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1、大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体（种群）菌落是鉴定菌种的重要依据菌落是鉴定菌种的重要依据3、干热灭菌法、干热灭菌法160-170 下加热下加热1-2h。4、G6玻璃纱漏斗过滤法玻璃纱漏斗过滤法5、其他、其他三角瓶用封口膜、超净台操作（含紫外灯、过滤风）三角瓶用封口膜、超净台操作（含紫外灯、过滤风）在接种时要速度快在接种时要速度快3、如何分离大肠杆菌、如何分离大肠杆菌划线分离法划线分离法（平板划线分离法）（平板划线分离法）培养皿倒置培养皿倒置划线的末端划线的末端出现不连续的出现不连续的单菌落单菌落
2、涂布分离法涂布分离法（稀释）（稀释）1、玻璃刮刀放在酒精溶液中待用、玻璃刮刀放在酒精溶液中待用2、取出时要经过灼烧、取出时要经过灼烧3、一般要稀释菌液进行培养、一般要稀释菌液进行培养稀释稀释10-510-7倍，倍，取取0.1ml不同浓度的稀释液不同浓度的稀释液4、大肠杆菌的培养和分离的过程、大肠杆菌的培养和分离的过程溶解溶解 计算称量计算称量 调调pH pH 分装分装 加塞，包扎加塞，包扎 灭菌灭菌 二二 倒平板、制斜面倒平板、制斜面三三 大肠杆菌的培养大肠杆菌的培养四四 大肠杆菌的分离大肠杆菌的分离划线分离法（或涂布分离法）划线分离法（或涂布分离法）使所需细菌大量繁殖使所需细菌大量繁殖 获得
3、单菌落，纯化菌株获得单菌落，纯化菌株 五五 斜面接种培养斜面接种培养目的菌株的纯培养和菌种保存目的菌株的纯培养和菌种保存一一 配制配制LBLB培养基培养基,并灭菌并灭菌 菌种管菌种管接种环（针）接种环（针）接种接种三角瓶（液体培养基）三角瓶（液体培养基）接种在接种在固体培养基中固体培养基中实验实验2：分离以尿素为氮源的微生物：分离以尿素为氮源的微生物1.如何设计对照？如何设计对照？2.如何把液体培养基配置成固体培养基？如何把液体培养基配置成固体培养基？3.如何完成菌液稀释？如何完成菌液稀释？用什么液体来稀释菌液？用什么液体来稀释菌液？4.用什么方法来分离这种微生物？用什么方法来分离这种微生物？
4、5.该实验简单的设计思路是什么？该实验简单的设计思路是什么？例例1、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了提供了和和。除此之外，。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是培养基还必须含有的基本成分是和和。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是
5、。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定中培养，培养的温度设定在在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种一平板上接种作为对照进行实验。作为对照进行实验。（4）培养）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有的菌落，这说明湖水样品中有种细菌。一般说种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越（5）如果提高培养
6、基中）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐的浓度，可以用于筛选耐细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为。KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10 g10 g尿素尿素1 g1 g琼琼脂脂15 g15 g将上述物将上述物质质溶解后，用溶解后，用蒸蒸馏馏水定容到水定容到100 mL100 mL（1）此培养基能否用于植物组织培养？）此培养基能否用于植物组织培养？（2）培养基中加入尿素的目的是）培养基中加入尿素的目的是筛选筛选，这种培养基属于，这种培养
7、基属于培养基。培养基。（3）“目的菌目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的的和和，实验需要振荡培养，原因是，实验需要振荡培养，原因是。（4）转为固体培养基时，常采用）转为固体培养基时，常采用的的方法接种，获得单菌落后继续筛选。方法接种，获得单菌落后继续筛选。（5）下列材料或用具：）下列材料或用具：培养细菌用的培养基与培养皿，培养细菌用的培养基与培养皿，玻棒、试管、锥形瓶和吸管，玻棒、试管、锥形瓶和吸管，实验操作者的双手。实验操作者的双手。其中需要灭菌的是：其中需要灭菌的是：；需要消毒的是：；需要消毒的是：。（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行）实验结束后，使用过的培养基应该进行,处理后，才能倒掉。处理后，才能倒掉。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！18