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1、1.2 1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的一、目的基因的获取取1 1、目的基因主要是指、目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子请举出三个以上的例子2 2、获取目的基因的常用方法、获取目的基因的常用方法（1 1）从基因文库中获取）从基因文库中获取（2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增技术扩增（3
2、 3）人工合成）人工合成概念：概念：基因文库基因文库 （gene library）基因组文库基因组文库部分基因文库部分基因文库（如（如cDNA文库）文库）将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNA片段片段,导入受体菌的群体中储存导入受体菌的群体中储存,各个受体各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基称为基因文库因文库(genelibrary)基因组文库基因组文库:基因文库中包含了一种生物所有的基基因文库中包含了一种生物所有的基因因,这种基因文库叫做基因组文库这种基因文库叫做基因组文库.部分基因文库部分基因文库:基因文库中包含了一种生物的一
3、部分基因文库中包含了一种生物的一部分基因基因,这种基因文库叫做部分基因文库这种基因文库叫做部分基因文库.基因组文基因组文库与部分库与部分基因文库基因文库的关系的关系思考：思考：基因文库如何构建？基因文库如何构建？将某种生物体内的将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，全部提取出来，选用适当的限制酶，将将DNA切成一定范围大小的切成一定范围大小的DNA片段，然后，将这些片段，然后，将这些DNA片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌都含有了一段不同的受体菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是说，这个群体片段。也就
4、是说，这个群体包含了这种生物的所有基因，这样就构建成了生物的包含了这种生物的所有基因，这样就构建成了生物的基因组文基因组文库库。这种方法称。这种方法称直接分离法（或鸟枪法）直接分离法（或鸟枪法）如果用某种生物发育的某个时期的如果用某种生物发育的某个时期的mRNA 反转录产生的反转录产生的多种互补多种互补DNA（也叫（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就构成了这种生物的受体菌群中，那么，这个受体菌群体就构成了这种生物的cDNA文库文库。这种方法称。这种方法称反转录法反转录法l基因组DNA文库的构建鸟枪法：鸟枪法：(直接分离法直
5、接分离法)用用用用 限限限限 制制制制 酶酶 切切切切 成成成成 许许 多多多多 片片片片 断断断断该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。率低。率低。率低。cDNAcDNA文库的构建文库的构建mRNA反转录cDNA(互补DNA）DNA聚合酶聚合酶双链DNA反转录法：反转录法：基因重组基因重组反转录酶反转录酶mRNAmRNAcDNAcDNA基因组基因组DNADNA文库文库cDNAcDNA文库文库基因组基因组DNADNA文库与文库与cDNA
6、cDNA文库的比较文库的比较1、构建基因组、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的文库时，首先应分离细胞的A、染色体、染色体DNAB、线粒体、线粒体DNAC、总、总mRNAD、tRNA2、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是的描述正确的是A、某生物的全套基因就是一个基因文库、某生物的全套基因就是一个基因文库B、将含有某种生物不同的许多、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个片段，导入某个生物生物体内，则这个生物就是一个基因文库体内，则这个生物就是一个基因文库C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库、含有一种生物
7、所有基因的基因文库叫做基因组文库D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文文库库AC（2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因PCR聚合酶链式反应聚合酶链式反应是一项生物是一项生物体外复制体外复制特定特定DNA片片段的核酸合成段的核酸合成技术技术。通过此技术，可。通过此技术，可获取大量的目的基因。获取大量的目的基因。(二二)利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术的核酸合成技术 条件条件：_、_ _、_(_(做启动子做启
8、动子)、_._.前提条件：前提条件：原理：原理：_方式：方式：以以_方式扩增，即方式扩增，即_（n n为扩增循为扩增循 环的次数）环的次数）结果：结果：选修选修1 P1 P6060聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2n n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(二二)利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因PCR技术技术原理：原理：前提：前提：原料原料方式方式PCR扩增仪扩
9、增仪DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列：以：以_方式扩增，方式扩增，即即_（n n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）指数指数2 2n n模板模板DNA；DNA引物；四种脱氧引物；四种脱氧核苷酸；热稳定核苷酸；热稳定DNA聚合酶聚合酶（Taq酶）；离子酶）；离子1、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分分子片段为子片段为ATGTGTACAC，要使其数量增多，可用，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是技术进行人工复制，复制时应给予的条件是双链双链DNA分子为模板分子为模板ATGTG或或TA
10、CAC模板链模板链四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种核苷酸四种核苷酸DNA聚合酶聚合酶热热稳定稳定DNA聚合酶聚合酶引物引物温度变化温度变化恒温恒温ABCDD2、在基因工程中，把选出的目的基因（共、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入个）放入DNA扩增仪中扩增扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是核苷酸的个数是A.540个个 B.8100个个 C.17280个个D.7560个个Bv（3）人工合成人工合成根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基
11、酸序列合成DNA DNA 蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推推测推推测目的基因目的基因化学合成化学合成1、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是方便方法是A、化学合成法、化学合成法B、基因组文库法、基因组文库法C、cDNA文库法文库法D、聚合酶链反应、聚合酶链反应2、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因利用利用PCR技术技术扩增目的基因扩增目的基因反转录法反转录法通过通
12、过DNA合成仪利合成仪利用化学方法人工合成用化学方法人工合成ABC DAD3、目的基因主要是指、目的基因主要是指_的结构基因。获的结构基因。获得目的基因的常见方法有三种：（得目的基因的常见方法有三种：（1）从基因文库中获）从基因文库中获取目的基因，根据基因的取目的基因，根据基因的_序列，基因在序列，基因在_上的位置，基因的上的位置，基因的_产物产物mRNA，基因，基因的的_产物蛋白质等获取目的基因。（产物蛋白质等获取目的基因。（2）利用）利用PCR技术扩增目的基因，该技术是一项在技术扩增目的基因，该技术是一项在_完成完成的核酸合成技术，前提条件是有一段已知目的基因的的核酸合成技术，前提条件是有
13、一段已知目的基因的_序列，以便于合成序列，以便于合成_。（。（3）如果基因）如果基因较小且核苷酸序列已知，可以通过较小且核苷酸序列已知，可以通过_方法。方法。编码蛋白蛋白质核苷酸核苷酸染色体染色体转录表达表达体外体外核苷酸核苷酸引物引物人工合成人工合成3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？a、目的基因、目的基因b、启动子、启动子c、终止子、终止子d、标记基因、标记基因位于基因的首端位于基因的首端,是是mRNA结合位点结合位点位于基因的末端位于基因的末端,终终止转录止转录检测目的基因是否导入受体细胞检测目的基因是否导入受体细胞1、（多选）一个基因表达载体
14、的构建应包括、（多选）一个基因表达载体的构建应包括A目的基因目的基因B启动子启动子C终止子终止子D标记基因标记基因ABCD2、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是A启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起聚合酶识别和结合的部位，是起始密码始密码B启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选从而便于筛选D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同基因表达载体的构建视受体细
15、胞及导入方式不同而有所差别而有所差别A3、目前转基因工程可以、目前转基因工程可以A.打破地理隔离但不能突破生殖隔离打破地理隔离但不能突破生殖隔离B.打破生殖隔离但不能突破地理隔离打破生殖隔离但不能突破地理隔离C.完全突破地理隔离和生殖隔离完全突破地理隔离和生殖隔离D.部分突破地理隔离和生殖隔离部分突破地理隔离和生殖隔离C常用的受体细胞：常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理将目的基因导入受体细胞的原理借鉴借鉴细菌或病毒侵染细胞细菌或病毒侵染细胞的途径。的途径。三、将目的基因导入
16、受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1、将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌）农杆菌转化法转化法特点特点:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物,对对单子叶植物无感染能力单子叶植物无感染能力Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受体细可转移至受体细胞并整合到其染色体上胞并整合到其染色体上转化过程转化过程:Ti质粒质粒目的基因目的基因构建构建表达表达载体载体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细胞植物细胞染色染色DNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌（2）基因枪法）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体
17、产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。的基因与其整合并表达的方法。（3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。因借助花粉管通道进入受体细胞。2、将目的基因导入动物细胞
18、将目的基因导入动物细胞方法方法:显微注射技术显微注射技术操作程序操作程序:提纯含目的基提纯含目的基因表达载体因表达载体取受精卵取受精卵显微注射显微注射移植到子宫移植到子宫受精卵发育受精卵发育新性状动物新性状动物3、将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞常用法常用法：Ca2+处理处理常用菌常用菌：大肠杆菌：大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：Ca2+处理处理大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNA1、基因工程中科学
19、家常用细菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是为受体细胞，原因是A结构简单、操作方便结构简单、操作方便B繁殖速度快繁殖速度快C遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单D性状稳定、变异少性状稳定、变异少2、基因工程常用的受体细胞有、基因工程常用的受体细胞有大肠杆菌大肠杆菌枯草杆菌枯草杆菌支原体支原体动植物细胞动植物细胞ABCDBD3、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是A.人工合成基因人工合成基因 B.目的
20、基因与运载体结合目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达C4.采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是的做法正确的是将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将编码毒素蛋白将编码毒素蛋白的的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中卵中将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导入序列与质粒重组，导
21、入细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养ABCDC5.下列属于基因工程中导入目的基因方法的是下列属于基因工程中导入目的基因方法的是农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管道法花粉管道法显微注显微注射法射法胚胎移植胚胎移植DNA分子杂交法分子杂交法ABCDC(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检测检测导入检测：目的基因是否导入受体细胞导入检测：目的基因是否导入受体细胞方法方法 DNADNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测分子杂交分子杂交翻译检测翻译检测抗原抗体抗原抗体杂交杂交分分子子检检测测法法鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴
22、定活性鉴定等活性鉴定等个体水平的鉴定个体水平的鉴定知识延伸知识延伸DNADNA分子杂交技术分子杂交技术 该方法是根据碱基互方法是根据碱基互补配配对原原则，把互，把互补的双的双链DNA解开，把解开，把单股的股的DNA小片段用同位素、小片段用同位素、荧光分子或光分子或化学化学发光催化光催化剂等等进行行标记，之后同被，之后同被检测的的DNA中的中的同源互同源互补序列序列杂交，从而交，从而检出所要出所要查明的明的DNA或基因。或基因。返返返返 回回回回DNA附着在膜上附着在膜上硝化纤维素硝化纤维素加探针加探针报告基因（含荧光素分子）报告基因（含荧光素分子）变性变性DNA杂交杂交（如检测（如检测SARS
23、病毒等）病毒等）abcd1、用、用-珠蛋白的珠蛋白的DNA探针可以检测出的遗传病是探针可以检测出的遗传病是 A镰刀状细胞贫血症镰刀状细胞贫血症B白血病白血病C坏血病坏血病D苯丙酮尿症苯丙酮尿症A2、应应用用基基因因工工程程技技术术诊诊断断疾疾病病的的过过程程中中必必须须使使用用基基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是 A用于检测疾病的医疗器械用于检测疾病的医疗器械B用放射性同位素或荧光分子等标记的用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子分子C合成合成-珠蛋白的珠蛋白的DNAD合成苯丙羟化酶的合成苯丙羟化酶的DNA片段片段B思考与探究：思
24、考与探究：2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导若将一个抗病基因导入小麦中入小麦中,理论上讲你应该怎样做理论上讲你应该怎样做?要要选择合适的合适的农杆菌菌株，因杆菌菌株，因为不是所有的不是所有的农杆菌菌株都杆菌菌株都可以侵染可以侵染单子叶植物；子叶植物；要加要加趋化和化和诱导的物的物质，一般，一般为乙乙酰丁香丁香酮等，目的是使等，目的是使农杆菌向植物杆菌向植物组织的受的受伤部位靠部位靠拢（趋化性）和激活化性）和激活农杆菌的杆菌的Vir区（区（诱导）的基
25、因，使）的基因，使T-DNA转移并插入到染色体移并插入到染色体DNA上。上。3.3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？有些蛋白有些蛋白质肽链上有共价上有共价结合的糖合的糖链，这些糖些糖链是在内是在内质网网和高和高尔基复合体上加工完成的，内基复合体上加工完成的，内质网和高网和高尔基复合体存在基复合体存在于真核于真核细胞中，大胞中，大肠杆菌不存在杆
26、菌不存在这两种两种细胞器，因此，在大胞器，因此，在大肠杆菌中生杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。种糖蛋白是不可能的。4.-4.-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的-珠蛋白，珠蛋白，想一想，应如何进行设计？想一想，应如何进行设计？（1 1）从小鼠中克隆出）从小鼠中克隆出-珠蛋白基因的珠蛋白基因的编码序列（序列（cDNA)cDNA)。（2 2）将）将cD
27、NAcDNA前接上在大前接上在大肠杆菌中可以适用的启杆菌中可以适用的启动子，另外子，另外加上抗四加上抗四环素的基因，构建成一个表达素的基因，构建成一个表达载体。体。（3 3）将表达）将表达载体体导入无四入无四环素抗性的大素抗性的大肠杆菌中，然后在杆菌中，然后在含有四含有四环素的培养基上培养大素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达杆菌。如果表达载体未体未进入入大大肠杆菌中，大杆菌中，大肠杆菌会不含有抗四杆菌会不含有抗四环素基因而死掉；如果素基因而死掉；如果培养基上培养基上长出大出大肠杆菌菌落，杆菌菌落，则表明表明-珠蛋白基因已珠蛋白基因已进入入其中。其中。（4 4）培养）培养进入了入了-珠蛋白基因的
28、大珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破杆菌，收集菌体，破碎后从中提取碎后从中提取-珠蛋白。珠蛋白。复习题复习题1）将目的基因导入受体细胞有哪些方法）将目的基因导入受体细胞有哪些方法?(试举例说明试举例说明)2）简述农杆菌转化法）简述农杆菌转化法4）有关基因工程的叙述正确的是）有关基因工程的叙述正确的是 （）A、限制酶只在获得目的基因时才用、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D3）有关基因工程的叙述中，错误的是（）有关基因
29、工程的叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶A5 5 5 5）基因工程是在基因工程是在基因工程是在基因工程是在DNADNA分子水平上进行设计施工的。在基分子水平上进行设计施工的。在基分子水平上进行设计施工的。在基分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是因操作的基本
30、步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是A A、人工合成目的基因、人工合成目的基因、人工合成目的基因、人工合成目的基因BB、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达C C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞DD、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合C6 6）（）（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到（人类胰岛素，这一过程涉及
31、到（）A.用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接B.把重组后的把重组后的DNA分子导入受体细菌内进行扩增分子导入受体细菌内进行扩增C.检测重组检测重组DNA分子是否导入受体细菌内并表达出性状分子是否导入受体细菌内并表达出性状D.筛选出能产生胰岛素的筛选出能产生胰岛素的“工程菌工程菌”ABCD7 7）下列哪项不属于基因工程技术的步骤下列哪项不属于基因工程技术的步骤（）A基因转移基因转移B基因扩增基因扩增C基因检测基因检测D基因表达基因表达B非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区RNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点外显子外显子内含子内含子终止子终止子基因的结构基因的结构启动子启动子原核原核真核真核甲：甲：GTATCCATG CATAGGTACTTAAA A T T C GGCATAC GCCGTATG 乙：乙：TCCTAG AGCATCTTAA AATTCCATAC GGTATG作业作业14题（题（3）答案：）答案：A ATTC G G CTTAA目的基因目的基因GTATCCATGAATTCCATAGGTACTTAAGGAATTCGGCATACCTTAAGCCGTATG目的基因目的基因作业作业14题（题（4）答案：）答案：