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1、肠杆菌科细菌一般性鉴定程序未知肠杆菌分离培养挑取可疑菌落纯培养革兰染色镜检生化实验鉴定药敏试验血清学试验第1页/共17页一.分离培养无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，在EMB上分区划线接种。送37培养24小时。第2页/共17页二.纯培养（一）确定可疑菌落。1.观察EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的单个菌落可初步定为可疑大肠杆菌菌落，标号为。（2）.凡光滑无色透明的单个小菌落可初步定为痢疾杆菌属菌落或伤寒杆菌属菌落，标号为。第3页/共17页（二）.可疑菌落纯化培养 无菌操作用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37温箱培养2448小时。（三）.双糖铁琼
2、脂斜面培养特征观察与动力观察初步确定为伤寒杆菌初步确定为大肠杆菌第4页/共17页革兰染色镜检 挑取纯培养后的可疑菌落进行革兰染色，确定为革兰阴性菌后进行细菌的生化培养基接种。细菌的生化培养基接种。革兰阴性菌短杆状，分散排列第5页/共17页生化试验鉴定 将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接种于各种生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接种于各种生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计有糖发酵管（养基计有糖发酵管（葡葡.乳乳.麦麦.甘甘.蔗蔗）各）各1 1支，支，蛋白胨水蛋白胨水1 1支（支（I I），），葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水2 2
3、支（支（M.VpM.Vp），），枸橼酸枸橼酸盐琼脂斜面盐琼脂斜面1 1支（支（C C）。接种完毕后，试管置于试管架上，送）。接种完毕后，试管置于试管架上，送3737温箱培养温箱培养24482448小时后观察记录结果。小时后观察记录结果。第6页/共17页1.1.不变黄，小管无气泡：糖发酵为阴性（）。2.2.黄色，小管有气泡（产酸，产气）：糖发酵为阳性（+）。黄色，小管无气泡（产酸，不产气）：糖发酵为阳性（+）。糖发酵试验糖发酵试验第7页/共17页结果：红色为吲哚试验结果：红色为吲哚试验阳性阳性（+），无变化为，无变化为阴性（阴性（-）红色为甲基红试验红色为甲基红试验阳性（阳性（+），桔黄色，桔黄
4、色为为阴性（阴性（-）吲哚试验吲哚试验(I)(I)(I)(I)甲基红试验甲基红试验(MR)(MR)(MR)(MR)试验试验第8页/共17页VPVP试验枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验(C)(C)(C)(C)斜面上有菌苔，且变成深蓝斜面上有菌苔，且变成深蓝色，为色，为阳性阳性；斜面上；斜面上无菌苔，仍是绿色为无菌苔，仍是绿色为阴性阴性。红色为VPVP阳性。第9页/共17页表1 肠杆菌科细菌生化反应鉴定结果记录表细菌细菌编号编号葡萄葡萄糖糖 乳乳糖糖麦芽麦芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗蔗糖糖 吲吲哚哚甲基甲基红红 VP枸橼枸橼酸盐酸盐H2S动力动力大肠杆菌 +-+伤寒杆菌 -+-+细菌细菌编号编号葡萄葡萄
5、糖糖 乳乳糖糖麦芽麦芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗蔗糖糖 吲吲哚哚甲基甲基红红 VP枸橼枸橼酸盐酸盐H2S动力动力大肠杆菌 -/+-+伤寒杆菌 +-+-+-/+表2 肠杆菌科细菌生化反应鉴定数据参考表第10页/共17页 实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。药物敏感试验第11页/共17页实验方法 （一）接种肉汤培养基 （二）菌液均匀涂抹平板培养基 （三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大霉素和头孢拉定四种抗生素纸片贴在平板上进行培养第12页/共17页实验结果第13页/共17页青霉素(mm）链霉素（mm）头孢拉定（mm）庆大霉素（mm）大肠杆菌-1815(敏感）-2415(敏感）沙门菌-1615(敏感）-1915(敏感）志贺菌-2215(敏感）-2515(敏感）实验结果 三种菌对链霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和头孢拉定耐药。第14页/共17页血清学试验第15页/共17页第16页/共17页感谢您的观看。第17页/共17页