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1、实实 验验 一一 细菌的形态细菌的形态(xngti)(xngti)与染色与染色一.录像：微生物学发展史二.实验室规则介绍（生物(shngw)安全）三.细菌形态示教及示教操作四.学生操作：革兰染色法（Gram stain)五.作业第一页，共二十六页。实验室规则介绍（生物(shngw)安全）牢固树立“有菌观念”严格执行“无菌操作(cozu)”严防“杂菌污染”第二页，共二十六页。实验室规则介绍（生物(shngw)安全）一.安全使用水、电、煤二.保持实验(shyn)室安静有序、爱护实验(shyn)器材三.培养良好习惯，树立自我保护意识 穿实验服 不在实验室内吃东西 不将任何实验材料（如细菌涂片、细菌培
2、养物）携带出实验室第三页，共二十六页。实验室规则介绍（生物(shngw)安全）若有传染性材料污染桌面、地面、书、衣物或人体，应立即报告教师(jiosh)，并在教师指导下进行消毒处理 实验用过的物品归还原处，带有传染性的吸管、玻片等，必须放在指定地点 实验结束后，清洗消毒（0.1%新洁尔灭溶液中浸泡）双手后方可离开 四.做好实验室清洁卫生工作第四页，共二十六页。细菌形态(xngti)示教及示教操作1.细菌的形态结构 细菌的大小及排列 细菌的基本(jbn)结构2.细菌的特殊结构 荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢3.细菌的染色检查法第五页，共二十六页。细细 菌菌 形形 态态 示示 教教 荚膜荚膜肺肺 炎炎 球
3、球 菌菌 荚荚 膜膜 （capsulecapsule）第六页，共二十六页。细菌细菌(xjn)(xjn)形态示教形态示教 鞭毛、菌鞭毛、菌毛毛菌毛 pilus电镜下变形杆菌周身鞭毛(binmo)flagellum 光学显微镜下第七页，共二十六页。细细 菌菌 形形 态态 示示 教教 芽孢芽孢(y bo)(y bo)破伤风杆菌破伤风杆菌(gnjn)(gnjn)芽孢芽孢 endospore of C.tetaniendospore of C.tetani光学(gungxu)显微镜下形态电子显微镜下形态第八页，共二十六页。G+菌菌G-菌菌等电点等电点PI23PI45带负电荷多带负电荷多带负电荷少带负电荷
4、少通透性通透性低低高高肽聚糖多，脂质少肽聚糖多，脂质少肽聚糖少，脂质多肽聚糖少，脂质多酒酒精精(jijng)不不易易进进入入酒酒精精(jijng)易易进进入入Gram stain 原 理第九页，共二十六页。Gram stain Gram stain 意意 义义1.鉴别细菌：分成G+菌和G菌2.选择药物：G+菌和G菌对抗菌药物 敏感性不一样3.与致病性有关(yugun)：G+菌产生外毒素 G菌产生内毒素第十页，共二十六页。革兰染色法 Gram stain学生操作：两人一组材料(cilio)：两人一组菌种：表皮葡萄球菌及大肠杆菌斜面各一支 玻片每人1张 革兰染色液一套 接种环每人一支第十一页，共二
5、十六页。革兰染色法 Gram stain基本过程(guchng)：1.涂片2.干燥3.固定4.染色第十二页，共二十六页。接种接种(jizhng)(jizhng)棒冷却棒冷却事先(shxin)加好NS量少第十三页，共二十六页。革兰染色法 Gram stain1.涂片制备(zhbi)：按下图分别加生理盐水各一滴，再按下图分别加菌研匀菌1菌 1+菌 2菌 2第十四页，共二十六页。革兰染色法 Gram stainGram stain制备一张好涂片的基本要素：1.玻片不含油脂(yuzh)(若有油脂可用卷筒纸蘸95%酒精擦干净)。2.生理盐水应尽量少加。3.取菌不宜过多。第十五页，共二十六页。2.干燥：自
6、然干燥或烘干（标本(biobn)面朝上）3.固定：热固定（火焰上来回通过3次固定）目的：目的：1.1.使细胞质凝固使细胞质凝固(nngg)(nngg),以固定细胞形态以固定细胞形态,并并使之牢固附着在载玻片上。使之牢固附着在载玻片上。2.2.杀死细菌，操作更安全杀死细菌，操作更安全第十六页，共二十六页。涂片(tpin)结晶(jijng)紫初染1min碘液媒染1min95%酒精(jijng)脱色30s复红复染30s水洗，干水洗，干 革革 兰兰 染染 色色 全全 过过 程程 示示 意意 图图（紫（紫碘碘酒酒红，红，11半半，每次水洗，阳紫阴红。）半半，每次水洗，阳紫阴红。）水洗，干水洗，干烘干烘干
7、,油镜检油镜检水洗，干水洗，干水洗，干水洗，干水洗，干水洗，干第十七页，共二十六页。实实 验验 报报 告（告（格格 式式）一一.目的目的二二.材料与方法材料与方法三三.结果结果(ji gu)(ji gu)（需用彩笔画示意图）（需用彩笔画示意图）四四.分析与讨论分析与讨论 作为(zuwi)平时成绩记入总成绩第十八页，共二十六页。革兰染色(rns)影响因素分析1.脱色是关键2.菌液涂片不能太厚3.细菌(xjn)生长周期的影响第十九页，共二十六页。细细 菌菌 形形 态态 示示 教（教（革兰染色革兰染色(rns)(rns)）Streptococcus链球菌链球菌streptococcus 链球菌链球菌
8、Staphylococcus葡萄球菌葡萄球菌(p to(p to qi jn)qi jn)E.Coli大肠杆菌大肠杆菌(dchnnjn)第二十页，共二十六页。细细 菌菌 形形 态态 示示 教教美 蓝 染 色奈 瑟 染 色脑脊液标本(biobn)涂片中的脑膜炎双球菌第二十一页，共二十六页。1.1.分成分成1010组，每组组，每组2323人，每组成员参与讨论人，每组成员参与讨论1 1次，以小次，以小组计成绩，占总成绩的组计成绩，占总成绩的10%10%。2.2.评价指标包括以下评价指标包括以下5 5个方面（每个指标个方面（每个指标2 2分）：分）：A.A.主题明确，讲解思路清晰并能即兴回答提问主题明
9、确，讲解思路清晰并能即兴回答提问 B.B.口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意力力 C.PPTC.PPT制作精美制作精美(jngmi)(jngmi)，重点突出并与讲解内容协调，重点突出并与讲解内容协调 D.D.资料准备翔实，数据可靠资料准备翔实，数据可靠 E.E.有良好的团队协作精神有良好的团队协作精神讨论(toln)课基本要求第二十二页，共二十六页。讨论(toln)课安排1.1.消毒与灭菌消毒与灭菌 （实验二）（实验二）2.2.奈瑟菌（实验三）奈瑟菌（实验三）3.3.细菌感染的实验室诊断（实验四）细菌感染的实验室诊断（实验四）4.4.微
10、小微小(wixio)(wixio)杆菌等（实验七）杆菌等（实验七）5.5.梅毒螺旋体（实验八）梅毒螺旋体（实验八）6.6.钩端螺旋体（实验八）钩端螺旋体（实验八）7.7.立克次体（实验八）立克次体（实验八）8.8.支原体（实验八）支原体（实验八）9.9.衣原体（实验八）衣原体（实验八）10.10.真菌（实验九）真菌（实验九）由专人负责由专人负责(fz)安排讨论课安排讨论课第二十三页，共二十六页。讨论课提纲：消毒(xio d)与灭菌1、何为何为消毒、灭菌、防腐、无菌消毒、灭菌、防腐、无菌？2、你认为、你认为(rnwi)在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？3
11、、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？4、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？5、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法进行消毒灭菌时，你认为进行消毒灭菌时，你认为应该优先选哪一种方法应该优先选哪一种方法较好？为什么？较好？为什么？6、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子灭灭活或死亡的活或死亡的机理是什么？机理是什么？注：讲解时间必须控制在注：讲解时间必须控制在20min之内，留之内，留5min让其他同学或老师提问？要求讲解者及其同小组同学答
12、疑。让其他同学或老师提问？要求讲解者及其同小组同学答疑。第二十四页，共二十六页。实验(shyn)二 细菌培养与消毒灭菌实验内容：实验内容：1.录像：消毒与灭菌2.讨论课：消毒与灭菌3.培养基与细菌生长状况示教4.学生操作：细菌接种(jizhng)平板分区划线法 第二十五页，共二十六页。内容(nirng)总结实验一细菌的形态与染色。不将任何实验材料（如细菌涂片、细菌培养物）携带出实验室。细菌形态示教鞭毛、菌毛。1.鉴别细菌：分成(fnchn)G+菌和G菌。3.固定：热固定（火焰上来回通过3次固定）。1.使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。2.评价指标包括以下5个方面（每个指标2分）：。B.口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意力。3.培养基与细菌生长状况示教第二十六页，共二十六页。