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1、微生物的实验室培养第二课时1第1页，本讲稿共16页微生物实验室培养（知识点总结）（知识点总结）2第2页，本讲稿共16页复习题1、甲、乙、丙是三种微生物，下表、甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖；甲能在中正中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁殖，甲、丙中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是：都不能。下列说法正确的是：粉状硫粉状硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖蔗糖10g（NH）2SO40.4gH2O 100
2、mLMgSO49.25gCaCI20.5g+-+-+A、甲乙丙都是异养微生物、甲乙丙都是异养微生物B、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物3第3页，本讲稿共16页复习题2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是：化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A、B、C、D、4第4页，本讲稿共16页三、纯化
3、大肠杆菌三、纯化大肠杆菌实验目的：实验目的：实验目的：实验目的：接种大肠杆菌于培养基上，经过培养使其形成由单个细胞繁殖形成的子细胞群体，即菌落。实验过程：实验过程：实验过程：实验过程：(知识网络）知识网络）知识网络）知识网络）配制培养基配制培养基配制培养基配制培养基接种大肠杆菌接种大肠杆菌接种大肠杆菌接种大肠杆菌恒温培养箱中培养（恒温培养箱中培养（恒温培养箱中培养（恒温培养箱中培养（1224h1224h）结果分析与评价结果分析与评价结果分析与评价结果分析与评价计算计算计算计算 称量称量称量称量 溶化溶化溶化溶化 灭菌灭菌灭菌灭菌 倒平板倒平板倒平板倒平板调调调调PH PH 分装分装分装分装 包
4、扎包扎包扎包扎菌种保藏菌种保藏菌种保藏菌种保藏平板划线平板划线平板划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板稀释涂布平板稀释涂布平板未接种的培养（对照组）未接种的培养（对照组）未接种的培养（对照组）未接种的培养（对照组）接种的培养（实验组）接种的培养（实验组）接种的培养（实验组）接种的培养（实验组）培养基配制成功与否？培养基配制成功与否？培养基配制成功与否？培养基配制成功与否？接种操作成功与否？接种操作成功与否？接种操作成功与否？接种操作成功与否？5第5页，本讲稿共16页配制培养基配制培养基在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将
5、培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒平板过程总结：倒平板过程总结：6第6页，本讲稿共16页Q1.培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到_左右时，才能倒左右时，才能倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？平板。用什么办法来估计培养基的温度？_Q2.操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是：操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是：_Q3.将平板倒置的目的是：将平板倒置的目的是：_Q4.在倒平板过程中，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部在倒平板过程中，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？位，这个平板还能用来培养微生物吗？
6、为什么？_5050感觉锥形瓶的温度刚刚感觉锥形瓶的温度刚刚感觉锥形瓶的温度刚刚感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手，不烫手，就可以倒平板了就可以倒平板了就可以倒平板了就可以倒平板了防止防止防止防止瓶口微生物瓶口微生物瓶口微生物瓶口微生物污染污染污染污染培养基培养基培养基培养基既可以使既可以使既可以使既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发，培养基表面冷凝的水分更好的挥发，培养基表面冷凝的水分更好的挥发，培养基表面冷凝的水分更好的挥发，又可以防又可以防止止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染皿盖上的水珠落入培养基，造成污染不能，不能，因为因为空气中的空气中的空气中的空气中的微生物可能微生物可能微生物可能微生物可
7、能在皿盖和皿底之间的培养在皿盖和皿底之间的培养在皿盖和皿底之间的培养在皿盖和皿底之间的培养基上基上基上基上滋生滋生。配制培养基配制培养基7第7页，本讲稿共16页平板划线接种平板划线接种原理：通过通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操连续划线的操作作，将聚集的菌种逐步稀释逐步稀释分散到培养基表面。8第8页，本讲稿共16页平板划线接种平板划线接种灼烧接种环冷却 划线 （第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却 划线 （第二区域）灼烧接种环冷却 划线 （第三区域）灼烧接种环冷却 划线 （第四区域）灼烧接种环冷却 划线 （第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养9第9页，本讲稿共16页平板划线接种平板划线接种
8、第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域10第10页，本讲稿共16页Q2：每次划线前灼烧接种环的目的：Q3：划线结束后灼烧接种环的目的：平板划线接种平板划线接种答案：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基答案：杀死上次划线结束后残留的菌种答案：及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环 境和操作者。Q1：第一步灼烧接种环的目的：11第11页，本讲稿共16页稀释涂布平板接种原理：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。12第12页，本讲稿共16页1、梯度稀释、梯度稀释2、涂布平板、涂布平板稀释涂布平板接种13
9、第13页，本讲稿共16页结果分析与评价1、培养基制备成功的标准2、接种操作成功的标准如果未接种的培养基在恒温箱中保温12天后无菌落生长，说明培养基配制是成功的，否则实验失败，需重新配制。如果培养基上生长的菌落颜色、性状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明操作是符合要求的。如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，实验失败，需分析原因，再次实验。14第14页，本讲稿共16页菌种的保藏（了解）菌种的保藏（了解）1、临时保藏临时保藏：适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管置于4的冰箱中保藏2、甘油冷冻管保藏：甘油冷冻管保藏：适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀，放-20的冷冻箱中保藏15第15页，本讲稿共16页纯化大肠杆菌（实验过程）16第16页，本讲稿共16页