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1、实验五青贮饲料氨态氮含量的测定准备工作：两种试剂的配制：试剂A:称取9.976克苯酚，50.65mg亚硝基铁氰化钠，用去离子水定容至1000ml。试剂B:称取5.0克氢氧化钠溶于去离子水，再加13.5ml次氯酸钠，最后定容至1000ml。一、实验仪器及试剂仪器:分光光度计，水浴锅，移液枪（1ul)及移液管(10ml,5ml),容量瓶，烧杯，试管若干。试剂A,B，0.2mol/l的盐酸溶液（取12ml盐酸定容至1000ml），氯化铵 二、实验步骤取待测液2.0ml（空白加蒸馏水）放入试管中，每个样3个重复，加入8ml0.2mol/l的盐酸溶液混匀。取混合液0.4ml于另一试管中，以次加入A,B液
2、各5.0ml。60恒温水浴10min，反应结束后于冷水中冷却。在560nm处测溶液的吸光度值。三、标准曲线的绘制称取1.00克NH4Cl用去离子水溶解后定容至100ml，配制成浓度为10mg/ml的标准母液。分别取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml母液于100ml容量瓶中，配成一个系列的标准液。取各标准液2.0ml于试管中，每个标准3个重复，加入8.0ml,0.2mol/l盐酸混匀再取0.4ml混合液于另一试管中，依次加入A液5.0ml和B液5.0ml，60恒温水浴箱中反应10min。反应结束后，立即取出于冷水中冷却，在560nm波长处测OD值。以NH4Cl浓度为横坐标，OD为纵坐标，绘制NH4Cl标准曲线。四、计算方法将待测液所得的吸光度值带入标准曲线中，得出氯化铵的浓度，将其转化为氨态氮的浓度，然后根据浸出液所取得样品重量以及加入水的重量，计算出青贮料单位干物质中含的氨态氮量。氨态氮含量(g/kg DM)=所得的氯化铵的浓度17/53.5/1ml待测液对应青贮料干物质的量五、注意事项每一步加完溶液都要摇匀，使其反应完全。水浴后冷却摇匀再比色。计算结果注意单位。