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1、实验五实验五细菌生理生化反应、细菌生理生化反应、免疫标本的观察免疫标本的观察微生物学与细胞生物学教研室微生物学与细胞生物学教研室 实验目的实验目的 o掌握细菌生理生化反应原理与方法掌握细菌生理生化反应原理与方法o熟悉细菌的荚膜、芽孢、鞭毛等特殊结构熟悉细菌的荚膜、芽孢、鞭毛等特殊结构o了解淋巴细胞转化、了解淋巴细胞转化、E-E-玫瑰花环试验原理玫瑰花环试验原理实验原理实验原理1.糖发酵试验糖发酵试验不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。大肠埃希菌大肠埃希菌/产气肠杆菌产气肠
2、杆菌葡萄糖葡萄糖CH3COCOOHHCOOH甲酸解氢酶甲酸解氢酶H2+CO2伤寒沙门菌伤寒沙门菌葡萄糖葡萄糖CH3COCOOHHCOOH指示剂：溴麝香草酚蓝指示剂：溴麝香草酚蓝pH6.3(黄黄)；6.3 pH7.2(蓝蓝)pH6.3pH7.2不同微生物所含酶系统不同，某些细菌含有不同微生物所含酶系统不同，某些细菌含有色氨酸酶色氨酸酶，能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。大肠埃希菌大肠埃希菌色氨酸色氨酸产气肠杆菌产气肠杆菌色氨酸酶色氨酸酶+H2OCH3COCOOH吲哚吲哚+检测：检测：吲哚吲哚+对二甲基对二甲基氨基苯甲醛氨基苯甲醛玫瑰吲哚玫瑰吲哚+H2O玫瑰红色玫
3、瑰红色吲哚试验阳性。吲哚试验阳性。实验原理实验原理2.吲哚试验（吲哚试验（I）吲哚阴性。吲哚阴性。检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。大肠埃希菌大肠埃希菌葡萄糖葡萄糖产气肠杆菌产气肠杆菌指示剂：指示剂：甲酸甲酸乙酸乙酸乳酸乳酸琥珀酸等琥珀酸等分解分解甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇葡萄糖葡萄糖分解分解甲基红甲基红pH5.4(橘黄色橘黄色)。实验原理实验原理3.甲基红试验（甲基红试验（M）pH4.5pH5.4某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不
4、同。因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。大肠埃希菌大肠埃希菌产气肠杆菌产气肠杆菌2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3+2CO2O2+KOHCH3COCHOHCH3CH3COCOCH3CH3COCOCH3+胍基胍基红色化合物红色化合物+H2OVP试验阴性。试验阴性。实验原理实验原理4.VP试验（试验（V）肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。大肠埃希菌大肠埃希菌产气肠杆菌产气肠杆菌大肠埃希菌不能利用柠檬酸盐，故不能在以柠檬酸盐大肠埃希菌不能利用柠檬酸
5、盐，故不能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并分解柠檬酸盐产生分解柠檬酸盐产生CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变，再生成碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中的指示剂为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。由绿色变为蓝色。实验原理实验原理 5.枸橼酸盐利用试验（枸橼酸盐利用试验（C）实验材料实验材料 o培养基：生化培养基培养基：生化培养基o菌种：大肠埃细菌、产气肠杆菌菌种：大肠埃细菌、产气肠杆菌o试剂：柯氏试
6、剂、甲基红、试剂：柯氏试剂、甲基红、40%KOH40%KOH、-6%6%萘酚萘酚单糖发酵试验单糖发酵试验直接观察直接观察吲哚试验吲哚试验加入加入5滴柯氏滴柯氏试剂，振荡，试剂，振荡，静置后观察静置后观察甲基红试验甲基红试验加入加入5 5滴甲基红，振荡，滴甲基红，振荡，静置后观察静置后观察伏普试验伏普试验加入加入0.4mL 40%KOH,开盖振荡，再加入开盖振荡，再加入-6%萘酚萘酚柠檬酸盐利用试验柠檬酸盐利用试验直接观察直接观察1.1.细菌生理生化反应结果观察：细菌生理生化反应结果观察：实验步骤实验步骤2.2.细菌特殊结构观察：细菌特殊结构观察：实验步骤实验步骤 芽孢芽孢 破伤风梭菌破伤风梭菌
7、2.2.细菌特殊结构观察：细菌特殊结构观察：实验步骤实验步骤 荚膜荚膜 肺炎链球菌肺炎链球菌2.2.细菌特殊结构观察：细菌特殊结构观察：实验步骤实验步骤 鞭毛鞭毛 变形杆菌变形杆菌3.3.免疫标本观察：免疫标本观察：实验步骤实验步骤 淋巴细胞转化淋巴细胞转化观察已转化3.3.免疫标本观察：免疫标本观察：实验步骤实验步骤 E-E-玫瑰花环玫瑰花环原始记录原始记录 列表描述细菌生理生化反应现象列表描述细菌生理生化反应现象实验结果实验结果1.1.细菌生理生化反应结果细菌生理生化反应结果+IMVC大肠埃希菌大肠埃希菌产气肠杆菌产气肠杆菌+-菌菌 名名+-糖发糖发酵酵实验结果实验结果2.2.细菌特殊结构绘图细菌特殊结构绘图3.3.免疫标本绘图免疫标本绘图注意事项注意事项1.VP1.VP实验一定要注意开盖振荡！且反应时间较长。实验一定要注意开盖振荡！且反应时间较长。谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH