胞培养和早期胚胎培养的培养液中通常需要添加血清等物
3、质B.早期胚胎衙移植到经同期发情处理的同种雌性动物体内发育成个体C.猴的核移植细胞通过胚胎工程已成功地培育出了克隆猴D.将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞【答案D【解析】【分析】1、胚胎移植的生理基础(1)供体与受体相同的生理变化，为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境：（2)胚胎在早期母体中处千游离状态，这就为胚胎的收韭提供了可能：（3)了宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应，这为胚胎在受休内的存活提供了可能；（4)胚胎遗传性状不受受休任何影响。2、浆细胞能够分泌抗体，但是不具有增姐能力，而骨随瘤细胞具有无限增殖的能力，因此利用动物细胞融合技术将浆细胞和骨简瘤细胞韶合
4、成杂交瘤细胞，利用该细胞制备单克隆抗体。【详解】A、细胞培养和早期胚胎培养的培养液中通常需添加血沽等物质，A正确；B、早期胚胎衙移植到经同期发悄处理的同种雌性动物体内发育成个体，B正确：C、我国利用核移植技术成功培养出克隆猴”中中“和“华华”,C正确：D、将骨简瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身副合的细胞等，D错误。故选D。3.(2021江苏）5植物组织培养技术常用于酕业化生产：其过程一般为：无菌培养物的建立一培养物增殖一生根培养一试管苗移栽及鉴定。下列相关叙述错误的是()A.为获得无菌培养物，外植体要消毒处理后才可接种培养B.
5、组织培养过程中也可无明显愈伤组织形成，直接形成胚状体等结构C.提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根D用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异【答案】D【解析】【分析】1、离休的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松巾无规则，是一种高度液泡化的呈无应形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为柏物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行焙养，又可以币新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发台成完整的植株体。2、植物组织培养中生长素和细胞分裂素使用比例对植物细胞发
6、育的影响：生长素用蜇比细胞分裂素用量，比值高时，有利千根的分化、抑制芽的形成；比值低t，j有利千芽的分化、抑制根的形成。比值适中时，促进愈伤组织的形成。【详解】A、植物组织培养过程中应注意无菌操作，为获得无曲培养物，外植休婓经过表面诮诉处理后，才能进行培养，所用的培养基必须彻底灭菌，A正确；B、组织培养过程中也可尤明显愈伤组织形成，直接形成胚状体等结构，胚状体若包裹上人工种皮，可制作成人上种了，B正确；C、生长素和细胞分裂素的比伯高时，有利丁根的分化、抑制芽的形成，因此提高培养括中生长素和细胞分裂素的比值，有利千诱导生根，CII:确；D、用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗会出现变异，如在愈伤
7、组织的焙养过程中可能发生基因突变等变异，D错误。故选D。4.(2021辽宁）3.下列有关病毒在生物学和医学领域应用的叙述，错误的是()A.灭活的病毒可用千诱导动物细胞融合B.用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体C.基因工程中常用噬菌体转化植物细胞D.经灭活或减毒处理的病毒可用千免疫预防【答案】C【解析】【分析l1、病诉是非细胞生物，只能寄生在活细胞中进行生命活动。病毒依据宿主细胞的种类可分为植物病毒、动物病毒和噬面体；根据遗传物质来分，分为DNA病毒和RNA病毒：病毒由核酸和蛋白质组成。2、疫伯是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、火活或利用转基阳等方法制成的
8、用千预防传染病的自动免疫制剂。应用转基因技术生产的疫苗，主要成分是病译的表面抗原蛋白，接种后能刺激机体免疫细胞产生抵抗病毒的抗体。【详解】A、促进动物细胞的恐合除了物理力法和化学力法外，还可以采用火活的病毒，A正确；B、病毒作为抗原可刺激机体发生特异性免疫，产生抗体，用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体，BLI:确；C、基因工程中常用农杆菌转化植物细胞，农杆菌的特点是其细胞内的Ti质粒上的T-DNA片段能够转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上，C错误；D、经过灭活或减诉处理的病诗可以作为免疫学中的疫苗，用千免疫预防，D正确。故选C。【点睛】5.(2021北京）7.研究者拟通过有性杂交的方
9、法将簇毛麦(2n=14)的优良性状导入普通小麦(2n=42)中。用簇毛麦花粉给数以千计的小麦小花授粉，10天后只发现两个杂种幼胚，将其离体培养，产生愈伤组织，进而获得含28条染色体的大撇杂种植株。以下表述错误的是（)A.簇毛麦与小麦之阁存在生殖隔离B.培养过程中幼胚细胞经过脱分化和再分化C.杂种植株减数分裂时染色体能正常联会D.杂种植株的染色体加倍后能产生可育植株【答案】C【解析】【分析】l、生殖隔离是指由千各方面的原因，使亲缘关系接近的类群之间在自然条件下不交配，即使能交配也不能产生后代或不能产生可育后代的现象。2、植物组织培养：CD原理：植物细胞具有全能性。过程：离体的植物组织、器官或细胞
10、（外植休）经过脱分化形成愈伤组织，又经过再分化形成胚状休，最终形成梢株（新柏体）。【详解】A、簇毛麦与小麦的后代在减数分裂时染色体联会紊乱，不可育，故二者之间存在生殖隔离，A正确；B、幼胚细胞经过脱分化形成愈伤组织，愈伤组织经过再分化形成胚状体或丛芽，从而得到完整植株，B正确；C、杂种柏株细胞内由千没有同源染色体，故减数分裂时染色体无法正常联会，C错误；D、杂种植株的染色休加倍后能获得可育植株，D正确。故选C。6.(2021福建）11.科研人员利用植物体细胞杂交技术培育矮牵牛新品种，技术流程示意图如下。矮牵牛品种甲幼嫩叶片矮牵牛品种乙幼嫩叶片下列叙述正确的是（)A.愈伤组织是幼嫩叶片通过细胞分
11、化形成的B.获得的杂种植株都能表现双亲的优良性状c可用聚乙二醇诱导原生质体甲和乙的融合和细胞壁再生D.用纤维素酶和果胶酶处理愈伤组织以获得原生质体【答案】D【解析】【分析】分析题图：首先用酶解法去壁，一般使用纤维素酶和果胶酌处理；然后诱导原生质体融合，采用的方法一般包括物押法（离心、振荡、电激）、化学法（用聚乙二醇处理）：培养融合的原牛质体再牛出新的细胞壁，形成杂种细胞。然后杂种细胞经过植物组织培养技术可以培养形成杂种植株。【详解】A、愈伤组织是幼嫩叶片通过细胞脱分化形成的，A错误；13、山 丁基因的选择性表达和基因间的互作效应，获得的杂种植株不一定能够表现亲木的优良性状，B错误；C、可用聚乙
12、二酐诱导原生质体甲和乙的融合，但不能诱导细胞壁的再生，C错误：D、山千植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，故可以用纤维素酶和果胶酶处理愈伤组织以获得原生匝体，D士确。故选D。7.(2021 1月浙江选考）下图为动物成纤维细胞的培养过程示意囡。下列叙述正确的是（)(D切取组织制备细胞县浮溃原代培养A.步骤O的操作不需要在无菌环境中进行B.步骤中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离C.步骤到的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理D.步骤培养过程中不会发生细胞转化【答案】C【分析】传代培养动物细胞培养过程：取动物组织块一剪碎组织一川胰蛋白酌处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养液中（原代培养).放入二氧化碳培养
13、箱培养一贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液一转入培养液（仕代培养）一放入二氧化碳培养箱培养。【详解】A、动物细胞培养过程需要无菌橾作，故步骤的橾作需要在无菌坏境中进行，A错误；B、动物细胞培养过程袖要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，分散成单个细胞，制成细胞悬液，B错误；C、传代培养时斋要用胰蛋白酶处理贴壁牛长的细胞，使之分散成单个细胞，再分瓶培养，C正确；D、步骤为传代培养过程，该过程中部分细胞可能发生细胞转化，核型改变，D错误。故选C。8.(2021辽宁）13.下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是（)甲牛一C它它令注射 割共体细胞培养里(空气移
14、植 重组胚胎爹代孕丙牛I 乙牛0譬A.后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物原共同决定B.过程需要提供95空气和5%C02的混合气体C.过程常使用显微操作去核法对受精卵进行处理D.过程将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植【答案】B【解析】重组细胞生出后代丁牛【分析】分析图解：图示过程为体细胞克隆过程，取乙牛体细胞，对处于减数第二次分裂中期的卵母细胞去核，然后进行细胞核移植；融合后的细胞激活后培养到早期胚胎，再进行胚胎移植，最终得到克隆牛。【详解】A、后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自J-乙牛，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物顶共同决定，A错误；B、动物细胞培养中需要提供95空气（保证
15、细胞的有氧呼吸）和5%C02（维持培养液的pH)的混合气体，B正确；C、过程常使用显微橾作去核法对卵母细胞进行处理，C错误；D、过程将激活后的重组细胞培养至粪胚或桑根胚后移梢，D错误。故选B。9.(2021 6浙江月选考）采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白CEGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是（)A基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液B基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期，须将其植入同期发情小鼠的子官，才可获得表达EG
16、FP的小鼠c分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠D通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎【答案】B【解析】【分析】分析题总可知，通过基囚编辑技术将EGFP基囚定点插入到受粘卵的Y染色体上，使含有该Y染色体的小鼠能够发出绿色荧光，转基因鼠将Y染色体传递给子代的雄性个休，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。【详解】A、依据胚胎在小同发育阶段对培养条件的特定需要，受精卵在体外培养剒，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液，A正确；B、基因编辑处理的受精卵一般经体外焙养至桑楛胚或赍胚阶段，进行胚胎移植，可获得表达EGFP的小鼠，B错误；C、分离能表达E
17、GFP的胚胎干细胞，通过核移植、早期胚胎焙养、胚胎移植等技术，可获得大量的转基因小鼠，C正确；D、由分析可知，通过基囚编辑技术将Y染色体用绿色荧光蛋白基囚标记，通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGPP的个体含有Y染色休，即为雄性小鼠胚胎，D正确。故选B。10.(2021山东高考15)一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能剌激机体产生一种抗体，由同一抗原剌激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗p72的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（）A.注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响
18、大B.单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合C.利用该小鼠只能制备出一种抗p72的单抗D.p72部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况【答案】D【解析】根据题干信息”一个抗原礼往有多个不同的抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体”，非洲猪监病责衣壳蛋白p72上有多个抗原决定簇，所以可以刺激机休产生多种抗体。每个抗原决定簇刺激产生的抗体是单抗。单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，囚此原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误；单抗制备过程中通常将分离出的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，B错误：非洲猪瘟病冉衣壳蛋白p72上有多
19、种抗原决定簇，一个抗决定簇只能剌激机体产牛一种抗体，所以向小鼠休内注入p72后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误；p72部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。11.(2020北京生物高考题）11.人体感染新冠病毒后，机体会产生多种特异性抗体。我国科学家从康复者的浆细胞中克隆出针对病毒表面抗原的抗体基因相关序列，构建表达载体并在相应系统中表达，可制备出全人源单克隆抗体。以下表述错误的是()A.该单抗可直接用于新冠病毒的核酸检铡B在该单抗制备过程中利用了基因工程技术C.该单抗可与新
20、冠病毒相应蛋白特异性结合D.可用抗原才亢体反应检剥抗体基因表达产物【答案】A【解析】【分析】基因工程基本橾作顺序：目的基因获取（从基因文库中获取、利用PCR技术扩浒、人工合成），农达载体的构建（启动子目的基因标记基因终止千），将目的基因导入受体细胞（植物细胞用农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法，动物细胞用显微注射法，微生物细胞用感受态细胞法），目的基因的检剩与鉴定（导入检侧用DNA分子杂交技术，转录检测用分子杂交技术，翻译检测用抗原抗体杂交法）。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外米入侵的病毒的核酸，米确定是台被新冠病毒感染，一旦检测为核酸“阳性”，即可证明患者体内有病毒存
21、在；抗体检测的物质是受病毒感染刺激而产牛的特异性抗休，病责进入人体一段时间后，才会刺激人体产生lgM（免疫球蛋白M)或lgG（免疫球蛋臼G),检测抗体间接怔明己感染新冠病志。【详解】A、由分析可知，该单抗不能直接川千新冠病毒的核酸检侧，A错误；B、由题“针对病毒农面抗原的抗体基因相关序列，构建农达载体并在相应系统中衣达，制备出全人源单克隆抗体”可知，在该单抗制备过程中利用了基因工程技术，B正确；C、针对新冠病毒农面抗原制备出的单抗，可与新冠病毒相应蛋白特异性结合，C正确：D、抗体基因表达产物检测的方法是采用抗原抗体杂交反应，若呈阳性，则说明已翻译出相应的蛋白质，D正确。故选A。12.(2020
22、北京生物高考题）13为培育具有市场竞争力的无籽村橘，研究者设计如下流程。相关叙述不正确的是（)衵橘A花药（花粉）离体培养衵橘A钳橘A单倍体（二倍体）.（单倍体）的原生质体 杂种一三倍体植株杞橘B钳橘B二倍体尸细胞.（二倍体）的原生质体A.过程CD衙使用胰蛋白酶处理B.实现过程依赖膜的流动性C.过程需应用植物组培技术D三倍体植株可产生无籽村橘【答案】A【解析】【分析】分析图示可知，过程为原生匝体的制备过程，面要纤维素酶和果胶旃，过程为原生）贞体的融合过程，需要诱导剂诱导融合，过程为植物组织培养的过程。【详解】A、柏物细胞壁的主要成分是纤维索和果胶，所以过程帝使用纤维系酶和果胶酶处埋，A钻误；B、
23、过程为细胞融合过程，该过程依赖膜的流动性，B正确：C、过程斋应用梢物组培技术将杂种细胞培养形成个体，C正确；D、三倍体植株含有三个染色体组，减数分裂时联会紊乱，可产生无籽相橘，D正确。故选A。13【2020年浙江1月高考卷，17】下列关千利用胚胎工程培育优质奶牛的叙述，正确的是（A从雄性奶牛中采集到的成熟精子遇到卵子即可进入卵子内B在体外完成受精后的受精卵，将其植入子宫即可完成着床c随着卵裂的进行，卵裂球细胞的体积变小，卵裂球的体积和有机物总量显著增加D在含有经辐射处理的胚胎成纤维细胞的培养体系中，胚胎干细胞不易发生分化答案：D 解析：从雄性奶牛中采集到的成熟精子要经获能处押后才能进入卵子内，
24、A错误；在体外完成受精后的受精卵，面培养至早期胚胎（如早期贲胚）才能将其柏入子宫完成右床，B错误；随养卵裂的进行，卵裂球细胞的体积变小，卵裂球的体积不会增加，有机物总址减少，C错误：胚胎成纤维细胞可分泌一些能抑制细胞分化的物顶，在含有经辐射处理的胚胎成纤维细胞的蛁养体系中，胚胎丁细胞不易发生分化，D正确。14.【2020年山东卷，13】两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行
25、体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法错误的是()普通小麦细胞一-普通小麦原生质体杂种培养杂种筛选 中间偃麦草细胞一-中间偃麦华原生质体尸细胞一植株一耐盐小麦不同剂泣的紫外线照射二A过程O需使用纤维素酶和果胶酶处理细胞B过程的目的是使中间偃麦草的染色体断裂C过程中常用灭活的病毒诱导原生质体融合D耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段答案：C 解析：由图可知，为去除梢物细胞的细胞壁，获得原牛质体的过程，该过程需用纤维索酣和束胶酶处理细胞，A正确；由题干可知，两种远缘柏物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出，若其中一个细胞的染色体在融合前发生断裂，则形成的染色体片段在细胞
26、触合后有的可能会存留在杂种细胞中，故为了使普通小麦获得中间偃麦草的耐盐性状，需要将中间偃麦草细胞中的染色体断裂，过程用不同剂鼓的紫外线照射的目的是断裂中间偃麦草的染色体，B正确；图中过程为两种原生质体的翩合，常用的触合手段为物理法和化学法，灭活的病群通常用来融合动物细胞，C错误；普通小麦不具有耐盐件状，因此筛选出的耐盐小麦的染色体上整合中间偃麦草的染色体片段，D正确。15【2020年山东卷，14】经遗传改造的小鼠胚胎干细胞注入要胚，通过胚胎工程的相关技术可以获得具有不同遗传特性的实验小鼠。下列说法铅误的是（)A用促性腺激素处理雌鼠可以获得更多的卵子B体外受精前要对小鼠的精子进行获能处理C胚胎移
27、植前要检查胚胎质量并在贲胚或原肠胚阶段移植D遗传改造的小鼠胚胎干细胞可以通过转基因等技术获得答案：C 解析：为获得更多卵了，需要用促性腺激素对雌性个体进行超数排卵处理，A正确；刚排出的精了不能与卵子受枯，必须进行获能处理后才具备受精能力，B正确；胚胎移柏前要检查胚胎质旦，牛、羊等一般要培养到桑根胚或泰胚阶段才进行移植，小鼠等可在史早的阶段移植，C错误；可通过转基因等技术获得遗传改造的小鼠肝胎干细胞，D正确。16.【2020年天津卷，l】在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的（)A卵原细胞c次级卵母细胞B初级卵母细胞D卵细胞答案：C解析：克隆哺乳动物时，一般将动物的一个体细胞的细
28、胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其币组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个休。通常作为核移植受体细胞的是去核的次级卵母细胞，C正确。17【2020年江苏卷，23】（不定项）小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞，制备流程如下图所示。下列叙述错误的是（)a 囊胚三正fo胞细下胎胚v A为获得更多的褒胚，采用激素注射促进雄鼠产生更多的精子B细胞a和细胞b内含有的核基因不同，所以全能性高低不同C用胰蛋白酶将细胞a的膜蛋白消化后可获得分散的胚胎干细胞D胚胎干细胞和诱导出的各种细胞都福在CO2培养箱中进行培养答案：ABC解析：限制获得更多早期胚胎的最大的问题是没有足够的卵母细胞，
29、所以应该通过注射促件腺激素促进雌鼠超数排卵，A错误；细胞a和细胞b是山同一个受精卵分裂分化形成的，所以两细胞的核基因应该是相同的，由十基因的选择性农达，襄胚期细胞b已经分化形成了滋养层细胞，所以全能性降低，B错误；用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织一段时间，消化f细胞间的蛋白庙，从而获得分散的胚胎丁细胞，C错误；动物细胞培养所需气体主要有氧气和二氧化碳，一般将动物细胞咒于含95空气加5二氧化碳的混合气体的培养箱中进行培养，D正确。18.(2021 湖南高考真题）M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术
30、获得M基因失活的转基因克隆动物A,流程如图所示。回答下列问题：胞细母罕0”去F压7胞细维纤成卵母细胞晕核移植胚胎培养早期胚胎l 胚胎移棺代孕母亲l 克隆动物A(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是，这类酶能将特定部位的两个核昔酸之间的断开。(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是(3)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为（答出两点即可），功能上具有(4)鉴定转基因动物：以免疫小鼠的淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制备M蛋白
31、的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路。【答案】（1)限制性核酸内切酶（限制酶）磷酸酕键(2)沽除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害(3)动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难细胞体积小，细胞核大，核仁明显（任选两点作答）发育的全能性(4)B 用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴细胞与骨韵瘤细胞他合，看筛选出杂交瘤细胞能否产生M蛋臼的单克隆抗休，如果不能产生，说明M基因在克隆动物A中 已失活【分析】l、某因工程技术的拈本步骤：(l)H的基因的获取：方法有从基因文痄中获取、利用PCR技术扩培和
32、人工合成；(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的力法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将l的基因导入动物细胞砓有效的方法是显微注射法：将目的基囚导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；(4)口的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：CD检测转拈囡生物染色休的DNA是台插入日的基因DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质一抗原抗体杂父技术，个休水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
33、。2、核移植(1)概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其币组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个休。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物；(2)原理：动物细胞核的全能性；(3)动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显的于胚胎细胞核移杭。原因：动物肘胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。【详解】(1)拈因工程中切割DNA的工具酌是限制性核酸内切酶（限制酌），故在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）。限制性内切核酸内切酶是作开千其
34、所识别序列中两个脱氧核甘酸之间的磷酸二酕键。不同的限制酶可以获得不同的末端，主要分为黏性末端和平末端。(2)在无曲、尤诽等适宜环境中进行动物1成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，日的是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。(3)由千动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，故与肚胎细胞核移柏技术相比，体细胞核移柏技术的成功率低。胚胎干细胞在形态上表现为细胞体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而个发生分化，可进行冷冻保存，也可进行
35、遗传改造。(4)先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞副合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，制备M蛋白的单克隆抗体；若要利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活，如果M基因已经失活，则克隆动物A中无法产生M蛋白的单克隆抗体，则可利用抗原一抗体杂交技术进行检测。用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，石筛选出杂交瘤细胞能否产生M蛋白的单克隆抗体，如果不能产生，说明N1基因在克隆动物A中已失活。【点睛】本题结合图示考查基囚工程、核移柏、胚胎移梢、单克隆抗体的相关知识，涉及知识点较多，但难度不大，要求考生掌握拈础
36、知识，屈于考纳中识记与理解层次。19.(2021 6浙江月选考）（15分）回答下列（二）小题：（二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用千水质监测，基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。(1)由千人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。(2)为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用DNA连接酶将该基因连接到质粒载体形成，导入到大肠杆荀菌株DH5a中。为了能够连接上该目的基因、并有利千获得含该目的基因的Dl-J5a阳性细胞
37、克降，质粒载体应含有（答出2点即可）。提取质粒后，采用转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。法，将该基因导入到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察(3)为了获取大呈斑马鱼胚胎细胞用千药物筛选，可用分散斑马伍襄胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。答案：（二）（1)富营养化(2)币组DNA分子限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性基因显微注射(3)胰蛋白荫丿泉代饲养层细胞【解析】【分析】2、基囚工程的基本操作步骤为：获取目的基因、形成重组DNA分子、将重组DNA分子导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和日的基因的表达。【详解】（二）(
38、l)生活污水富含N、P,未经处理就大批排放，会导致水体富营养化，导致藻类大批繁殖形成水华或赤潮。(2)具有相同粘性末端的口的基因和载体DN/1（如质粒），经DNJ连桵酶处理后，会形成默组DNA分子。与自的基因相同的限制性核酸内切酌识别序列，可以确保限制性内切酶处理后与目的县因形成相同的粘性末端，以便丁和目的基因的连接。标记基因（抗生素抗性基因）的存在，便丁筛选含有目的基因的受体细胞。动物基因工程，通常采用显微注射法将重组DA分子导入动物受精卵中。(3)使用胰蛋白酶处理贲胚的内细胞团，借助酶的专一性，可分解细胞间原的蛋白顶，让细胞分散，便于培养。将分散的细胞初次在卡氏瓶中培养，称之为原代培养。提
39、高细胞克隆形成率的措施有：选择适宜的培养基、添加血消（胎牛血洁最好）、饲养层细胞（滋养细胞如经射线照射本身失去增姐力的小鼠成纤维细胞）支持生长、激索（胰岛素等）剌激、使用CO2培养箱、调节pl!等。20.(2021 1月浙江高考真题）回答下列（二）小题：（二）三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶霄对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。(1)为保护三叶青的多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用技术，实现了三叶青的林下种植。(2)依据基困工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒
40、上vir系列基因表达形成和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段CT-DNA)。T-DNA进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA上rol系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成，再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根，转入含头抱类抗生素的固体培养基上进行多次培养，培养基中添加抗生素的主要目的是。最后取毛状根转入液体培养基、置千摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的和温度，调节培养基成分中的，获得大撇毛状根，用千提取药用成分。【答案】（二）（1)遗传间种(2)DNA聚合酌愈伤组织(3)维代杀灭发根农杆荫转速营养元素以及生长调节剂的种类和浓度【解析】（
41、二）（1)生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性，为保护三叶古的遗传多样性和保证药材的品质；三叶开的林卜种柏，是利用间种技术。(2)分析题意可知，从屈粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段(T-DNA),DNA复制祈要DNA聚合酶，故用知，酚类化合物诱导发根农杆和质粒上vir系列基囚表达，形成DfA聚合酶和限制性核酸内切酶等。根据柏物组织培养技术过程可知，相应植物激素可以促使叶片细胞脱分化形成愈伤组织，再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根，转入含头袍类抗生索的固体培养基上进行多次继代培养，培养基巾添加抗生素的主要目的是杀灭发根农杆菌。蔽后取毛状根转入液体培养基、贾千摇床上进行悬浮培
42、养，通过控制摇床的转速和温度，调节培养基成分中的营养元系以及生长调节剂的种类和浓度，获得大堂毛状根，用千提取药用成分。21.(2020北京生物高考题）20.研究者以拟南齐根段作为组织培养材料，探讨了激素诱导愈伤组织分化生芽的机制。（l)离体的拟南莽根段在适宜条件下可以培育出完整的植株，说明植物细胞具有。在组织培养过程中，根段细胞经过形成愈伤组织，此后调整培养基中细胞分裂素(CK)与生长素的比例可诱导愈伤组织分化。(2)在愈伤组织生芽过程中，CK通过ARRs(A)基因和WUS(W)基因起作用。为探讨A基因与W基因的关系，将A基因功能缺失突变体（突变体a)和野生型的愈伤组织分别置于CK与生长素比例
43、高的（高 CK)培养基中诱导生芽，在此过程中测定 W基因的表达麓。图1中，野生型的W基因表达量与高CK诱导时间的关系是。分析图1结果可得出的结论是：在高CK诱导下A基因促进W基因表达。得出结论的依据为：与野生型相比，6284 11 坟胀按cm夺宝凶嘲M亡二野兮弓立一突变体a。高CK诱导时间(d)图1枣兰岳胀州K设曲於涵i1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 千材料甲突变体a-C野生型。4 8 12 16 高CK诱导时间(d)图2(3)用转基因方法在上述突变体a中过量表达W基因，获得材料甲。将材料甲、突变体a和野生型三组愈伤组织在高CK培养基中培养，三组愈伤组织分化生芽的比例如图2，由
44、此能得出的结论包括。A.A基因在愈伤组织分化生芽的过程中起作用B.w基因的表达产物调控A基因的表达C.缺失A基因时W基因表达不能促进生芽D.过痲表达W基因可使生芽时间提前【答案】茗升高【解析】【分析】(I).全能性(2).脱分化(3).随名高CK诱导时间的延长，野生型的W基因表达量显(4).随若高CK诱导时间的延长，突变休的W基因表达赞低于野生型(5).ACD 柏物组织培养依据的原珅为梢物体细胞的全能性，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整梢株的潜能；牛长素和细胞分裂索能促进细胞分裂分化，在培养的不同时期对两者的比例会有不同要求，在再分化过程中，牛长索高，促进根的分化，细胞分裂索比例高，促进芽的
45、分化。杭物组织培养的条件：细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。【详解】（1)离体的柏物组织培养成完整梢株的过程体现了细胞的全能性。已分化的细胞形成愈伤组织的过程称之为脱分化。(2)山图可知，野生型的W基因表达量与高CK诱导时间的关系是随若处理时间的延长，W基因的表达量显著升高，突变体的W基因的表达晕明显少千对照组，说明在高CK诱导下A基因促进W基因表达。(3)由题1-1J知，材料甲体内的W基因过记表达，突变体a的A基因不能表达，野牛型是正常的，分析图2可知，山野生型曲线和突变体a曲线对比可知，A基因在愈伤组织分化生芽的过程中起作用，缺失A基因时 W基因表达不能促进生芽；由材料甲曲线和野生型曲线比较可知，过量表达W基因可使生芽时间提前，故选ACD。【点睛】本题结合柱形图和折线图，考查植物组织培养过程分析，要求考生能够从题目中提取有效信息进行分析，并得出正确结论。