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1、培养基的配制培养基的配制 培养基名称物料名称数量配 制 说 明硫乙醇酸盐流体培养基(用于培养好氧菌、厌氧菌)酪胨(胰酶水解)15.0g除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节pH值使灭菌后为7.10.2.分装至适宜的容器中,其装量与容器的高度比应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前,培养基氧化层高度不得超过培养基深度的1/5,否则,而经100水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。硫乙醇酸盐流体培养基置3035培养。葡萄糖5.0gL-胱氨
2、酸5.0g硫乙醇酸钠或硫乙醇酸5.0g0.3 ml酵母浸出粉5.0g氯化钠2.5 g新配0.1%刃天青溶液1.0ml琼脂0.75g水1000ml 改良马丁培养基(用于培养真菌)胨5.0g除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值约为6.8,煮沸,加入葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH值使灭菌后为6.40.2,分装,灭菌。改良马丁培养基置2328培养酵母浸出粉2.0g葡萄糖20.0g磷酸氢二钾1.0g硫酸镁0.5g水1000ml培养基的配制培养基的配制营养肉汤培养基胨10.0g取上述成分混合,微温溶解,调节pH 为弱碱性,煮沸,滤清,调pH 值使灭菌后为7.20.2,分装灭菌。牛肉浸出粉3
3、.0g氯化钠5.0g水1000ml营养琼脂培养基琼脂14.0g取上述成分混合,微温溶解,调节pH 为弱碱性,煮沸,滤清,调pH 值使灭菌后为7.20.2,分装灭菌。胨10.0g牛肉浸出粉3.0g氯化钠5.0g水1000ml0.5%a葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检验)胨10.0g除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值为弱碱性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH值使灭菌后为7.20.2,分装,灭菌。葡萄糖5.0g牛肉浸出粉3.0g氯化钠5.0g水1000ml培养基的配制培养基的配制改良马丁琼脂培养基琼脂14.0g除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值
4、约为6.8,煮沸,加入葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH值使灭菌后为6.40.2,分装,灭菌。改良马丁培养基置2328培养胨5.0g酵母浸出粉2.0g葡萄糖20.0g磷酸氢二钾1.0g硫酸镁0.5g水1000ml玫瑰红钠琼脂培养基琼脂14.0g除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分混合,微温溶解,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。胨5.0g磷酸二氢钾1.0g硫酸镁0.5g玫瑰红钠0.0133g葡萄糖10.0g水1000ml酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)酵母浸出粉5.0g 葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。胨10.0g葡萄糖20.0g琼脂14.0g水100
5、0ml培养基的配制培养基的配制胆盐乳糖培养基(BL)胨20.0g 除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.40.2,煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠溶解后,分装,灭菌。氯化钠5.0g磷酸氢二钾4.0g磷酸二氢钾1.3g乳糖5.0g牛胆盐去氧胆酸钠2.0g0.5g水1000ml胆盐乳糖发酵培养基胆盐乳糖发酵培养基1000ml取未灭菌的胆盐乳糖培养基1000ml,加入0.04%溴甲酚紫指示液25ml,根据要求的用量分装于含倒管的试管中,灭菌。秘用的倒管的规格应保证产气结果的观察。0.04%溴甲酚紫指示液25ml曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培
6、养基100ml取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60,按无菌操作加入灭菌的其它3种溶液,摇匀,倾注平皿。20%乳糖溶液5ml曙红钠指示液2ml亚甲蓝指示液1.31.6ml培养基的配制培养基的配制麦康凯琼脂培养基(MacC)胨20.0g除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.20.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余成分,摇匀,分装,灭菌,冷至约60,倾注平皿。乳糖10.0g牛胆盐5.0g氯化钠5.0g琼脂14.0g1%中性红指示液3ml水1000ml4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-methylumbelliferyl-D-glu-curonide
7、,MUG)胨10.0g除MUG外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.30.1,加入MUG,溶解,每管分装5ml,灭菌。磷酸氢二钠(无水)6.2g磷酸二氢钾(无水)0.9g硫酸锰0.5g硫酸锌0.5g硫酸镁0.1g亚硫酸钠40mg氯化钠5.0g氯化钙50mg去氧胆酸钠1.0gMUG75mg水1000ml培养基的配制培养基的配制三糖铁琼脂培养基(TSI)胨20.0g除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.30.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余成分,摇匀,分装,灭菌,制成高底层(23cm)短斜面牛肉浸出粉5.0g乳糖10.0g葡萄
8、糖1.0g氯化钠5.0g琼脂12.0g蔗糖10.0g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.2g0.2%酚磺酞指示液12.5ml水1000ml四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)胨5.0g取上述成分混合,微温溶解,灭菌。临用前,取上述培养基,每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.1ml,混匀。牛胆盐1.0g碳酸钙10.0g硫代硫酸钠30.0g水1000ml培养基的配制培养基的配制沙门、志贺菌属琼脂培养基胨5.0g 除乳糖、中性红指示液、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.20.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余成分,摇匀,灭菌,冷至约60,倾注平皿。牛肉浸出粉5.0g乳糖1
9、0.0g牛胆盐8.5g枸橼酸钠8.5gg枸橼酸铁铵1.0g硫代硫酸钠8.5 g中性红指示液2.5ml亮绿试液0.33ml琼脂16.0g水1000ml培养基的配制培养基的配制胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)胨20.0g 除糖、指示液、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.20.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余成分,摇匀,灭菌,冷至约60,倾注平皿。牛肉浸出粉3.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g去氧胆酸钠1.0g硫代硫酸钠2.3 g枸橼酸钠1.0g枸橼酸铁铵1.0g中性红指示液3ml琼脂16.0g水1000ml溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基胨10.0g除琼脂外,取上述成分混合,微
10、温溶解,调节pH值,使灭菌后为7.50.1,加入琼脂,加热溶化后,分装,灭菌,冷至约60,倾注平皿。牛肉浸出粉3.0g氯化钠5.0g溴化十六烷基三甲铵0.3g琼脂14.0g水1000ml培养基的配制培养基的配制亚碲酸盐肉汤培养基营养肉汤培养基100ml临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml中加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)试液0.2ml,混匀,即得。1%亚碲酸钠(钾)0.2ml卵黄氯化钠琼脂培养基胨6.0g除10%氯化钠卵黄液之外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值,使灭菌后为7.50.1,灭菌,冷至约60,c以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分振摇,倾注平皿。10%氯化钠卵黄液的制备
11、:取鲜鸡蛋1个,以无菌操作取卵黄放入10%无菌氯化钠100ml中,摇匀即得。牛肉浸出粉1.8g氯化钠30.0g10%氯化钠卵黄液100ml琼脂14.0g水650ml甘露醇氯化钠琼脂培养基胨10.0g除甘露醇、酚磺酞指示液、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值,使灭菌后为7.40.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至约60,倾注平皿。牛肉浸出粉1.0g甘露醇10.0g氯化钠75.0g酚磺酞指示液2.5ml琼脂14.0g水1000ml培养基的配制培养基的配制乳糖发酵培养基胨20.0g除甘露醇、酚磺酞指示液、琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值,使灭菌后为7.40.2,加
12、入指示液,分装于含倒管的小试管中,每管3ml。灭菌。乳糖10.0g0.04%溴甲酚紫指示液25ml水1000ml绿脓菌素(Pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂培养基)胨20.0g取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合后,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.30.1,加入甘油及琼脂,加热溶化后,混匀,分装于试管,灭菌,置成斜面。氯化镁(无水)1.4g硫酸钾(无水)10.0g甘油10ml琼脂14.0g水1000ml庖肉培养基取新鲜牛肉,除去脂肪和筋腱,加蒸馏水煮沸约10分钟,切成约5mm3的小块,称重,按1:3(肉:水)加蒸馏水,置410浸1820小时后,煮沸1小时,用白布过滤(滤液即为1:3牛肉浸液
13、),肉渣用自来水漂洗2次,然后加入适氢氧化钠溶液,搅拌,使pH在8.4左右,浸泡过夜,次日倒去上层水,用蒸馏水冲洗23次,放在纱布上,自动沥干(不要挤压)。将肉渣铺在搪瓷盘上,灭菌,于80100烘干,筛去碎屑,装瓶,保持干燥,备用。庖肉培养基制备 将上述碎肉块装入合适的容器中,再加入营养肉汤培养基,碎肉的量约为1.5%,调节pH使灭菌后为7.30.1。灭菌。培养基的配制培养基的配制哥伦比亚培养基酪蛋白胰酶消化物10.0g除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值,使灭菌后为7.30.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至约4550,加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混
14、匀,倾注平皿。心胰酶消化物3.0g玉米淀粉1.0g琼脂15.0g肉胃酶消化物5.0g酵母浸出粉5.0g氯化钠5.0g水1000ml培养基1胨5.0g除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值,比最终的pH值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,调节pH值,使灭菌后为7.88.0或6.56.6分装,灭菌,牛肉浸出粉3.0g磷酸氢二钾3.0g琼脂1520g水1000ml培养基的配制培养基的配制培养基2胨6.0g除琼脂、葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH比最终的pH值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,加葡萄糖溶解后,再调pH值,使灭菌后为7.88.0或6.56.6分装,
15、灭菌牛肉浸出粉1.5g酵母浸出粉6.0g葡萄糖1g琼脂1520g水1000ml培养基3胨5.0g除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,滤过,加葡萄糖溶解后,调节pH值,使灭菌后为7.07.2,灭菌牛肉浸出粉1.5g酵母浸出粉3.0g葡萄糖1g氯化钠3.5g磷酸氢二钾3.68g磷酸二氢钾1.32g水1000ml培养基的配制培养基的配制培养基4胨5.0g除琼脂、葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值比最终的pH值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,加葡萄糖溶解后,调节pH值,使灭菌后为6.06.8,灭菌氯化钠3.5g葡萄糖1g琼脂1520g枸橼酸钠8.5gg水1000ml培养基5胨
16、10g除琼脂、麦牙糖外,取上述成分混合,微温溶解,调pH值略高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,加麦牙糖溶解后,调pH值,使灭菌后为7.27.4,分装,灭菌琼脂1520g水1000ml麦牙糖40g培养基6胨8g除琼脂、葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值比最终的pH值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,加葡萄糖溶解后,调节pH值,使灭菌后为7.27.4,灭菌牛肉浸出粉3g氯化钠45g葡萄糖2.5g磷酸氢二钾3.3g磷酸二氢钾1g酵母浸出粉5g琼脂1520g水1000ml培养基的配制培养基的配制培养基7胨5.0g除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值比最终的pH
17、值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,调节pH值,使灭菌后为6.56.6,灭菌牛肉浸出粉1.5g磷酸氢二钾3.3g磷酸二氢钾1g枸橼酸钠8.5gg琼脂1520g水1000ml培养基8酵母浸出粉1g取上述成分混合,加热溶化后,滤过,灭菌。琼脂1520g葡萄糖5g硫酸铵1g磷酸盐缓冲液(pH6.0)1000ml培养基的配制培养基的配制多黏菌素培养基蛋白胨6.0g除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值比最终的pH值高0.20.4,加入琼脂,加热溶化后,滤过,调节pH值,使灭菌后为6.56.7,灭菌牛肉浸膏1.5g胰消化酪素4.0g葡萄糖1.0g酵母浸膏3.0琼脂1520g水1000ml