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1、实验二细菌单染与复染第1 页，本讲稿共11 页一、目的要求n 1 巩固油镜的使用方法；n 2 学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法；n 3 学习、掌握细菌的革兰氏染色法；n 4 建立“无菌操作”的概念，学习其技术。第2 页，本讲稿共11 页二、实验原理n 简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。n 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。第3 页，本讲稿共11 页革兰氏染色n
2、 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究n 细菌细胞壁的结构第4 页，本讲稿共11 页n G 肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。n G 细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。第5 页，本讲稿共11 页三、实验材料n 变形杆菌、表皮葡萄球菌n 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。n 革兰氏染色液一套第6 页，本讲稿共11 页四、实验步骤1 简单染色 载 玻 片 中 心 加 半 滴 水无 菌 操 作 取 菌涂 布
3、 于 水 中 使 均匀 并 成 薄 膜 状 干 燥 火 焰 固 定 染 色（12min）水洗干燥镜检2.革兰氏（Gram）染色 涂片干燥固定结晶紫初染（12min）水洗碘液媒染1min 水洗95%酒精脱色（约2030秒）立即水洗番红复染约2分钟水洗干燥镜检（混合涂片染色）第7 页，本讲稿共11 页第8 页，本讲稿共11 页Left:单菌染色结果(G+或 G-)Right:混合菌染色结果(G+和 G-)细菌细胞结构革兰氏染色结果及细菌分类革兰氏染色阴性第9 页，本讲稿共11 页五、实验结果n 文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是G/G。n 绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。第10 页，本讲稿共11 页六、问题与讨论n 1 革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？n 2 对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确？第11 页，本讲稿共11 页