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1、优质文本高中生物选修一生物技术实践 知识点总结专题一 传统发酵技术的应用课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。2、有氧发酵：醋酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵 3、酵母菌是兼性厌氧菌型单细胞真核生物酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 C6H12O66O2626H2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 C6H12O62C2H5226、20左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18-25 7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮外表的野生型酵母菌.在发酵
2、过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧 呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 2C2H54O236H2O10、控制发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为3035，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的时机。有两条途径
3、生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。11、实验流程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒醋酸发酵果醋12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，橙色的重铬酸钾与酒精反响呈现灰绿色。先在试管中参加发酵液2L，再滴入物质的量浓度为3的H243滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色13装置图解读：(1)各部位的作用： 充气口：在醋酸发酵时连接充气泵进行充气。排气口：排出酒精发酵时产生的2；与排气管相连的长而弯曲的胶管：加水后防止空气中微生物的污染。出料口：用来取样。(2)该装置的使用方法使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口
4、连接气泵，输入氧气。课题二 腐乳的制作1、多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。3、实验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制4、毛霉生长的温度条件： 15185、来源：来自空气中的毛霉孢子， 直接接种优良毛霉菌种6.食盐的作用：析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬；同时抑制微生物的生长，防止豆腐块腐败变质。盐的浓度过高会影响腐乳的口味7.豆腐生长的白毛是毛霉的白色
5、菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。8.吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮。这层“皮是前期发酵时在豆腐外表上生长的菌丝匍匐菌丝，对人体无害。它能形成腐乳的“体，使腐乳成形。9、卤汤中的酒的含量应控制在12%左右。酒精过多，腐乳成熟的时间将会延长；酒精过低缺乏以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败。10、腌制腐乳时，越接近瓶口，杂菌污染的可能性越大，因此要随着豆腐层的加高增加盐的用量，在接近瓶口的外表，盐要铺厚一些，以有效防止杂菌污染。课题三 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量亚硝酸盐含量发酵时间d1. 制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，将糖分解为乳酸
6、。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。分裂方式是二分裂。反响式为：C6H12O62C3H6O3+能量 含抗生素的牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌。2.亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但在适宜 、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开始降低，故在10天之后食用最好3.测定亚硝酸盐含量的原理：比色法在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反响后，与 1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。4、材料的选
7、择及用量。蔬菜应新鲜，假设放置时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被复原成亚硝酸盐。清水和盐的质量比为41，盐水要煮沸后冷却。煮沸有两大作用，一是除去水中氧气，二是杀灭盐水中的其他细菌。5、泡菜坛要选择透气性差的容器，以创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。泡菜坛边沿的水槽还要注满水，以保证乳酸菌发酵所需要的无氧环境，并注意在发酵过程中经常补水。6、温度:发酵过程温度控制在室温即可,最好在2636 。温度过高，那么易滋生杂菌；温度过低，那么发酵时间延长7、泡菜制作过程中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化情况分析：发酵时期乳酸菌乳酸亚硝酸盐发酵初期少(有氧气，乳酸菌活动受到抑制)少增加(硝酸盐复原菌作用
8、)发酵中期最多(乳酸抑制其他菌活动)积累增多，下降下降(硝酸盐复原菌受抑制，局部亚硝酸盐被分解)发酵后期减少(乳酸积累，下降，抑制其活动)继续增多，继续下降下降至相对稳定(硝酸盐复原菌被完全抑制)8、有关泡菜制作的几个问答：(1)用白酒擦试泡菜坛的目的是：消毒(2)菜坛为什么要密封：因为乳酸菌为厌氧型微生物，密封后造成缺氧环境假设菜坛有裂缝,可能出现的结果：菜坛有裂缝，将导致乳酸菌不能正常生长，而一些杂菌大量繁殖，泡菜会变质(3)假设制作的泡菜“咸而不酸，可能的原因是：盐过多，抑制了乳酸菌的发酵(4)参加一些“陈泡菜水的作用是：提供乳酸菌菌种专题二 微生物的培养与应用课题一 微生物的实验室培养
9、一、培养基1.培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2.培养基按照物理性质可分为液体培养基 半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中参加凝固剂琼脂是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基外表生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业生产，固体培养基应用于微生物的别离、鉴定和活菌计数，半固体培养基那么常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。3.按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的别离
10、鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。4.按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中参加某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。培养酵母菌和霉菌时，可在培养基参加青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基参加高浓度的食盐鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中参加某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。如用伊红-美蓝培养基鉴别饮用水是否含有大肠杆菌，假设有那么菌落呈深紫色，并带有金属光泽5.培养基的化学成分包括 水、 碳源 、 氮源 、无机盐、生长因子等。6.碳源：能为微生物的代谢提
11、供碳元素的物质。如2、3等无机碳源；糖类、脂质、蛋白质、有机酸、牛肉膏等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。7.氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、3、3-、4+无机氮源，蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨、核酸等有机氮源。只有固氮微生物才能利用N2。同一种物质既可以作碳源又可以作氮源。8、生长因子：有维生素、氨基酸、碱基等。作用：酶和核酸的组成成分，参与代谢过程中的酶促反响。9.培养基还要满足微生物生长对、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的调至酸性，培养细菌是需要将调至中性或微碱性，培养厌氧型微
12、生物是那么需要提供无氧的条件。10、确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温12天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否那么需要重新制备二、无菌技术1.无菌技术获得纯洁培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为防止周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应防止已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效防止操作者自身被微生物感染。2.消毒
13、与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体外表或内部一局部对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法对于一些不耐高温的液体还有化学药剂如70%酒精、氯气、石炭酸等消毒、紫外线消毒。灭菌那么是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； 培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。外表灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯 。比较项理化因素的作用强度消灭
14、微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和局部生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能3.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基1方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。2倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基约1020倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需510。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。倒平板操作的讨论.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？提
15、示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基外表的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。4.纯化大肠杆菌1微生物接种的方法最常用的
16、是平板划线法和稀释涂布平板法。2平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基外表连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的外表。在数次划线后培养，可以别离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。3稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的外表，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。4用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基外表形成单个的菌落，以便于纯化菌种。5、平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并翻开棉塞。将试管口通过火焰
17、。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。将试管通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖翻开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。平板划线操作的讨论.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留
18、的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6、涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到
19、培养基外表。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基外表。涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌。例如，酒精灯与培养皿的距离要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。7、菌种的保存1对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。临时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4的冰箱中保藏。以后每36个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基
20、上。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。2对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3的甘油瓶中，装入1甘油后灭菌。将1培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20的冷冻箱中保存。课题二 土壤中分解尿素的细菌的别离与计数1、尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶尿素最初是从人的尿液中发现的一、筛选菌株 1实验室中微生物的筛选的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件包括营养、温度、等，同时抑制或阻止其他微生物生长。2选择培养基在微生物学中，将允
21、许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。3配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点参加某种物质以到达选择的目的。例如，培养基中不参加有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不参加氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；参加高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等；在以石油为唯一碳源的培养基中，可以抑制不能利用石油的微生物生长，而能利用石油的微生物那么能得到生长而到达别离的目的；将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物；培养基中参加青霉素可以别离出酵母菌和霉菌。别离土壤中分解尿素的细菌的培养基条件：以尿素为唯一的氮源二、统计菌落数目1测定微生
22、物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。2稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。采用此方法的本卷须知：1.一般选取菌落数在30300之间的平板进行计数2.为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中参加 3.本法仅限于形成菌落的微生物3、显微镜直接计数法：利用血细胞计数板在显微镜
23、下计算一定很容积样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌和活菌三、设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照试验组，排除任何其他可能原因的干扰。四、实验设计实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。1土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约38的土壤层取样。2样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生
24、长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104 105 106 测定放线菌的数量，一般选用103 104 105 测定真菌的数量，一般选用102 103 1043微生物的培养与观察不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌3037 12天放线菌2528 57天 霉菌2528 34天每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间缺乏而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一定的培养条件下相同的培养基、唯独及培养时间，同种微生物表现出稳定的菌落特
25、征，包括形状、大小、隆起程度、颜色疑难解答1如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数=*M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数2对别离菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法：土壤中分解尿素的细菌的别离实验中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，升高，因此可以通过检测培养基的变化来判断该化学反响是否发生如参加酚红指示剂，遇碱变红课题三 分解纤维素的微生物的别离一、纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多
26、糖类物质。二、纤维素与纤维素酶1棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。2纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。三、纤维素分解菌的筛选1筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反响直接对微生物进行筛选。2刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反响。当我们在含有纤维素的培养基中参加刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红
27、色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。四、别离分解纤维素的微生物的实验流程：土壤取样选择培养此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落1土壤采集 选择富含纤维素的环境。2刚果红染色法别离纤维素分解菌的步骤： 倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板3刚果红染色法种类一种是先培养微生物，再参加刚果红进行颜色反响，另一种是在倒平板时就参加刚果红。专题三 植物的组织培养技术 课题一 菊花的组织培养一、植物组织
28、培养的根本过程1. 植物组织外植体脱分化愈伤组织再分化胚状体或丛芽移植新个体细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异。愈伤组织：愈伤组织的细胞排列疏松而无规那么，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。植物细胞的脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，也叫去分化。再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体二、影响植物组织培养的条件 1、材料的种类：不同的植物组织，培养的难易程度差异很大。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间
29、的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。 2、适宜的营养：离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常用的培养基是培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、，微量元素是、B、I、，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖作用是提供碳源，维持细胞的渗透压等。 3、植物激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培
30、养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。4、环境条件：、温度、光等环境条件。 不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将控制在5.8左右，温度控制在1822，并且每日用日光灯照射12h. 三、 操作流程 1、配制固体培养基：配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液培养基母液。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。配制培养基：应参加的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1000毫升。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素 原因是菊花茎段组织培养比较容易。灭菌：采取
31、的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。培养基中各种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比，培养基有哪些特点？大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，培养基那么需提供大量无机营养。2、外植体的消毒 外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20左右。用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体
32、取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体外表水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中12。取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。3、接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种78个外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作。4、培养：应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度1822和光照12h5、移栽：栽前应先翻开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。6、栽培 外植体在培养过程中可能会被污染，原因有外植体消毒不彻
33、底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。专题二 月季的花药培养1、被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两局部。花药为囊状结构，内部含有许多花粉。花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段。2、 产生花粉植株的两种途径： 花药中的花粉脱分化胚状体分化丛芽 诱导生根移栽花药中的花粉脱分化愈伤组织再分化丛芽 这两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。注意：无论哪种产生方式，都要先诱导生芽，再诱导生根3、影响花药培养的因素: 材料的选择与培养基的组成
34、是主要的影响因素亲本的生理状况：花粉早期是的花药比后期的更容易产生花粉植株，选择月季的初花期。适宜的花粉发育时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高花蕾：选择完全未开放的花蕾4、实验操作1材料的选取：选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色2材料的消毒:70%酒精浸泡30无菌水清洗0.1%氯化汞浸泡2-4无菌水冲洗3接种和培养注意：植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是：培养基配制方法、无菌技术及接
35、种等根本相同。 两者的不同之处在于：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。这都使花药培养的难度大为增加。5、菊花组织培养和月季的花药培养的区别：(1)材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝；月季的花药培养实验中，应选择花粉发育过程中的单核期的花粉进行培养。(2)外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是无菌水。(3)培养过程：在初期，菊花的组织培养需光照，月季的花药培养不需光照；而在后期均需光照专题四 酶的研
36、究与应用课题课题1 果胶酶在果汁生产中的作用1、果胶植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。2、果胶酶果胶酶能够分解果胶，瓦解植物细胞的细胞壁及胞间层，使榨取果汁更容易，而果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清。果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。3、酶的活性与影响酶活性的因素(1)酶的活性指酶催化一定化学反响的能力。酶活性的上下可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反响的反响速度来表示。酶反响速度用单位时间内单位体积中反响物的减少量或生成物的增加量来表示。(2)
37、影响酶活性的因素： 温度 酶的抑制剂4、工业制作果汁流程：水果榨汁瞬间高温灭菌90冷却酶处理45 1-3h离心别离过滤浓缩瞬间高温灭菌90包装制品课题2 探讨加酶洗衣粉的洗剂效果1加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。2碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污迹从衣物上脱落。脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能分别将大分子的脂肪、淀粉和纤维素水解为小分子物质，使洗衣粉具有更好的去污能力。课题3 酵母细胞的固定化1 固定化酶技术使用固定化酶技术，将这种酶
38、固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反响柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反响溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反响柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反响柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反响柱的下端流出。反响柱能连续使用半年，大大降低了生产本钱，提高了果糖的产量和质量。2固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋
39、材料中漏出。固定化酶优点：使酶既能与反响物接触，又能与产物别离，还可以被反复利用。固定化细胞优点：本钱更低，操作更容易，可以催化一系列的化学反响。3、实验操作1酵母细胞的活化用蒸馏水与酵母细胞混合均匀 2配制0.05的2溶液3配制海藻酸钠溶液(用酒精灯小火间断加热 4海藻酸钠溶液与酵母细胞混合5固定化酵母细胞专题五 和蛋白质技术课题一的粗提取与鉴定一、实验原理的粗提取：利用与、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取，去除其他成分。1的溶解性 和蛋白质等其他成分在不同浓度的溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以到达别离目的。此外，不溶于
40、酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质那么溶于酒精。利用这一原理，可以将与蛋白质进一步的别离。2对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而在80以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对没有影响。3的鉴定 在沸水浴条件下，遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定的试剂。原理总结：通过利用不同浓度溶液溶解或析出，可以从细胞中提取和提纯；再利用酒精进一步将与蛋白质别离开来，到达提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是。二、实验设计1、实验材料的选取不同生物的组织中含量不同。应选取含量高、易得、便于提取的材料。本实验用鸡血细胞有两个原
41、因。一是因为鸡血细胞核的含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。鸡血细胞破碎以后释放出的，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。2、破碎细胞，获取含的滤液1假设选用鸡血和洋葱作实验材料，那么怎样获取含的滤液？在鸡血细胞液中参加一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，参加一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。2去除滤液中的杂质最初获得的滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯方案一的原理是在不同浓度溶液中溶解度不同2溶解0.14析出2
42、溶解95%冷酒精析出。方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解；方案三的原理是蛋白质和的变性温度不同。3为什么反复地溶解与析出，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出，就能够除去与溶解度不同的多种杂质。4在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置23分钟，析出的白色丝状物就是。呈白色。怎样鉴定析出的白色丝状物就是呢？具体做法：试管2支，编号甲乙各加等量2 5甲中放入少量白色丝状物，使之溶解各加4二苯胺，混合均匀沸水浴5观察颜色变化三、实验操作
43、制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心破碎细胞，释放加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内参加至2，同一方向缓慢搅拌析出加蒸馏水至0.14，过滤取滤渣，再溶解到2溶液中除去细胞质中的大局部物质。初步纯化 与等体积95冷却酒精混合，析出白色丝状物除去核蛋白、多糖等。鉴定 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色本卷须知：在鸡血中参加柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢细胞破裂快速搅拌；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。课题2多聚酶链式反响扩增片段一、技术扩增的过程，与细胞内复制过程类似：1细胞内
44、复制条件模板的两条单链 原料四种脱氧核苷酸 酶解旋酶、聚合酶引物 能量 2、复制的条件体外扩增片段模板模板的两条单链 原料四种脱氧核苷酸 酶聚合酶 两种引物一小段或 可控制温度3细胞内复制过程解 旋：在解旋酶作用下两条链翻开合成子链：以解开的每一段母链为模板，在聚合酶的作用下，按照碱基互补配对原那么，合成与母链互补的子链。形成子代分子：延伸子链，母子链盘绕形成双螺旋结构。4体外扩增片段技术变性：在90-95时解旋复性：在50-55时引物与单链结合延伸：在70-72时合成子链两个引物间的序列解开螺旋：在80100时，双螺旋翻开，形成两条单链，称为变性。恢复螺旋：在50左右时，两条单链重新形成双螺
45、旋结构，称为复性。复制条件：缓冲液模板,四种脱氧核苷酸,热稳定聚合酶,两种引物。反响场所：仪自动温度周期性调节。思考缓冲液相当细胞内的什么成分？核基质4的反响过程课题3 血红蛋白的提取和别离一、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和别离各种蛋白质。1凝胶色谱法分配色谱法：1原理：根据相对分子质量的大小别离蛋白质的有效方法。分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。2凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。3别离过程： 混合物上柱洗脱大分子流动快、小分子流动慢收集大分子收集小分子洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。4作用： 别离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。2缓冲溶液1原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成如H233， 2424等，调节酸和盐的用量，可配制不同的缓冲液。2缓冲液作用：抵抗外界酸、碱对溶液的干扰而保持稳定。3电泳：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程1原理：待别离样品中各种分子带电性