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1、复 习1、什么是培养基？2、培养基根据成分、用途和物理状态分别分为哪几类？3、培养基中的主要成分有哪些？实验实验5、微生物培养基的制备技术、微生物培养基的制备技术1、学习微生物培养基的制备，了解培养基配、学习微生物培养基的制备，了解培养基配方中各成分作用、制备流程及各环节的操作方中各成分作用、制备流程及各环节的操作技术。技术。2、学习制备、学习制备牛肉膏蛋白胨液体培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基、牛肉牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯培养基膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯培养基。一、实验目的一、实验目的n牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方：牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方：牛肉膏牛肉膏0.5%，蛋白胨，蛋白胨1%，N
2、aCl0.5%，pH7.47.6。n牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方：牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方：牛肉膏牛肉膏0.5%，蛋白胨，蛋白胨1%，NaCl0.5%，2%琼脂，琼脂，pH7.47.6。n马铃薯培养基（马铃薯培养基（PDA，培养霉菌用）的配方：，培养霉菌用）的配方：马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）20g，葡萄糖，葡萄糖2g，琼脂，琼脂2g，水，水100mL，自然自然pH值。值。二、实验原理二、实验原理1、实验试剂实验试剂：牛肉膏、蛋白胨、：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、琼脂、10HCL、10%NaOH、马铃薯。、马铃薯。2、实验其他器材实验其他器材：天平、试管、量筒、小烧杯、玻璃：天平、试管
3、、量筒、小烧杯、玻璃棒、药匙、棒、药匙、pH试纸、棉花塞、报纸、棉绳、标签、试纸、棉花塞、报纸、棉绳、标签、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、电炉等。培养皿、高压蒸汽灭菌锅、电炉等。三、实验材料三、实验材料四、操作步骤四、操作步骤1、称量称量2、溶化溶化3、调调pH4、分装、分装5、加塞、加塞6、包扎、包扎7、灭菌、灭菌8、摆斜面、摆斜面10、无菌检查、无菌检查蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。牛肉浸膏用小烧杯称量，然后热水转移。牛肉浸膏用小烧杯称量，然后热水转移。称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品
4、后，洗净，擦干，再称取另一药品。或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。瓶盖也不要盖错。1、称量、称量配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化。在琼脂溶化时，应在琼脂溶化时，应控制火力控制火力，以免沸腾而溢出容，以免沸腾而溢出容器。需器。需不断搅拌不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦以防琼脂糊底烧焦。马铃薯培养基：马铃薯培养基：马铃薯（去皮、去芽眼）马铃薯（去皮、去芽眼）切成片（玉米大小）切成片（玉米大小）称取称取200g1000mL水水煮沸煮沸15-20min双层双层纱布过滤纱布过滤取滤液并补足取滤液并补足1000mL琼脂琼脂熔化熔化葡萄糖葡萄糖
5、2、熔化、熔化pH勿调过头，以免回调而影响培养基内各离子勿调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。灭菌后的浓度。灭菌后pH值会下降值会下降0.10.2，在做培养，在做培养基校正基校正pH值时，应比实际值高值时，应比实际值高0.10.2。3、调、调pH分装过程中，注意不要使分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上培养基沾在管（瓶）口上以免引起污染。以免引起污染。注意：装入试管中的量不注意：装入试管中的量不宜超过试管高度的宜超过试管高度的1/5，装，装入三角烧瓶中的量以烧瓶入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。总体积的一半为限。4、分装、分装培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶上塞好培养基
6、分装完毕后，在试管口或三角瓶上塞好棉塞，以阻止外界微生物污染培养基，并保证棉塞，以阻止外界微生物污染培养基，并保证有良好的通气性能。有良好的通气性能。5、加塞、加塞加塞后，将全部试管用棉绳捆好，再在棉塞加塞后，将全部试管用棉绳捆好，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，最后用棉绳扎好。同时用记号笔注明培塞，最后用棉绳扎好。同时用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别。养基名称、配制日期、组别。6、包扎、包扎将上述培养基以将上述培养基以0.103MPa，121，15min高压蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌。7、灭菌、灭菌灭菌的试管培养基冷却至灭菌的试管培养
7、基冷却至50左右，将试管一左右，将试管一端倾斜搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，端倾斜搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。8、摆斜面、摆斜面将灭菌培养基于将灭菌培养基于3737，培养，培养24-48h24-48h，以检查，以检查灭菌是否彻底。灭菌是否彻底。9、无菌检查、无菌检查4人人/组组马铃薯培养基：马铃薯培养基：ml平板平板3个，斜面个，斜面3个个牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：ml平板平板3个，斜面个，斜面3个个牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：ml做做3个液体试管培养基个液体试管培养基五、实验安排五、实验安排1、建立完善的配制记录：在制备培养基时，将培养基制备日期、种类、名称、配方、原料、灭菌的压力和时间、最终pH等进行详细记录，以防发生混乱。2、合理存放培养基：培养基最好现配现用，若当时不用，应存放于冰箱内。旋转时间不应超过1周，以免降低其营养价值或发生化学变化。3、当灭好菌备用的培养基再分装时，以及在制平板、斜面等时，必须进行严格地无菌操作。培养基配制时的注意事项：培养基配制时的注意事项：