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1、需氧革兰阳性杆菌及检验需氧革兰阳性杆菌及检验第1页，共110页，编辑于2022年，星期三革兰阳性杆菌菌属间的鉴别革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌棒状杆菌属属芽胞杆菌芽胞杆菌属属李斯特菌李斯特菌属属丹毒丝菌丹毒丝菌属属加特纳菌加特纳菌属属形态形态棒状棒状杆菌有芽杆菌有芽胞胞短杆、链短杆、链或丝状或丝状细杆或丝细杆或丝状状杆菌、多杆菌、多形性形性触酶触酶+-动力动力-V V+-对氧对氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧V V：炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。第2页，共110页，编辑于202
2、2年，星期三第一节第一节棒状杆菌属棒状杆菌属第3页，共110页，编辑于2022年，星期三棒状杆菌属的共同特征棒状杆菌属的共同特征1)革兰阳性多形态杆菌革兰阳性多形态杆菌2)无荚膜、无鞭毛、无芽胞无荚膜、无鞭毛、无芽胞3)细菌呈不规则栅栏状排列细菌呈不规则栅栏状排列4)需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧5)触酶试验阳性触酶试验阳性6)细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。属、奴卡氏菌属有共同的成分。第4页，共110页，编辑于2022年，星期三一一白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌第5页，共110页，编辑于2022年，星期三（一）生物学特性（一）生
3、物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造l抵抗力抵抗力第6页，共110页，编辑于2022年，星期三形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在L L、V V、Y Y字形及不规则栅栏状。字形及不规则栅栏状。用美蓝、用美蓝、NeisserNeisser法、法、AlbertAlbert法等染色时，在细法等染色时，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，此颗粒与菌体着色菌的一端或两
4、端有浓染的颗粒，此颗粒与菌体着色不同，称为不同，称为异染颗粒异染颗粒，为本菌重要形态学特征，对，为本菌重要形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。鉴别细菌有重要意义。4/17/2023第7页，共110页，编辑于2022年，星期三培养特性培养特性培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧，生长温度为需氧或兼性厌氧，生长温度为1540，最适生长温，最适生长温度为度为3537，pH7.27.8。v营养要求高，在普通培养基上虽能生长，但生营养要求高，在普通培养基上虽能生长，但生长不良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。在加长不良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，形态典有血液、
5、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，形态典型，异染颗粒明显。型，异染颗粒明显。4/17/2023第8页，共110页，编辑于2022年，星期三菌落特征菌落特征l血平板：灰白、狭窄血平板：灰白、狭窄溶血环。溶血环。l鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落。泽菌落。l亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。菌落分为重型、轻型或中间型。第9页，共110页，编辑于2022年，星期三生化反应生化反应生化反应生化反应 触酶（触酶（+），氧化酶（），氧化酶（-）能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等，产酸不
6、产气。能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等，产酸不产气。不分解乳糖、多数不分解蔗糖。不分解乳糖、多数不分解蔗糖。靛基质试验、明胶液化、尿素分解靛基质试验、明胶液化、尿素分解4/17/2023第10页，共110页，编辑于2022年，星期三抗原构造抗原构造l菌体菌体O O抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。lK K抗原：型特异性抗原，不耐热。抗原：型特异性抗原，不耐热。第11页，共110页，编辑于2022年，星期三抵抗力抵抗力l对湿热和一般消毒剂敏感。对湿热和一般消毒剂敏感。l对冷和干燥有一定抵抗力。对冷和干燥有一定抵抗力。第12页，共110页，编辑于2022年，星期三
7、（二）致病性（二）致病性l致病物质：白喉外毒素致病物质：白喉外毒素l由携带由携带-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。l作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。l经呼吸道飞沫传播，引起白喉。经呼吸道飞沫传播，引起白喉。l假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。l中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。第13页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）免疫性（三）免疫性l抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。l成人绝大
8、多数具有免疫性，主要由于隐性感染成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染所获得的免疫力。所获得的免疫力。l锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。在。第14页，共110页，编辑于2022年，星期三（四）微生物学检验（四）微生物学检验 l标本采集标本采集 l检验程序检验程序 l检验方法检验方法l生化反应生化反应l毒力试验毒力试验第15页，共110页，编辑于2022年，星期三标本采集标本采集l用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。集分泌物。l未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或
9、扁桃体粘膜上的分泌物。咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。第16页，共110页，编辑于2022年，星期三检验程序检验程序咽拭标本咽拭标本亚碲酸钾亚碲酸钾 血平板血平板观察菌落特征观察菌落特征 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色血平板血平板 吕氏血清斜面吕氏血清斜面 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色涂片染色镜检涂片染色镜检 生化反应生化反应 毒力试验毒力试验第17页，共110页，编辑于2022年，星期三检验方法检验方法l标本直接涂片标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染色性革兰染色：观察形态、染色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒异染颗粒染色：观察异染颗粒 初
10、步报告：检出形似白喉棒状杆菌初步报告：检出形似白喉棒状杆菌l分离培养分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落亚碲酸钾血平板：黑色菌落第18页，共110页，编辑于2022年，星期三生化反应生化反应根据根据糖发酵是否产酸糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌中的可鉴别棒状杆菌中的不同种。不同种。白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸，不分解蔗糖；尿素酶（酸，不分解蔗糖；尿素酶（）、硝酸盐）、硝酸盐还原试验（还原试验（+）等可用于与其他棒状杆菌的鉴）等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。别。第19页，共110页，编
11、辑于2022年，星期三毒力试验毒力试验l意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据l方法方法 艾立克平板毒力试验艾立克平板毒力试验 对流电泳法对流电泳法 协同凝集试验协同凝集试验 动物实验动物实验第20页，共110页，编辑于2022年，星期三二二其他棒状杆菌其他棒状杆菌第21页，共110页，编辑于2022年，星期三第二节第二节需氧芽胞杆菌属需氧芽胞杆菌属第22页，共110页，编辑于2022年，星期三芽胞杆菌属共同特点芽胞杆菌属共同特点1)1)绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞横径的芽胞2)2)除炭疽芽胞杆
12、菌外均有动力和溶血能力除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力3)3)非抗酸性非抗酸性4)4)营养要求不高，在普通培养基上生长良好营养要求不高，在普通培养基上生长良好 第23页，共110页，编辑于2022年，星期三一一炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌第24页，共110页，编辑于2022年，星期三（一）生物学特性（一）生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造l抵抗力抵抗力第25页，共110页，编辑于2022年，星期三形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹
13、节状，单个或呈短链状排列。凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在活体或人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以炭疽病尸体炭疽病尸体严禁解剖严禁解剖。4/17/2023第26页，共110页，编辑于2022年，星期三培养特性培养特性培养特性培养特性 l需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。l营养要求不高，普通培养基上生长良好。营养要求不高，普通培养基上生长良好。4/17/2023第27页，共110页，编辑于2022年，星期
14、三菌落特征菌落特征菌落特征菌落特征l普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈卷卷发状发状。l血液琼脂平板：培养血液琼脂平板：培养12121515h h，菌落周围菌落周围无溶血环无溶血环，18182424h h后可有后可有轻微溶血轻微溶血，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。而快速。l液体培养基中呈絮状生长液体培养基中呈絮状生长l明胶培养基中呈倒置的杉树明胶培养基中呈倒置的杉树l有毒株在有毒株在NaHCONaHCO3 3
15、培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。4/17/2023第28页，共110页，编辑于2022年，星期三 有有毒毒株株在在NaHCONaHCO3 3血血琼琼脂脂平平板板上上置置5%5%COCO2 2环环境境中中培培养养18182424h h，可可产产生生荚荚膜膜，菌菌落落由由粗粗糙糙型型变变为为粘粘液液型型，而而呈呈现现半半圆圆形形，突突起起，有有光光泽泽的的菌菌落落。以以接接种种针针挑挑取取时时呈呈拉拉丝丝状状，此此为为鉴别菌落要点，而无毒株则形成粗糙型菌落。鉴别菌落要点，而无毒株则形成粗糙型菌落。第29页，共110页，编辑于2022年，星期三生化反应
16、生化反应分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不分解乳糖。触酶（不分解乳糖。触酶（+），），VP（），），吲哚（吲哚（），尿素（），尿素（）。第30页，共110页，编辑于2022年，星期三抗原结构抗原结构1)炭疽毒素炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。引起实验动物的水肿致死。具有抗吞噬作用和具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。免疫
17、原性，故患炭疽后有免疫力。2)荚膜抗原荚膜抗原：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊断中有鉴别诊断价值。断中有鉴别诊断价值。第31页，共110页，编辑于2022年，星期三3)3)菌体抗原菌体抗原：耐热、耐腐败，无毒性，有种特异性。：耐热、耐腐败，无毒性，有种特异性。4)4)芽胞抗原芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层一起：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原具有免组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。疫原性和
18、血清学诊断价值。Ascoli热沉淀反应热沉淀反应：感染动物尸体组织浸出液煮沸半：感染动物尸体组织浸出液煮沸半小时后，耐热的菌体抗原不被破坏，能与特异性抗小时后，耐热的菌体抗原不被破坏，能与特异性抗体发生环状沉淀反应，称体发生环状沉淀反应，称Ascoli热沉淀反应，对炭疽热沉淀反应，对炭疽病具有一定的诊断价值。病具有一定的诊断价值。4/17/2023第32页，共110页，编辑于2022年，星期三抵抗力抵抗力 本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，芽胞抵芽胞抵抗力很强抗力很强。在干燥的土壤或者皮毛中可存活。在干燥的土壤或者皮毛中可存活2020余余年。年。芽胞对碘和氧化剂敏
19、感。芽胞对碘和氧化剂敏感。耐耐药药性性：本本菌菌对对磺磺胺胺类类、青青霉霉素素、四四环环素素、环丙沙星敏感。环丙沙星敏感。第33页，共110页，编辑于2022年，星期三（二）致病性与免疫性（二）致病性与免疫性l致病物质：炭疽毒素、荚膜致病物质：炭疽毒素、荚膜l所致疾病所致疾病经多途径感染，引起炭疽病。经多途径感染，引起炭疽病。临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。属人畜共患传染病，死亡率高。属人畜共患传染病，死亡率高。l免疫性：病后可获得持久性免疫力，再次感染者免疫性：病后可获得持久性免疫力，再次感染者甚少。甚少。第34页，共110页，编辑于2
20、022年，星期三（三）微生物学检验（三）微生物学检验l标本采集标本采集l检验程序检验程序l检验方法检验方法第35页，共110页，编辑于2022年，星期三标本采集标本采集l标本采集标本采集病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。死亡病畜标本：死亡病畜标本：死于败血症的动物，严禁宰杀、死于败血症的动物，严禁宰杀、解剖解剖，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。少量血液。污染物品：皮革、兽毛、土壤等。污染物品：皮革、兽毛、土壤等。l标本处理标本处理：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌污染标本先加
21、热杀死繁殖体和杂菌再接种。污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。第36页，共110页，编辑于2022年，星期三已处理标本已处理标本直接涂片直接涂片增菌培养增菌培养分离培养分离培养Ascoli试验试验革兰染色革兰染色荚膜染色荚膜染色初步报告初步报告血平板血平板戊烷脒琼脂平板戊烷脒琼脂平板可疑菌落可疑菌落菌落涂片菌落涂片染色镜检染色镜检鉴定试验鉴定试验肉汤培养肉汤培养动物实验动物实验动物死亡动物死亡分离培养分离培养噬菌体裂解噬菌体裂解串珠试验串珠试验青霉素抑制试验青霉素抑制试验第37页，共110页，编辑于2022年，星期三检验方法检验方法l涂片染色镜检涂片染色镜检革兰染色：涂片后升汞固定，革兰染色
22、发现革革兰染色：涂片后升汞固定，革兰染色发现革兰阳性粗大杆菌、有荚膜，呈竹节样排列可初兰阳性粗大杆菌、有荚膜，呈竹节样排列可初步报告。步报告。l分离培养：一般接种血平板，分离培养：一般接种血平板，3737培养培养2424h h后后观察菌落特点。污染的标本先加热处理再接种。观察菌落特点。污染的标本先加热处理再接种。l动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出血等。血等。在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病力者。有致病力者。第38页，共110页
23、，编辑于2022年，星期三鉴定试验鉴定试验i.i.青霉素抑制试验青霉素抑制试验 炭疽芽胞杆菌在含炭疽芽胞杆菌在含5 5 IU/mlIU/ml的青霉素培养基的青霉素培养基上能生长，而在含上能生长，而在含1010、100 100 IU/mlIU/ml的青霉素培的青霉素培养基上受到抑制不生长。养基上受到抑制不生长。第39页，共110页，编辑于2022年，星期三鉴定试验鉴定试验ii.ii.串珠试验串珠试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽胞杆菌鉴别 炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在形态上发生明显的变化。形态上发生明显的变化。如将本菌幼稚培养物如将本菌幼稚培养物接种
24、于含接种于含0.050.050.50.5U/mlU/ml青霉素的培养基上，青霉素的培养基上，376376h h，菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成作用有关，为炭疽杆菌所特有，可用于与其他作用有关，为炭疽杆菌所特有，可用于与其他类炭疽类炭疽芽胞杆菌的鉴别。芽胞杆菌的鉴别。第40页，共110页，编辑于2022年，星期三鉴定试验鉴定试验iii.iii.青霉素和串珠联合试验青霉素和串珠联合试验iv.iv.噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽胞杆菌鉴别v.v.NaHCO NaHCO3
25、 3毒力试验毒力试验 有毒力的炭疽杆菌形成荚膜，菌落呈粘液型，有毒力的炭疽杆菌形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜，菌落呈粗糙型。无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜，菌落呈粗糙型。第41页，共110页，编辑于2022年，星期三鉴定试验鉴定试验鉴定试验鉴定试验vi.vi.植物凝集素试验植物凝集素试验 根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受体的根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受体的原理。原理。vii.vii.AscoliAscoli热沉淀试验热沉淀试验 用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的抗原。炭用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的抗原。炭疽杆菌沉淀原具有耐高热特征，在尸体组织和皮毛
26、中数疽杆菌沉淀原具有耐高热特征，在尸体组织和皮毛中数年仍能检出，故可作追溯性诊断。年仍能检出，故可作追溯性诊断。4/17/2023第42页，共110页，编辑于2022年，星期三炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别鉴别项目鉴别项目炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌及其它蜡样芽胞杆菌及其它需氧芽胞杆菌需氧芽胞杆菌形态形态菌体两端平整或凹陷菌体两端平整或凹陷两端钝圆两端钝圆两端钝圆两端钝圆荚膜荚膜+-动力动力-+菌落菌落有小突起，边缘呈卷有小突起，边缘呈卷发状，粘稠菌落发状，粘稠菌落锯齿状粗糙菌落锯齿状粗糙菌落蜡样或粗糙不粘稠菌蜡样或粗糙
27、不粘稠菌落落肉汤肉汤絮状沉淀，上层清晰絮状沉淀，上层清晰均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜AscoliAscoli+-溶血溶血不溶血或微溶血不溶血或微溶血+串珠试验串珠试验+-第43页，共110页，编辑于2022年，星期三二二蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌第44页，共110页，编辑于2022年，星期三（一）生物学特性（一）生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力第45页，共110页，编辑于2022年，星期三形态与染色形态与染色 革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短不一，有鞭毛，无
28、荚膜，可形成芽胞。不一，有鞭毛，无荚膜，可形成芽胞。第46页，共110页，编辑于2022年，星期三培养特性培养特性培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧，营养要求不高。需氧或兼性厌氧，营养要求不高。v 普通琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、不普通琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、不透明、透明、R R型型蜡滴样蜡滴样大菌落。大菌落。v 血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，菌落血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，菌落周围有周围有或或溶血溶血。4/17/2023第47页，共110页，编辑于2022年，星期三 乳光反应或卵黄反应：乳光反应或卵黄反应：在在卵卵黄黄琼琼脂脂平平板板上上生生长长迅迅速速
29、，培培养养3 3h h后后，虽虽看看不不到到菌菌落落，但但该该菌菌可可分分解解卵卵磷磷脂脂而而形形成成白白色的混浊环色的混浊环，即为乳光反应或卵黄反应。，即为乳光反应或卵黄反应。第48页，共110页，编辑于2022年，星期三生化反应生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，不分解乳糖。不分解乳糖。VP VP（+），），液化明胶。液化明胶。第49页，共110页，编辑于2022年，星期三抵抗力抵抗力 耐热，抵抗力强耐热，抵抗力强,能耐受能耐受10030min10030min。第50页，共110页，编辑于2022年，星期三（二）致病性（二）致病性条件致病菌
30、，主要引起食物中毒。条件致病菌，主要引起食物中毒。临床上分为两种类型：临床上分为两种类型：A.A.腹泻型：由不耐热的肠毒素引起。腹泻型：由不耐热的肠毒素引起。B.B.呕吐型：由耐热的肠毒素引起。呕吐型：由耐热的肠毒素引起。第51页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）微生物学检验（三）微生物学检验 l1标本采集标本采集 除进行本菌的分离培养外，必须作除进行本菌的分离培养外，必须作活菌计活菌计数数。因暴露于空气中的食物，在一定程度上都。因暴露于空气中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故受本菌污染，故不能因分离出蜡样芽胞杆菌则不能因分离出蜡样芽胞杆菌则认为是引起食物中毒的病原菌认为是引起食物
31、中毒的病原菌。l2检验程序检验程序 第52页，共110页，编辑于2022年，星期三3检验方法检验方法1)1)直接镜检直接镜检：2)2)活菌计数活菌计数 ：一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数大于大于10105 5/mL/mL时，即有发生食物中毒的可能。时，即有发生食物中毒的可能。3)3)分离培养分离培养 ：4)4)鉴定鉴定 第53页，共110页，编辑于2022年，星期三第三节第三节产单核李斯特菌产单核李斯特菌第54页，共110页，编辑于2022年，星期三一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抗原结构抗原结构l抵抗力抵抗力第55页
32、，共110页，编辑于2022年，星期三（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈V V字形成对排列，字形成对排列，有时呈丝状，偶尔可见双球状。有时呈丝状，偶尔可见双球状。多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污染的类多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污染的类白喉棒状杆菌；白喉棒状杆菌；又因菌体短小，三、五成链，并有又因菌体短小，三、五成链，并有溶血性，溶血性，易与链球菌混淆，用触酶试验加以区别。易与链球菌混淆，用触酶试验加以区别。4/17/2023第56页，共110页，编辑于2022年，星期三 在在222225
33、25环环境境中中形形成成4 4根根鞭鞭毛毛，故故在在2525肉肉汤汤培培养养液液中中运运动动活活泼泼；而而在在3737时时仅仅形成形成1 1根鞭毛，根鞭毛，动力缓慢动力缓慢。第57页，共110页，编辑于2022年，星期三（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性v 需氧或兼性厌氧，营养要求不高。需氧或兼性厌氧，营养要求不高。4 44545均能生长，均能生长，最适温度最适温度30303737。因在。因在44能生长，故可进行能生长，故可进行冷增菌冷增菌。v 初时菌落极小似初时菌落极小似露珠状露珠状、光滑透明，通过侧光微显、光滑透明，通过侧光微显蓝绿色，蓝绿色，3737培养数日，菌落增
34、大变成灰暗，血平板培养数日，菌落增大变成灰暗，血平板上的菌落有狭窄的上的菌落有狭窄的溶血环。溶血环。4/17/2023第58页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）生化反应（三）生化反应l 1 12 2d d内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，产内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，产酸不产气，在酸不产气，在3 31010d d内可发酵乳糖、蔗糖、内可发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。触酶阳性，阿拉伯糖。触酶阳性，VPVP（+），），MRMR（+）。）。第59页，共110页，编辑于2022年，星期三（四）抗原结构（四）抗原结构（四）抗原结构（四）抗原结构l 分为分为4 4个血清型，个血清型，1 1型主要感染啮齿动
35、物，各型型主要感染啮齿动物，各型对人类均可致病，但以对人类均可致病，但以1a1a和和lblb最为多见。最为多见。l 本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及大肠本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及大肠埃希菌等具有共同抗原。埃希菌等具有共同抗原。4/17/2023第60页，共110页，编辑于2022年，星期三（五）抵抗力（五）抵抗力l在土壤、粪便、饲料中能长期存活。在土壤、粪便、饲料中能长期存活。l耐盐、耐碱、不耐酸。耐盐、耐碱、不耐酸。l对热敏感，对对热敏感，对般消毒剂敏感，般消毒剂敏感，7070的乙的乙醇醇5min5min即可杀死本菌。即可杀死本菌。第61页，共110页，编辑于2022年，星期三
36、二致病性二致病性 本菌常伴随本菌常伴随EBEB病毒引起传染性单核细病毒引起传染性单核细胞增多症。胞增多症。第62页，共110页，编辑于2022年，星期三三微生物学检验三微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序第63页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法 1 1分离培养分离培养 2 2鉴定要点鉴定要点 A.A.形态染色：革兰阳性小杆菌。形态染色：革兰阳性小杆菌。B.B.溶血：本菌的溶血：本菌的溶血环很窄，往往把菌落溶血环很窄，往往把菌落刮去，方可见菌落下面的刮去，方可见菌落下面的溶血环。溶血环。C.C.动力试
37、验：动力试验：2525动力阳性。动力阳性。D.D.44能生长能生长 4/17/2023第64页，共110页，编辑于2022年，星期三第四节第四节红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌第65页，共110页，编辑于2022年，星期三一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应第66页，共110页，编辑于2022年，星期三（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，粗糙革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，粗糙型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚膜，无芽型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚膜，无芽胞。胞。4/17/2023第67页，共110
38、页，编辑于2022年，星期三（二）培养特性（二）培养特性 厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧环境厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧环境中培养，传代后在有氧条件下也能生长。中培养，传代后在有氧条件下也能生长。第68页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应v 氧化酶（氧化酶（），触酶（），触酶（），发酵葡萄糖、），发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气。乳糖，产酸不产气。4/17/2023第69页，共110页，编辑于2022年，星期三二致病性二致病性 红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔
39、类，人主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感染发病。类也感染发病。人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴管丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血症炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血症或心内膜炎。或心内膜炎。第70页，共110页，编辑于2022年，星期三三微生物学检验三微生物学检验三微生物学检验三微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序 （三）检验方法（三）检验方法 1直接镜检直接镜检 2分离培养分离培养 3生化反应生化反应 4动物试验动物试验 4/17/
40、2023第71页，共110页，编辑于2022年，星期三第五节第五节阴道加特纳菌阴道加特纳菌第72页，共110页，编辑于2022年，星期三一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力第73页，共110页，编辑于2022年，星期三（一）形态与染色（一）形态与染色 本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本菌具有多形性，两端钝圆，无鞭毛，无荚膜，菌具有多形性，两端钝圆，无鞭毛，无荚膜，无芽胞。无芽胞。第74页，共110页，编辑于2022年，星期三（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性（二）培养特性v 兼性厌氧菌，营
41、养要求较高，在一般营养兼性厌氧菌，营养要求较高，在一般营养琼脂平板上不生长。琼脂平板上不生长。v 在含在含5%5%人血琼脂平板上置人血琼脂平板上置5%5%COCO2 2，35353737培养培养2424h h后，形成针尖大小菌落；经后，形成针尖大小菌落；经4848h h后形成后形成溶血、圆形、光滑不透明的菌落。溶血、圆形、光滑不透明的菌落。4/17/2023第75页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应（三）生化反应v 氧化酶（氧化酶（），触酶（），触酶（），尿素酶（），尿素酶（）。）。发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，产酸不产气。发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等
42、，产酸不产气。4/17/2023第76页，共110页，编辑于2022年，星期三（四）抵抗力（四）抵抗力 所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。第77页，共110页，编辑于2022年，星期三二致病性二致病性l 阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度生长，阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道病（非特异细菌性阴道病（BVB
43、V）。）。l 可导致妇产科多种严重并发症。如子宫可导致妇产科多种严重并发症。如子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。全切术后感染、绒毛膜炎等。l 本菌还能引起新生儿败血症和软组织感本菌还能引起新生儿败血症和软组织感染。染。第78页，共110页，编辑于2022年，星期三l 并非并非GVGV阳性者都是阳性者都是BVBV，因为因为202040%40%的正常妇女阴道的正常妇女阴道也可检出此菌。也可检出此菌。l BV BV诊断标准：诊断标准：A.A.阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味。阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味。B.B.分泌物分泌物pHpH4.54.54.74.7。C.C.分泌物胺试验阳性。
44、分泌物胺试验阳性。D.D.镜检有线索细胞。镜检有线索细胞。4/17/2023第79页，共110页，编辑于2022年，星期三三微生物学检验三微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集（二）检验程序（二）检验程序第80页，共110页，编辑于2022年，星期三（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法（三）检验方法 1 1阴道分泌物直接检查阴道分泌物直接检查 A.A.直接湿片镜检：线索细胞直接湿片镜检：线索细胞 B.B.涂片染色镜检：涂片染色镜检：C.C.pH pH测定：阴道测定：阴道pHpH4.74.7，提示细菌性阴道炎。提示细菌性阴道炎。D.D.胺试验：胺试验：2 2分离培养分离培养 4/17/
45、2023第81页，共110页，编辑于2022年，星期三分枝杆菌属及检验分枝杆菌属及检验 第82页，共110页，编辑于2022年，星期三分枝杆菌属主要特点分枝杆菌属主要特点l是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。l细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。l具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染抗酸染色色。l专性需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢。专性需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢。l不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，其致其致病性与菌体成分有密切关系，
46、病性与菌体成分有密切关系，所致疾病呈慢性。所致疾病呈慢性。第83页，共110页，编辑于2022年，星期三分枝杆菌属种类分枝杆菌属种类结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌田鼠分枝杆菌非典型分枝杆菌麻风分枝杆菌光产色分枝杆菌暗产色分枝杆菌不产色分枝杆菌迅速生长分枝杆菌分枝杆菌属第84页，共110页，编辑于2022年，星期三第一节第一节结核分枝杆菌结核分枝杆菌第85页，共110页，编辑于2022年，星期三一一生物学特性生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力l变异性变异性第86页，共110页，编辑于2022年，星期三形态与染色形态与染色l细
47、长略弯，分枝生长细长略弯，分枝生长趋势。趋势。l无芽孢，无鞭毛，部无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜。分菌株有荚膜。l革兰染色阳性，不易着革兰染色阳性，不易着色。色。l抗酸染色阳性抗酸染色阳性，多数菌多数菌体含有一至数个体含有一至数个异染颗异染颗粒粒。第87页，共110页，编辑于2022年，星期三结核分枝杆菌结核分枝杆菌（抗酸染色）（抗酸染色）第88页，共110页，编辑于2022年，星期三培养特性培养特性l 生长条件：生长条件：细胞内寄生菌，专性需氧，细胞内寄生菌，专性需氧，8%8%12%12%COCO2 2可刺激其可刺激其生长。最适生长。最适pH6.5pH6.56.86.8。营养要求较高，必须在
48、含有血清、卵黄、甘油、营养要求较高，必须在含有血清、卵黄、甘油、马铃薯以及无机盐类的特殊培养基上才能生长。马铃薯以及无机盐类的特殊培养基上才能生长。l 生长现象：生长现象：生长缓慢，在一般的培养基中生长缓慢，在一般的培养基中每分裂一代的速每分裂一代的速度为度为18182424h h。改良罗氏培养基改良罗氏培养基菌落菌落特征：干燥、淡黄色、特征：干燥、淡黄色、质地较硬的质地较硬的R R型菌落型菌落 液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长。液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长。第89页，共110页，编辑于2022年，星期三结核分枝杆菌菌落结核分枝杆菌菌落第90页，共110页，编辑于2022年，星
49、期三生化反应生化反应l生化反应不活泼，不发酵糖类。触酶阳性。生化反应不活泼，不发酵糖类。触酶阳性。l与非结核分枝杆菌鉴别：与非结核分枝杆菌鉴别：耐热触酶试验；（非结核分枝杆菌）耐热触酶试验；（非结核分枝杆菌）l与牛分枝杆菌鉴别与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验；（牛分枝杆菌）烟酸试验；（牛分枝杆菌）第91页，共110页，编辑于2022年，星期三抵抗力抵抗力l抵抗力特点：抵抗力特点：“三耐四敏三耐四敏”耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1:130001:13000）对湿热、对湿热、7070乙醇、紫外线、常用抗结核乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）敏感。药物（但长期使
50、用易产生耐药性）敏感。结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，酒精结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，酒精较易渗入细胞壁将其杀死，故对较易渗入细胞壁将其杀死，故对70%70%75%75%的酒的酒精敏感精敏感。但脂质可防止菌体内水分丢失，故对。但脂质可防止菌体内水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。干燥的抵抗力特别强。第92页，共110页，编辑于2022年，星期三变异性变异性 典型形态典型形态多形性多形性 R R型菌落型菌落S S型菌落型菌落 有毒有毒无毒（用于制备疫苗）无毒（用于制备疫苗）抗结核药敏感抗结核药敏感耐药耐药第93页，共110页，编辑于2022年，星期三二致病性与免疫性二致病性与免疫性l致病物质致