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1、革兰阳性杆菌及检验革兰阳性杆菌及检验革兰阳性杆菌菌属间的鉴别革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌棒状杆菌属属芽胞杆菌芽胞杆菌属属李斯特菌李斯特菌属属丹毒丝菌丹毒丝菌属属加特纳菌加特纳菌属属形态形态棒状棒状杆菌有芽杆菌有芽胞胞短杆、链短杆、链或丝状或丝状细杆或丝细杆或丝状状杆菌、多杆菌、多形性形性触酶触酶+-动力动力-V V+-对氧对氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧需氧，兼需氧，兼性厌氧性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧V V：炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。第一节第一节棒状杆菌属棒状杆菌属棒状杆菌属的共同特征棒状杆菌属的共同特征1)革兰阳性
2、多形态杆菌革兰阳性多形态杆菌2)无荚膜、无鞭毛、无芽胞无荚膜、无鞭毛、无芽胞3)细菌呈不规则栅栏状排列细菌呈不规则栅栏状排列4)需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧5)触酶试验阳性触酶试验阳性6)细胞壁结构和血清学分析，证明与分枝细胞壁结构和血清学分析，证明与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。一一白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌2023/4/14形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 瘦长弯曲、一瘦长弯曲、一端或两端膨大端或两端膨大的革兰阳性杆的革兰阳性杆菌。无荚膜、菌。无荚膜、无芽胞、无鞭无芽胞、无鞭毛、无菌毛。毛、无菌毛。细菌排列呈散细菌排列呈散在在L L、V V、Y
3、Y字形字形及不规则栅栏及不规则栅栏状。状。用美蓝、用美蓝、NeisserNeisser法、法、AlbertAlbert法等染色法等染色时，在细菌的一时，在细菌的一端或两端有浓染端或两端有浓染的颗粒，此颗粒的颗粒，此颗粒与菌体着色不同，与菌体着色不同，称为称为异染颗粒异染颗粒，为本菌重要形态为本菌重要形态学特征，对鉴别学特征，对鉴别细菌有重要意义。细菌有重要意义。菌落特征菌落特征l血平板：灰白、狭窄血平板：灰白、狭窄溶血环。溶血环。l鸡蛋斜面和血清斜面：鸡蛋斜面和血清斜面：生长快速，灰白色有生长快速，灰白色有光泽菌落。光泽菌落。l亚碲酸钾血平板：为亚碲酸钾血平板：为选择培育基，菌落呈选择培育基，
4、菌落呈黑色。菌落分为重型、黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。轻型或中间型。l标本采集标本采集l用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。采集分泌物。l未见假膜的疑似患者或带菌者可采集未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。其次节其次节需氧芽胞杆菌属需氧芽胞杆菌属芽胞杆菌属共同特点芽胞杆菌属共同特点1)1)绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞菌体横径的芽胞2)2)除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血实力除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血实力3)3)非抗酸性非抗酸性4)4)养分
5、要求不高，在一般培育基上生长良养分要求不高，在一般培育基上生长良好好 一一炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌2023/4/14形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。人工培育或在外界环境中易产生芽胞，在人工培育或在外界环境中易产生芽胞，在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以炭疽病尸体严禁解剖。以炭疽病尸体严禁解剖。炭疽芽胞杆菌炭疽芽
6、胞杆菌2023/4/14培育特性培育特性培育特性培育特性 l需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。l养分要求不高，一般培育基上生长良好。养分要求不高，一般培育基上生长良好。2023/4/14菌落特征菌落特征菌落特征菌落特征l一般琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透亮灰白色，一般琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透亮灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈卷发状。呈卷发状。l血液琼脂平板：培育血液琼脂平板：培育121215h15h，菌落四周无溶血环，菌落四周无溶血环，181824h24h后可有稍微溶血，而其他需氧芽胞杆菌大多后可有稍微溶血，而其他需氧芽胞杆
7、菌大多数溶血明显而快速。数溶血明显而快速。l液体培育基中呈絮状生长液体培育基中呈絮状生长l明胶培育基中呈倒置的杉树明胶培育基中呈倒置的杉树l有毒株在有毒株在NaHCO3NaHCO3培育基中形成荚膜，菌落呈粘液状，培育基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。有拉丝。有有毒毒株株在在NaHCO3NaHCO3血血琼琼脂脂平平板板上上置置5%CO25%CO2环环境境中中培培育育181824h24h，可可产产生生荚荚膜膜，菌菌落落由由粗粗糙糙型型变变为为粘粘液液型型，而而呈呈现现半半圆圆形形，突突起起，有有光光泽泽的的菌菌落落。以以接接种种针针挑挑取取时时呈呈拉拉丝丝状状，此此为为鉴鉴别别菌菌落落要要点点，
8、而而无无毒毒株株则则形形成成粗粗糙糙型菌落。型菌落。标本采集标本采集l标本采集标本采集l病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。l死亡病畜标本：死于败血症的动物，严禁宰死亡病畜标本：死于败血症的动物，严禁宰杀、解剖，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、杀、解剖，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。采集少量血液。l污染物品：皮革、兽毛、土壤等。污染物品：皮革、兽毛、土壤等。l标本处理：无杂菌污染标本干脆接种，有杂菌标本处理：无杂菌污染标本干脆接种，有杂菌污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。已处理标本已处理标本干脆涂片干
9、脆涂片增菌培育增菌培育分别培育分别培育Ascoli试验试验革兰染色革兰染色荚膜染色荚膜染色初步报告初步报告血平板血平板戊烷脒琼脂平板戊烷脒琼脂平板可疑菌落可疑菌落菌落涂片菌落涂片染色镜检染色镜检鉴定试验鉴定试验肉汤培育肉汤培育动物试验动物试验动物死亡动物死亡分别培育分别培育噬菌体裂解噬菌体裂解串珠试验串珠试验青霉素抑制试验青霉素抑制试验检验方法检验方法l在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素对动物在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病力者。力者。炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别
10、鉴别项目鉴别项目炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌及其蜡样芽胞杆菌及其它需氧芽胞杆菌它需氧芽胞杆菌形态形态菌体两端平整或凹陷菌体两端平整或凹陷两端钝圆两端钝圆两端钝圆两端钝圆荚膜荚膜+-动力动力-+菌落菌落有小突起，边缘呈卷有小突起，边缘呈卷发状，粘稠菌落发状，粘稠菌落锯齿状粗糙菌落锯齿状粗糙菌落蜡样或粗糙不粘稠蜡样或粗糙不粘稠菌落菌落肉汤肉汤絮状沉淀，上层清晰絮状沉淀，上层清晰均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜AscoliAscoli+-溶血溶血不溶血或微溶血不溶血或微溶血+串珠试验串珠试验+-二二蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌形态与染色形态与染色
11、革兰阳性大杆菌，两革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短端较钝、链杆状，长短不一，有鞭毛，无荚膜，不一，有鞭毛，无荚膜，可形成芽胞。可形成芽胞。2023/4/14培育特性培育特性培育特性培育特性 v需氧或兼性厌氧，养分要求不高。需氧或兼性厌氧，养分要求不高。v 一般琼脂平板：可形成圆形、一般琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、不透亮、隆起、灰白色、不透亮、R R型蜡型蜡滴样大菌落。滴样大菌落。v 血琼脂平板：菌落呈浅灰色，血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，菌落四周有似毛玻璃状，菌落四周有或或溶血。溶血。第三节第三节产单核李斯特菌产单核李斯特菌2023/4/14（一）形态与染色（一）形态与染
12、色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性小杆菌，直或稍革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈弯，常呈V V字形成对排列，字形成对排列，有时呈丝状，间或可见双有时呈丝状，间或可见双球状。球状。多数菌体一端较大，似棒多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污染的类状，易误认为是污染的类白喉棒状杆菌；白喉棒状杆菌；又因菌体短小，三、五成又因菌体短小，三、五成链，并有链，并有溶血性，易与溶血性，易与链球菌混淆，用触酶试验链球菌混淆，用触酶试验加以区分。加以区分。在在22222525环环境境中中形形成成4 4根根鞭鞭毛毛，故故在在2525肉肉汤汤培培育育液液中中运运动动活活泼泼；而而在在3737时仅形成时仅形成
13、1 1根鞭毛，动力缓慢。根鞭毛，动力缓慢。2023/4/14（二）培育特性（二）培育特性（二）培育特性（二）培育特性v 需氧或兼性厌氧，养分要求不高。需氧或兼性厌氧，养分要求不高。4 44545均能生长，最适温度均能生长，最适温度30303737。因在。因在44能生长，故可进行冷增菌。能生长，故可进行冷增菌。v v 初时菌落微小似露珠状、光滑透亮，通初时菌落微小似露珠状、光滑透亮，通过侧光微显蓝绿色，过侧光微显蓝绿色，3737培育数日，菌落增培育数日，菌落增大变成灰暗，血平板上的菌落有狭窄的大变成灰暗，血平板上的菌落有狭窄的溶溶血环。血环。第四节第四节红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌2023/4/14
14、（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰阳性杆菌，单个革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，粗糙型菌落或形成短链状，粗糙型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚形成长丝状。无鞭毛，无荚膜，无芽胞。膜，无芽胞。（二）培育特性（二）培育特性 厌氧或微需氧菌。初次分别需在厌氧厌氧或微需氧菌。初次分别需在厌氧环境中培育，传代后在有氧条件下也能环境中培育，传代后在有氧条件下也能生长。生长。二致病性二致病性 红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。体。主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感染发病。人类也感染发病。人接触动物
15、或其产品经皮肤损伤而引起人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血症或心内膜炎。症或心内膜炎。第五节第五节阴道加特纳菌阴道加特纳菌（一）形态与染色（一）形态与染色 本菌革兰染色本菌革兰染色视菌株和菌龄不视菌株和菌龄不同而异。本菌具同而异。本菌具有多形性，两端有多形性，两端钝圆，无鞭毛，钝圆，无鞭毛，无荚膜，无芽胞。无荚膜，无芽胞。2023/4/14（二）培育特性（二）培育特性（二）培育特性（二）培育特性v 兼性厌氧菌，养分要求较高，在一般养兼性厌氧菌，
16、养分要求较高，在一般养分琼脂平板上不生长。分琼脂平板上不生长。v 在含在含5%5%人血琼脂平板上置人血琼脂平板上置5%CO25%CO2，35353737培育培育24h24h后，形成针尖大小菌落；经后，形成针尖大小菌落；经48h48h后形成后形成溶血、圆形、光滑不透亮的菌溶血、圆形、光滑不透亮的菌落。落。二致病性二致病性l 阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道病（调，而引起非特异细菌性阴道病（BVBV）。）。l 可导致妇产科多种严峻并发症。如子可导致妇产科多种严峻并发症。如子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。宫全切术后感染、绒毛膜炎等。l 本菌还能引起新生儿败血症和软组织本菌还能引起新生儿败血症和软组织感染。感染。2023/4/14l 并非并非GVGV阳性者都是阳性者都是BVBV，因为，因为202040%40%的正常妇女的正常妇女阴道也可检出此菌。阴道也可检出此菌。l BV BV诊断标准：诊断标准：l 阴道分泌物增多，淡薄均质灰白色，有恶臭味。阴道分泌物增多，淡薄均质灰白色，有恶臭味。l 分泌物分泌物pHpH4.54.54.74.7。l 分泌物胺试验阳性。分泌物胺试验阳性。l 镜检有线索细胞。镜检有线索细胞。