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1、检验 原始 记 录编号：报告类别：微生物共页3 / 6项目： 大肠菌群 coliforms样品名称：样品状态： 符合检验要求； 其他检验地点：样品编号： 环境条件：实验依据与步骤 GB4789.3-2016固体和半固体样品：称取 25g 样品置盛有 225ml 生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质容器均质，或放入盛有 225ml 稀释液的无菌均质袋中拍击式均质器拍打，制成为 1:10 样品匀液。依次进展 10 倍递增稀释。液体样品：以无菌吸管吸取 25ml 样品置盛有 225ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶瓶预置适当数量的无菌玻璃珠中混匀，为 1:10 样品匀液。样品稀释 样品匀液的 ph
2、 应在 6.5-7.5 之间，必要时分别用 1mol/lNaOH 或 1mol/lHcL 调节。取1mL110 稀释匀液沿管壁缓缓注入9ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触与稀释液面，振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成 1:100 样品匀液。按上述操作顺序做 10 倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支 1mL 灭菌吸量管。从样品匀液制备到样品接种完毕，全过程不得超过 15min。每个样品，选择 3 个适宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以选择原液，每个稀释度接种 3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST肉汤大肠菌群测定：如果初发酵试验9 超过 1ml，那么
3、用双料 LST 肉汤管法 361 培养 24h2h，观察倒管是否有气泡产生。产气者进展复发酵试验，未产气那么继续培养至 482h，产期进展复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。复发酵试验证实试验用接种环从产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环，移种于煌绿糖胆盐肉汤BGLB管中，361培养 48h2h，观察产气情况。数据分析与结果一、 菌落计数根据证实为大肠菌群的阳性管数，查 MPN 检索表，报告大肠菌群的最可能数。二、缓冲液1. 磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾 34.0g 蒸馏水 500ml稀释液需要 1000ml贮存液：将 34.0g 磷酸二氢钾溶于 500ml 蒸馏水中，用大约 175ml 的
4、 1mol/l 氢氧化钠溶液调节 ph 至 7.2，用蒸馏水稀释至 1000ml 后贮存冰箱。稀释液：取贮存液 1.25ml 用蒸馏水稀释至 1000ml 分装于适宜容器，121高压灭菌 15min。2. 无菌生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000ml将称取好的氯化钠溶于1000ml 蒸馏水中， 121高压灭菌15min。3. PH 调节剂1mol/l 氢氧化钠溶液称取 40g 氢氧化钠溶于 1000ml 无菌蒸馏水中。1mol/l HcL 溶液移取 Hcl90ml，用无菌蒸馏水稀释至 1000ml。三、微生物限量采样方案根据GB 4789.1-20161. 采样方案分为二级和三级方案，二级
5、采样方案设有 n、c、m 值，三级采样方案设有 n、c、m 和 M 值。n：同一批次产品应采集的样品件数c：最大可允许超出 m 值的样品数m：微生物指标可承受水平的限量值M：微生物指标的最高安全限量值2. 例：n=5,c=2,m=1cfu/g,M=10cfu/g,即从一批产品中采集 5 个样品，假设 5 个样品的检测结果均小于或等于 m 值1cfu/g，那么这种情况是允许的； 假设2 个样品的结果X位于 m 值和 M 值之间1cfu/gX10cfu/g，那么这种情况也是允许的；假设有 3 个与以上样品的检验结果位于 m 和 M 之间，那么这种情况是不允许的； 假设有任一样品的检验结果大于 M10cfu/g，那么这种情况也是不允许的。检测记录：校对：检测日期：菌落总数检样原始记录5 / 6初发酵试验未产气培养 482h稀释液与产气管稀释液与产气管稀释液与产气管试数数接结数样种果编日日号期期时时间间检测产品日期名称时间复发酵实验接种 BGLB 管结果MPN检索表(CFU/ml)各试样菌落分析/ 个结论n=5 c=2m=102M=1041234512345123451234512345123456 / 6