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1、高中生物微生物的高中生物微生物的实验实验室培养第室培养第二二课时课时第1页，此课件共24页哦微生物的接种微生物的接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。基上或活的生物体内的过程叫做接种。微生物微生物常用接种方法有：常用接种方法有：平板划线法平板划线法、稀释涂布平板法稀释涂布平板法。(斜面接种、穿刺接种等）斜面接种、穿刺接种等）第2页，此课件共24页哦接种工具和方法接种工具和方法接种和分离工具接种和分离工具 1 1 1 1接种针接种针接种针接种针 2.2.2.2.接种环接种环接种环接种环 3.3.3.3.接种钩接种钩接种钩接
2、种钩 4.5.4.5.4.5.4.5.玻璃涂棒玻璃涂棒玻璃涂棒玻璃涂棒 6.6.6.6.接种接种接种接种圈圈圈圈 7.7.7.7.接种锄接种锄接种锄接种锄 8.8.8.8.小解剖刀小解剖刀小解剖刀小解剖刀 第3页，此课件共24页哦单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的群体的过程。从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的群体的过程。微生物的微生物的分离纯化分离纯化1 1、纯化原理：、纯化原理：常用常用接种接种方法方法平板划线法平板划线法操作操作核心核心防止杂菌污染，防止杂菌污染，保持培养物纯度保持培养物纯度2 2、微生物接种和纯化的方法、微生物接种和纯化的方
3、法稀释涂布平板法稀释涂布平板法微生物群微生物群分散分散第4页，此课件共24页哦.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌1.1.平板划线法：平板划线法：通过接种环在琼脂通过接种环在琼脂固体培养基表面固体培养基表面连续划连续划线的操作线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。基的表面。在数次划线在数次划线后培养后培养,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是这就是菌菌落落。第5页，此课件共24页哦第6页，此课件共24页哦第7页，此课件共24页哦 原因：原因：一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌一旦划
4、破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第8页，此课件共24页哦第9页，此课件共24页哦第10页，此课件共24页哦答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环
5、上的菌种留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。和感染操作者。问题讨论问题讨论1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧
6、接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？第11页，此课件共24页哦2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？从上一次划线的末端开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到
7、目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。由单个细菌繁殖而来的菌落。第12页，此课件共24页哦Cn下列操作与无菌技术无关的是（下列操作与无菌技术无关的是（）A.接种前用火焰灼烧接种环接种前用火焰灼烧接种环B.接种前用酒精擦拭双手接种前用酒精擦拭双手C.将平板倒置，放入培养箱中培养将平板倒置，放入培养箱中培养D.接种在酒精灯的火焰旁完成接种在酒精灯的火焰旁完成第13页，此课件共24页哦n将菌液进行一系列的将菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，然后将不同稀，然后将不同稀释度的菌液分别释度的菌液分别涂布涂布到琼脂到琼脂固体培养基的表面固体培养基的表面，进行培养。进行培养。n在
8、稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的面形成单个的菌落菌落。2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法第14页，此课件共24页哦2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法的操作方法的操作方法的操作方法的操作方法（1 1）系列稀释操作）系列稀释操作）系列稀释操作）系列稀释操作第15页，此课件共24页哦（2 2）涂布平板操作）涂布平板操作第16页，此课件共24页哦第17页，此课件共24页哦注意注意1.将涂布器末端浸在盛有体积分数为将涂布器末端浸在盛有体积分数为
9、70%的酒精的烧杯的酒精的烧杯中。中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。量酒精的涂布器在火焰上引燃。2.操作中一定要注意防火！操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。，以免引燃其中的酒精。讨论：讨论：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。第第2步步应该如何进行无菌操作？应该如何进行无菌操作？涂布平板操作第涂布平板操作第2步要用无菌移液管，操作时左手将皿盖步要用无菌移液管，操作时左手将皿盖打
10、开一条缝隙，右手将移液管中的菌液迅速滴加到培养基表打开一条缝隙，右手将移液管中的菌液迅速滴加到培养基表面，并盖上皿盖。面，并盖上皿盖。答：答：答：答：应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距。例如，酒精灯与培养皿的距。例如，酒精灯与培养皿的距。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周
11、围等等。等等。等等。等等。第18页，此课件共24页哦三、微生物的恒温培养三、微生物的恒温培养将将接种后的培养基接种后的培养基和一个和一个未接种的培养基未接种的培养基都放入都放入3737恒温恒温箱中，培养箱中，培养12h12h和和24h24h后，分别观察记录结果。后，分别观察记录结果。实验组实验组对照组对照组第19页，此课件共24页哦菌落菌落.定义：定义：单个或者少数微生物在单个或者少数微生物在固体培养基固体培养基上大量繁殖时，上大量繁殖时，会形成一个会形成一个肉眼可见肉眼可见的、的、具有一定形态结构具有一定形态结构的的子子细胞群体细胞群体，叫做菌落。（，叫做菌落。（P14,P18)P14,P1
12、8).特征：特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。明度等。.功能：功能：每种微生物在一定条件下所形成的菌落，每种微生物在一定条件下所形成的菌落，可以可以作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。第20页，此课件共24页哦几种菌落及其形态第21页，此课件共24页哦几种菌落及其形态第22页，此课件共24页哦四、结果分析与评价四、结果分析与评价 n1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？（对照组）没有。若有菌落，说明培养基被污染。n2、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立的菌落？这些菌落的颜色、形状和大小相似吗？是。相似。如在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。第23页，此课件共24页哦n3、培养12 h和24 h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。菌落的大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大。n4、如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？说明有杂菌污染。可能原因：灭菌不彻底、接种过程或培养过程中有杂菌污染。四、结果分析与评价四、结果分析与评价 第24页，此课件共24页哦