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1、实验二细菌单染与复染第1页，本讲稿共11页一、目的要求一、目的要求n1巩固油镜的使用方法；巩固油镜的使用方法；n2学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法；的简单染色法；n3学习、掌握细菌的革兰氏染色法；学习、掌握细菌的革兰氏染色法；n4建立建立“无菌操作无菌操作”的概念，学习其技术。的概念，学习其技术。第2页，本讲稿共11页二、实验原理二、实验原理n简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生
2、大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。物以及它的特殊构造等。n复染色法：复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：常用的有：革兰氏染色法革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。鞭毛染色法等。第3页，本讲稿共11页革兰氏染色革兰氏染色n丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究n细菌细胞壁的结构第4页，本讲稿共11页nG肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色
3、时融解了类脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。nG细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。保留初染时的紫色。第5页，本讲稿共11页三、实验材料三、实验材料n变形杆菌、表皮葡萄球菌变形杆菌、表皮葡萄球菌n载玻片、接种环、酒精灯载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。擦镜纸、吸水纸等。n革兰氏染
4、色液一套革兰氏染色液一套第6页，本讲稿共11页四、实验步骤四、实验步骤1简单染色简单染色 载载玻玻片片中中心心加加半半滴滴水水无无菌菌操操作作取取菌菌涂涂布布于于水水中中使使均均 匀匀 并并 成成 薄薄 膜膜 状状 干干 燥燥 火火 焰焰 固固 定定 染染 色色（12min）水洗水洗干燥干燥镜检镜检2.革兰氏（革兰氏（Gram）染色）染色 涂片涂片干燥干燥固定固定结晶紫初染结晶紫初染（12min）水洗水洗碘液碘液媒染媒染1min水洗水洗95%酒精酒精脱色脱色（约（约2030秒）秒）立即立即水洗水洗番红番红复染复染约约2分钟分钟水洗水洗干干燥燥镜检镜检 （混合涂片染色）（混合涂片染色）第7页，本
5、讲稿共11页第8页，本讲稿共11页Left:单菌染色结果(G+或 G-)Right:混合菌染色结果(G+和 G-)细菌细胞结构革兰氏染色结果及细菌分类革兰氏染色阴性第9页，本讲稿共11页五、实验结果n文字记录所观察到的革兰氏染色文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是结果的差别，判断是G/G。n绘图描述各菌形态（可在一个视野中）绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。第10页，本讲稿共11页六、问题与讨论六、问题与讨论n1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？实验关键步骤？n2对一株未知菌进行革兰氏染色时，对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确怎样才能确证你的结论正确？第11页，本讲稿共11页