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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即
2、坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强强子，别跑了，快来我给你扇扇子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，边扇边训，“你看热的，跑什么？你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千温馨幸福，
3、有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携
4、带着特有的念想，一年年，半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅一天天，流向长长的时间隧道，袅大鼠血管平滑肌细胞的培养相关帮助w需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎wfantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台w需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断
5、试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入体外培养细胞的分型1.贴附型:细胞贴附在支持物上生长2.悬浮型：不贴附于支持物，呈悬浮生长1.细胞培养实验室2.培养用品3.细胞培养液、培养基准备“无菌”细胞培养实验室1.无菌操作区（无菌操作室、超净台）2.孵育区3.制备区4.储藏区5.清洗和消毒灭菌区培养试剂的配制Hanks液 (单位g)wCaCl2 0.14wKCl 0.4wKH2PO4 0.06wMgSO4.7H2O 0.10wNaCl 8.0wNaHCO3 0.35wNa2HPO4.12H2O 0.12wD-glucose 1.0wPhenol red 0.
6、01w将 CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750 mL的ddH2O中，混匀（用磁力搅拌器搅拌至溶解），定容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟，4冰箱保存。D-Hanks液 （单位：g）wKCl 0.40wKH2PO4 0.06wNaCl 8.0wNaHCO3 0.35wNa2HPO4.12H2O 0.08wPhenol red 0.02w将以上成分溶于900mL ddH2O中，充分混匀，加ddH2O至1000 mL。高压蒸气消毒10分钟，4冰箱保存。青霉素、链霉素液配制w青霉素80万U加Hanks液至80 mL，终浓度1万u/mLw链霉素100万U（相当于1g）加Ha
7、nks液至100 mL，终浓度10mg/mLw分装后至-20冰箱保存。DMEM培养液w900 mL ddH2O于1000 mL容器中，将DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50 mL ddH2O分次冲洗，也倒入容器，磁力搅拌溶解。w加NaHCO3w调PH至7.2w加青、链霉素至终浓度100u/mL 和100ug/mL w0.22umX50滤膜过滤（负压泵抽吸），4冰箱保存。小牛、胎牛血清灭活w55水浴箱30分钟，置4冰箱保存w灭活前放于-20冰箱保存待用w临用前加入DMEM液中 平滑肌细胞原代培养方法 w动物：大鼠150180g，23只操作步骤w大鼠颈椎脱臼致死w固定w消毒胸腹部w大组织镊、组织
8、剪切开胸腹部皮肤w另一组织镊、组织剪切开胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露w眼科镊和眼科弯剪分离胸腹主动脉并放入盛有Hanks液的细胞培养皿中，转入无菌室。或先用生理盐水漂洗，再放Hanks液中，转入无菌室 w眼科直镊和弯镊去除血凝块和血管外膜层。w放入另一盛有Hanks液的细胞培养皿中，剪去血管外的小分支w放入含20%胎牛血清的DMEM中，眼科直剪剪开血管腔，以眼科弯镊轻轻擦拭内膜层，以去除内皮细胞w放入另一含20%胎牛血清的DMEM中，用眼科弯剪剪碎血管组织至1mm w用吸管把组织块转入玻璃培养皿中，均匀贴壁，组织块的间距为0.5cmw盖好瓶盖，轻轻翻转培养瓶，让瓶底朝上，并向瓶内注入适量培养
9、液，于37C孵箱内放置45小时，使得组织块干涸，并与瓶底贴附w将培养瓶慢慢翻转平放，使组织块完全浸入培养液中，继续静置35天，切勿移动。待有细胞从组织块周围游离出后换液平滑肌细胞传代w传代时间：大部分组织块长出细胞晕，并与相邻细胞晕相接触时就可以传代传代步骤：w倒掉培养瓶中的培养液w用D-Hanks液洗两遍w加2-3滴0.25%胰蛋白酶消化液，平放培养瓶，在倒置纤微镜下观察细胞消化情况，可见到细胞质回缩，细胞间隙增大时迅速翻转培养瓶，使细胞脱离消化液注意：w初次传代对胰酶敏感，加入消化液30s，即消化充分，以后2分钟左右w细胞消化完成后，用吸管反复抽吸打散细胞w中止消化：加入DMEM培养液3滴
10、管，用吸管反复吹打瓶壁细胞w离心：1500 X5分钟w倒掉液体，加D-Hanks液洗一次，再加10mL DMEM培养液，用吸管抽吸吹打分散细胞，分装于2个培养瓶。在倒置纤微镜下可见圆形细胞。放入细胞培养箱中培养血管平滑肌细胞的冻存和复苏w冻存时间：较早期传代，以防细胞因为传代次数过多而造成细胞衰老或发生改变，以保持实验条件的一致性。w冻存方法：冻存前24小时更换培养液，冻存时要将密闭好的冻存管依次放于：4C 2小时 -20C 2.5小时 液氮表面 2小时 浸入液氮培养细胞的鉴定1、形态学鉴定：用相差显微镜常规观察细胞生长形态以及生长规律。并依据常规制作电镜标本进行观察 电镜观察结果：细胞形态不规则，胞浆内有肌丝，纵向排列，有密区，具备平滑肌细胞特征2、免疫组织化学鉴定：特异性鼠抗平滑肌肌动蛋白单克隆抗体，采用SP法对细胞爬片进行免疫组织化学染色免疫组织化学鉴定结果：镜下观察到细胞爬片，可见细胞浆内大量平行阳性染色胞核不着色。所有细胞染色，结果均为阳性