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1、重 组DNA技术的基本工具Basic tools for the recombinant DNA technology基因工程目录01DNA的粗提取与鉴定02习题巩固DNA的粗提取与鉴定R o u g h e x tr a c tio n a n d id e n tific a tio n o f D N A01一、实验原理1.提取DNA的原理 利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，对它们进行提取。(1)DNA 酒精，某些蛋白质 酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。(2)DNA在不同浓度的 中的溶解度不同，它能溶于 的NaCl溶液。不溶于溶于NaCl溶液2
2、mol/L2.鉴定DNA的原理在一定温度下（沸水浴），DNA遇 试剂会呈现。二苯胺蓝色DNA的粗提取与鉴定当NaCl浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出二、目的要求：1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA 进行鉴定。三、材料用具：1.材料：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）洋葱 花菜
3、香蕉 猪肝 鸡血 菠菜DNA的粗提取与鉴定2.试剂及作用：(1)研磨液(2)体积分数为95%的酒精(3)2mol/L 的NaCl溶液(4)二苯胺试剂(5)蒸馏水溶解并提取DNA析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L，从而析出DNA研磨液成分 作用SDS 使蛋白质变性EDTA 抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNADNA的粗提取与鉴定（1）通过研磨释放 DNA 称取约30g 洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL 研磨液，充分研磨（可加入少量石英砂助研）。研磨的目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中研磨时间不宜太长：防止研
4、磨时产生的热量影响DNA的提取量有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶：研磨效果好（有利于充分研磨）研磨不宜太用力 四、方法步骤（2）过滤获取含DNA的上清液 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500 r/min 的转速下离心5 min，再取上清液放入烧杯中。为减少 DNA 的损失，过滤过程一般使用纱布可能含有核蛋白、多糖等杂质低温放置几分钟的作用：可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。四、方法步骤 在上清
5、液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置23 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的 DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000 r/min 的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。（3）冷却酒精析出DNA减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。四、方法步骤（4）DNA的鉴定 取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试
6、管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。加入2mol/L氯化钠溶液不加入丝状物加入4mL二苯胺试剂加入2mol/L氯化钠溶液加入丝状物加入4mL二苯胺试剂实验组 对照组水浴加热溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关四、方法步骤1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。结果分析与评价习题巩固E x
7、ercises to co n so lid a te02 1下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的原理的叙述，错误的是（）A利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA与蛋白质分离B利用高温能使蛋白质变性，却对DNA没有影响的特性，可将DNA与蛋白质分离C在用预冷的酒精沉淀DNA时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA断裂D利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于NaCl溶液中B 2下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的原理的叙述，错误的是（）A利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA与蛋白质分离B利用高温能使蛋白质变性
8、，却对DNA没有影响的特性，可将DNA与蛋白质分离C在用预冷的酒精沉淀DNA时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA断裂D利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于NaCl溶液中B 3下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，正确的是（）A取材时可选用鸡血、洋葱、香蕉等富含DNA的材料进行实验B将白色丝状物置于2mol/L的NaCl溶液中，离心后弃去上清液C可将洋葱置于清水中，细胞吸水破裂后将DNA释放出来D鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中并进行沸水浴A 4下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（）A羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料B提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的研磨液C预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解D在沸水浴条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色A