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1、糖发酵试验原理 多糖单糖丙酮酸酸性产物(或产酸产气)pH 指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管试剂：酚红、溴甲酚紫等结果:培养基呈酸性变色应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定第1页/共24页糖发酵试验结果判断反应现象反应现象结果描述结果描述酸性酸性变色变色、有气泡、有气泡分解分解糖产酸、产气糖产酸、产气酸性酸性变色变色、无气泡、无气泡分解分解糖产酸、不产气糖产酸、不产气培养基不变色培养基不变色不分解不分解糖糖第2页/共24页甲基红试验原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲
2、基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌第3页/共24页伏普试验（V-P试验）原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌第4页/共24页葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养
3、基变红甲基红试验第5页/共24页葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红VP试验脱酸第6页/共24页葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱酸第7页/共24页蛋白质类代谢试验靛基质试验硫化氢试验苯丙氨酸脱氨试验尿素酶试验第8页/共24页靛基质试验原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+培养基液面为黄色：应用：用于肠道
4、杆菌的鉴定第9页/共24页靛基质试验原理色氨酸酶色氨酸 靛基质（吲哚）玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）对二甲基氨基苯甲醛第10页/共24页硫化氢试验原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴性应用：常用于肠道杆菌的鉴定第11页/共24页苯丙氨酸脱氨实验原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶，可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿色化合物。培养基：苯丙氨酸琼脂试剂：10三氯化铁结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳性应用：多用于肠道杆菌的鉴定第12页/共24页苯
5、丙氨酸脱氨试验原理苯丙氨酸苯丙氨酸脱氨酶苯丙酮酸10三氯化铁绿色化合物第13页/共24页尿素酶试验原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指示剂结果：培养基变红：+培养基不变色应用：肠杆菌科属间鉴定第14页/共24页尿素酶试验原理尿素尿素酶氨+CO2培养基pH升高酚红呈碱性变色第15页/共24页枸橼酸盐利用试验原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。培养基：枸盐酸盐培养基试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.
6、0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）结果：培养基变蓝：+培养基不变色：应用：肠杆菌科属间鉴别第16页/共24页枸橼酸盐利用试验原理枸橼酸盐铵盐碳酸盐氨培养基pH下降溴麝香草酚蓝 呈碱性变色培养基变蓝培养基第17页/共24页糖发酵试验第18页/共24页甲基红试验第19页/共24页靛基质试验第20页/共24页血清学试验血清学鉴定：用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原血清学诊断：用已知抗原检测血清中的特异性抗体第21页/共24页血清学鉴定试剂（诊断血清）：含抗体 检测对象：特异性抗原方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿胀试验 伤寒杆菌诊断血清（含抗伤寒杆菌抗体）+待检测细菌细菌凝集玻片凝集试验：阳性报告：检出伤寒杆菌第22页/共24页血清学诊断试剂：含已知抗原应用：检测待检者血清中有无相应的抗体以及抗体的效价第23页/共24页感谢您的观看！第24页/共24页