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1、（江苏省百校联考2021届高三年级第三次考试生物试题）山枣果实营养丰富，含有多种微量元素，是制作山枣酒、山枣醋的重要原料。山枣醋的制作通常包括果酒发酵、果醋发酵、勾兑调配成商品醋等阶段。下列相关叙述错误的是（)A.清洗山枣后进行蒸煮并捣碎，冷却后加入果胶酶，有利于释放有机酸和糖类B.酿制山枣果酒时，接种活化的酵母后应在30C的条件下密封发酵10天左右C.在山枣酒中按比例接种醋酸菌，放入30C恒温振荡培养箱中发酵可获得果醋D.在山枣醋中添加果汁、庶糖糖浆等并进行调配后，需进行灭菌处理才能得到成品【答案】B解析】【分析】1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间仗其繁姐，
2、再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18(25(,pH最好是弱酸性。2、付昔酸菌好氧型细荫，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（洒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30(35C。【详解】A、沽洗111枣后进行蒸煮并捣碎，冷却后加入果胶酌，有利千分解细胞壁，释放有机酸和糖类，A正确；B、酿制山枣果洒阶段，接种活化的酵母后应在2OC左右的条件下密封发酵，B错误；C、在山枣酒中按比例接种醋酸菌，放入30C恒温振荡培养箱中发酵可制得果醋，C正确；D、在山枣酌添加果汁、庶糖糖浆等调配后，还需要进行杀菌处理后得到产品，D正确。故选B。（江苏
3、省百校联考2021屈高三年级第三次考试生物试题）下图表示采用富集方法从土壤中分离能降解对胫基苯甲酸的微生物的实验过程。下列有关叙述，正确的是（)将土壤样品接种到含有对经基苯甲酸的液体宫集培养基中l 尸二气馀布到含有。将单齿裕接种该物质的培齿落在平/-到液体培养基养平板表面一板上生匕并进行培养艺百A.该实验所用的器具、培养基均需灭菌处理B.G)-重复培养能提高目的菌的比例c 的培养过程可以纯化并计数目的菌D.(7)中的培养基中都应含有对胫基苯甲酸【答案】ABC【解析】【分析】选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环埮不同，有的适丁酸性环境，有的适T碱性环境；不同微生物对某些
4、化学药品的抵抗力不同，利用这些特点，我们便司配制出适于某些微生物生长而抑制其他微生物的选择培养拈。【详解】A、图示为微生物的实验，需要进行无菌操作，所以该实验所用的器具、培养基均需灭闲处理，A正确；B、）是将土壤提取液置千含对胫基苯甲酸的培养液中培养，币复多次可以提高目的菌的比例，B正确；C、-的培养过程采用稀释涂布平板法，所以可以纯化并计数目的菌，C正确；D、)(j)的实验H的是说明通过选择培养的确得到了欲分离的H标微生物，有一组作为对照不含有对经基荣甲酸，D错误。故选ABC。【点睛】本题考查微生物分离和培养，需荌考生结合实验目的对实验的步骤进行分析。（南京市2021届高三年级第三次模拟考试
5、）发酵产品是中国传统食品中一个重要的类别，承载了中华民族悠久的历史和丰富的文化内涵。下列有关叙述正确的是()A.泡菜制作过程中，坛内大豐增加的液体主要来自微生物的代谢B.利用简易装置制作酸奶的保温发酵过程中，无需适时打开瓶盖放出气体C.检侧果酒发酵前后发酵液的温度变化，可作为果酒制作是否成功的依据D.果醋制作中醋酸菌的碳源和能源，都是来自于果酒发酵产生的酒精【答案】B【解析】【分析】1、泡菜制作过程是利用乳酸荫的无氧呼吸产生大址乳酸，该过程中由于pH下降，无氧环境具他微生物无法繁殖，因此主要细菌是乳酸菌，乳酸岱无氧呼吸过程不产生一氧化碳，不而要放出气体；2、果酒发酵是利用酵母菌无氧呼吸产生酒精
6、，可以通过重铭酸钾来检铡酒精从而判断是否制作成功。【详解】A、泡菜制作过程中，外界溶液浓度过高使细胞渗透失水会使坛内液体增加，A错误；B、酸奶保温发酵过程中，产生乳酸过程不产生二氧化碳，因此无盂打开瓶盖放气，B怍确；C、果酒制作是否制作成功可用酸性重铭酸钾进行检测，C错误；D、在糖源和氧气充足的悄况下，以葡萄糖作为碳源，D铅误。故选B。(2021届新高考基地学校高三第二次大联考）下列关千高中生物学实验的叙述，正确的是()A.用纸层析法分离叶绿体中色素时，滤纸条上色素带越宽，该色素溶解度越大B.在过氧化氢充足的清况下，提高过氧化氢酶浓度，则酶的活性更高，反应更快C.将组织中提取的DNA丝状物直接
7、加入二苯胺试剂中，沸水浴冷却后变蓝D.用血球计数板统计酵母菌数兰时，应待酵母菌全部沉降到计数室底部时计数【答案】D【解析】【分析】1、分离色素原理：各色素随压析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢滤纸条从上到下依次足：胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）2、酶的催化具有高效性（酶的催化效率远远高于无机催化剂）、专一性（一种酶只能催化一遇热膨胀而形成小孔，使得饺头松软，A正确；B、制作泡菜时加入的香辛料不仅能调味，还可以抑制杂茵的繁殖，可有效防止杂怕污染，B IE确；C、泡菜制作时，随发酵时间的延长，业硝酸盐的含星先
8、增加后减少，这是因为硝酸盐还原菌受抑制，同时形成的亚硝酸盐又被分解，因而亚硝酸盐含赘下降，C正确；D、酵母菌小能直接利川米粉或面粉中的淀粉，需婓将其分解成葡萄糖冉进行发酵，D错误。故选D（苏北名校2021届高三生物模拟考试）下列有关培养基的叙述，不正确的是()A.纯化微生物和植物组织培养时常用的是固体培养基B.在固体培养基中加入无菌水稀释，可直接用千扩大化培养细菌c.根据培养基上菌落的特征可初步判断和鉴别细菌的类型D.用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌时，初期需排气l-2次，否则压力达到温度达不到【答案】B【解析】【分析】植物组织培养用固体培养基；尿素分解菌只能以尿素为唯氮源，无氮培养基尿素分解菌不
9、能生长；在用纤维素作为叽一碳源的培养基中，纤维素分解荫能够很好地生长，只他微生物则不能生长在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物个能形成，培养某中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圉，从而可筛选纤维素分解访。【详解】A、纯化微生物面要获得单个荫落，用固体培养基，而植物组织培养一般用固体焙养基，因为植物祔要固定，A正确；B、大揽培养微生物婓用液休培养基，固体培养某用于分离纯化微生物，B错误；C、不同细荀的酌落形态，颜色，大小等闲落特征不同，因此根据培养基上闭落的特征可初步判断和鉴别细陌的类型，C正确；D、用高压蒸汽火菌法对培养基灭菌时，初期而排气1-
10、2次，排出火团锅内的冷窄气，否则压力达到温度达小到，D正确。故选B。（苏北名校2021届高三生物模拟考试）高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示。将得到的菌悬液转接千同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用磺液作显色处理，看到如图2所示情况。下列选项正确的是（)二夕亏岁0 基f0蓝落吓落落11显菌不菌三001”;0 h了岁乙0 今过冷，甲0品样卢i图2A.过程0合称为稀释涂布平板法基C.II号培养基上的接种方法为平板划线法需菌种答案】ACDB.甲乙试管中的液体均为选择培养D.图2中周围不显蓝色的菌落含
11、有所【解析】【分析】接种微生物的方法主婓是稀释涂布平板法和平板划线法；稀释涂布线法：逐步稀释菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的苗液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养；平板划线法由接种环沾取少许待分离的材料，在无苗平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数嚣将随祜划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。【详解】A、根据l号培养Ml一团落分布均匀，可知G)过程为稀释涂布平板法，A下确；B、甲乙试秤中的液体是用千样品稀释，应为无闲水，B错误；C、山II号培养基上上的划线区域可知从1号培养基上挑选的菌
12、落进行接种的方法是平板划线法，C正确；D、淀粉与嫔液反应呈蓝色，但如果淀粉分解曲中的淀粉酶将淀粉水解后就不能呈蓝色，因此周围不显蓝色的阳落含有所需苗种，D正确。故选ACD。（苏北名校2021届高三生物考前模拟考试）下列关千发酵的做法合理的是()A从传统作坊中分离和筛选优良菌种用于大规模工厂化生产果醋B.在发酵罐中加入刚果红促进纤维素分解菌分解秸杆中的纤维素C.将葡萄汁煮沸冷却后灌入约2/3瓶，密闭发酵即可自制葡萄酒D.每日从泡菜坛中取少最泡菜品尝，以确定自制泡菜是否可以食用【答案】A【解析】【分析】1、果酒发酵是利用葡萄皮表面的野生酵母菌无氧呼吸产生酒精；2、果醋发酵是利用醋酸稍在有氧条件下将
13、糖分解成醋酸；3、泡菜是乳酸团在无氧条件下无氧呼吸产生乳酸。【详解】A、从传统作坊中分离和筛选优良菌种用千大规模丁厂化生产果醋，因为大规楼的工厂化生产需婓保证菌种的优良，保证产品质昂，A正确；B、刚果红可以鉴别纤维系是否被分解，不能促进纤维系分解荫分解纤维素，B错误；C、发酵果酒的葡萄汁不能煮沸，会杀死葡萄皮表面的野生酵母荫，C错误；D、泡菜制作过程中乳酸菌进行无氧呼吸，不能每天打开泡菜坛，否则会导致发酵失败，D错误。故选A。【点睛】(2021届江苏省徐州市高三5月考前模拟生物试题）我国规定lL自来水中大肠杆菌数不得超过3个。某兴趣小组利用滤膜法（如下图）对校内自来水中大肠杆菌数量进行检测。有
14、关叙述正确的是（)将渍膜转移至伊红美蓝培养基 气痉液l吵A.取样水龙头应用火焰灼烧，打升水龙头一段时间后再取样B.滤膜的孔径应小于大肠杆菌，过滤水样应足量C.伊红美蓝培养基属千选择培养基，培养基中含有琼脂D.进行细菌培养的同时需进行未接种培养基的培养【答案】ABD【解析】【分析】欲侧定自来水中大肠杆菌数目，将已知休积的水过滤后，将滤膜放在伊纠美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色，注意滤膜与培养基完全贴紧，个能有气泡；可根据培养基K菌落的数H,计鍔出水样中大肠杆怕的数目。【详解】A、为避免杂菌污染，取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样，是为f防止温度过高杀死目的荫，A正确；B、用滤
15、膜过滤待剿水样，滤膜的孔径应小于大肠杆菌，这样水样中的细菌才会留在滤膜上，B正确；C、伊红美监培养拈屈十鉴别培养基，且该培养基屈于固体培养基，培养基中含有琼脂，C错误；D、进行细菌培养的同时需进行未接种培养基的培养，起对照作兀，D正确。故选ABD。(2021届江苏省扬州市高三下学期最后一卷生物试题）书经中的“若作酒醴，尔惟曲糜提到酿酒必须要用酒曲。酒曲是以谷物为原料，破碎加水压制而成。酒曲富含酵母菌和霉菌等多种微生物，经水浸泡活化后投入蒸熟的米即可用于酿酒。下列相关说法错误的是（)A.酒曲中含有微生物分泌的多种酶B.浸泡酒曲的过程中微生物代谢加快C.夏季气温升高，需使用沸水浸泡酒曲以防杂菌污染
16、D.酒曲中的酵母菌通过无氧呼吸将原料中的糖转化为酒精【答案】C解析】【分析】1酿洒时必须要用洒曲，加入洒曲的目的是：接种酵母菌，酵母齿首先将桔米中的淀粉分解成葡萄糖，然后让酵母齿在无氧的条件下，将葡萄糖分解生成酒粘和二氧化碳。2酵母菌的生活需要适宜的温度，防止温度太高将酵母菌杀死，过低又会降低酵母菌的活性，因此一般需将煮熟的糯米冷却到常温后再接种酵母菌。【详解】A、酒曲中含有酵母荫和毒闭，它们屈千微牛物，能分泌多种酶，把淀粉轧化为葡萄糖，再把葡萄糖转化为洒精，A正确；B、用水浸泡酒曲后，其内的微生物吸收水分，代谢能力增强，代谢加快，B正确；C、酵母菌的生活需耍适宜的温度，用煮沸的水浸泡酒曲会将
17、酒曲内的微生物杀处，C错误；D、酵母酌在无氧的条件下，将葡萄糖分娇生成酒精和二氧化碳，D正确。故选C。非选择题（南京市、盐城市2021届高三年级第二次模拟考试）解磷菌是一种能将土壤中植物不能利用的磷转化为植物可以利用磷的功能微生物（主要为细菌），在提高土壤中有效磷含鼓、促进磷循环方面发挥着重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周围会出现透明圈。下图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的部分流程示意图，步骤I表示将lg土壤加入到l001nL灭过菌的PVK培养基培养。36h后，取lOn止培养液接种于l001nLPVK培养基继续富栠培养；连续富栠培养3次后进行实验步骤ll-N(B、C中培养基的营养
18、成分与A相同）。请据图回答：它一l;心儿否冯皿巨刁旦1吐填lOOmL 挑菌纯化A B C D(1)用千培养解磷菌的培养基在接种前需要通过法进行灭菌。从成分上看，与A相比，B中多了（填物质名称）。(2)在操作II、III中，采用的接种方法分别是。(3)为了尽快观察到解磷菌培养的实验结果，应将接种了样品的平板倒置于中培养，并同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验。(4)在固体培养基中分离培养出解磷菌后，需通过测虽直径，比较它们的比值以确定其解磷能力从而筛选出目标菌株。(5)分离出的解磷菌，需通过分子鉴定以确定种属关系。常用的方法是对细菌的核糖体RNA(J6S-rRNA)所对应的16SrDNA进
19、行序列分析（基因公司割序），在测序前一般采用菌落PCR的方法进行扩增。55(,30s 循环结束后，12c,保温1血1CD菌落PCR直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，与传统PCR相比省时省力，其原因是在PCR实验的具体操作时，按照事先设计好的配方用向微量离心管中依次加入各组分，按照上图的设计设置好PCR程序，其中a表示。在进行菌落PCR时，首先根据两端的脱氧核昔酸序列来设计引物。已知相关的上游引物序列为5-GCAATGCGTAGCCTCT-3，则下游引物的序列最合适的是。a.5-ACAATATGTATAATCT3 b.5TCATGAGCGCATAGTI3 C.5-GCAATGCG
20、TGCATIGC3 d.5AGAGGCTACGCATTGC3【答案】(1)高压蒸汽灭酌(2)凝固剂（琼脂等）(3)稀释涂布平板法、平板划线法(4)恒温箱(5)透明固（解磷圈）和团落(6)不油要从细胞中提取目的基因或人工合成目的菲困（7).似散移液器（移液管、移液抢）(8)预变性（预热）(9).16SrDNA(10).b【解析】【分析】微生物培养中无菌技术非常正要，对培养基灭菌常采用的方法是高压蒸汃灭荫，对培养ITII.进行灭菌采川的方法是十热灭菌法，i放生物培养常JT的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法；PCR技术是一种体外迅速扩堆DNA片段的技术，它能以及少扯的DNA为模板，在几小时内复制
21、出上百万份的DNA拷贝。【详解】（1)对培养基火菌常采用的方法是高压蒸汃灭菌，对培养皿进行火菌采用的方法是干热灭菌法；B培养基呈固态，而A呈液态，意味者B中加入了凝固剂，通常所用凝固剂为琼脂；(2)橾作Il过程使用液体培养基中菌体，接种在固体培养基七，所得B曲落为均匀分布，所以接种方法为稀释涂布平板法；操作田为挑菌落进一步纯化，所以需要接种环进-步稀释菌体，所以为平板划线法；(3)接种完成后，需将平板倒置千无菌培养箱中培养，还盂提供适宜的温度，所以为恒温箱中培养；(4)解磷卤分解磷后会形成解磷圈或透明圈，通过测扯其且径和诰落大小，计算解磷圈与菌落直径的比仙来看解磷团降解磷的能力，若解磷固与菌落
22、的直径比值大，则意味心分解磷能力大，反之，则小；(5)据题意可知，直接以菌休热解后暴露的DNA为模板扩增，而传统PCR盂婓从细胞中提取目的基因或人工合成目的基因，而这项工程耗时耗力，因此苗落PCR直接以荫体热解后暴露的DNA为模板进彴PCR扩增，与传统PCR相比省时省力，只原因是不而要从细胞中提取目的基因或人工合成日的某因。微招移液器（移液管、移液枪）是离心移液们所使用到移液工具，因此可微册移液器（移液管、移液抢）向微址离心管中依次加入各组分；a为94(,Smin,其为PCR预热条件，故此步为预变性，也可叫预热；题意中已告知，首先对16SrDNA进行序列分析，而在测序前一般采用菌落PCR扩增，
23、所以就需婓对其设计引物来进行扩增；引物设计婓根据16SrDNA（日的某因）端的脱氧核昔酸序列来设计，两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3端的互补重补，曰游引物序列为5-GCAATGCGTAGCCTCT-3，分析各个选项，下游引物的序列最合适的是5TCATGAGCGCATAGTT一3，两引物不会发生碱基配对，b正确。故选b。【点睛】本题考查微牛物的纯化，PCR技术相关知识，难度不大，记仕教材中的基础知识就能顺利解决，但要注总细节的处押，如培养基种类的区别，接种方法的选择，PCR技术中各个步骤的注意事项等。非选择题（南京市2021届高三年级第三次模拟考试）大肠杆菌是人和动物肠道中的正常寄居菌
24、，可在有氧环境下进行实验室培养。研究人员将某微生物的固碳基因导入大肠杆菌细胞内，使之能产生用于CO2固定和还原的酶；同时将能利用甲酸盐（可再生的储氢物质，具备廉价、易得、无毒、可降解等特性）的非天然酶基因导入大肠杆菌，如下图所示。谓回答下列问题：改造前的大肠杆苗改造后的大肠杆苗CO2 CO2 _._ 氧化磷酸化。2/注：图中箭头粗细代表物质的多少；生物量指有机物中碳含量。(1)改造后的大肠杆菌可利用培养基中的来合成直接的能源物质，进而驱动工程菌利用为原料合成有机物。(2)培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是。(3)实验过程中，需每天取2rnL培养液用进行一系列梯
25、度稀释，将稀释了IO倍和100倍的培养液各在3个平板上接种（每个平板的接种鼠为0.I rnL)，经适当培养后，两组平板上的菌落数分别为71、75、73和4、9、据此可得出每升菌液中的活菌数为个。(4)由题意可知，改造前的大肠杆菌的呼吸方式为，可利用如图所示的实验装置进行验证，操作如下：设置实验装置甲、乙两套，向甲装置的气球中加入lOmL含大肠杆菌的培养液，扎紧气球；向乙装置的气球中加入等矗的含大肠杆菌的培养液，再向气球中充入一定侃的,扎紧气球；烧杯混水注有人l，叶I山培乔液的1 i球-.-一、三、.、-L-2|801nL 601nL 40mL 20 n1L 将两套装置始终置于37c的洹温水浴中
26、；一段时间后，记录预期实验结果：。【答案】(1)甲酸盐(2)二氧化碳(CO2)(3)将未接种的培养基在适宜的条件下培养，观察培养某上是台有菌落出现(4)无菌水(5).7.3x106(6)既能进行有氧呼吸又能进行无氧呼吸(7)无菌空气（氧气）（8).烧杯中液面变化景(9).甲装置烧杯内液面上升，乙装隍烧杯内液面没有明显变化【解析】【分析】1、微生物常见的接种的方法(1)平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱巠培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随养线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。(2)稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大扯稀释）言，均匀涂布
27、在培养皿表面，经培养后可形成单个陌落。2、在微牛物学中，将允许特定种类的微牛物牛长，同时抑制或阻止其他种类微牛物牛长的培养基，称做选择培养菇。【详解】(1)分析图可知，改造后的大肠杆菌可利川甲酸盐合成ATP,进而驱动生物昂的合成。改造后的工程荫合成有机物的碳来自二氧化碳，除了调整大肠杆陌碳源的来源，还对其能兄来源进行了改造。(2)检测焙养基是否被污染，而在接种前将窄臼培养基即未接种的培养某放在适宜的条件下放咒一段制间，观察培养基上是否有菌洛出现，若有菌落出现，则说明培养基被污染或灭卤不彻底，不能用于接种实验。(3)稀释涂布平板法中，一般选用30300个闭落数进行计数，因此采用稀释10倍和苗落数
28、分别为71、75、73的进行计贺，可得出每升土壤浴液中的活菌数为（71+75+73)-,-3x1Q-,-(O.lxl0-3)=7.3x106个。(4)向甲装置的气球中加入10ml含大肠杆由的培养液，扎紧气球：向乙装置的气球中加入等见的含大肠杆酌的培养液，再向气球中充入一定芷的无菌空气，扎紧气球；将两套装置始终置丁37C的恒温水浴中；一段时间后，记录烧杯中液面变化篮。山千甲组无氧呼吸不吸收氧气，但是放出二氧化碳，仗气球体积增大，因此液面应该上升，故预期实验结果：甲装胃烧杯内液面上升，乙装贯烧杯内液面没有明显变化。由此可知，改造前的大肠杆菌既能进行有氧呼吸又能进行无氧呼吸。【点睛】本题考查微生物的
29、分离和培养，意在考查学生的识记能力和图形分析能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力。(2021届新高考基地学校高三笫二次大联考）雨水是大自然给生物圉提供的有效淡水资源，我们需要对雨水进行采取有效合理的疏导工作，避免城市发生内滂。通过管道将雨水收集至滞留池，再进行调蓄和净化后利用。一些工业污水和生活污水也会在不经意间流经至雨水管道。某城市管道收集到的雨水含有高浓度污染物，其中的多环芳灶(PAHs)会严重危害城市水环境。科研人员拟通过转基因技术获得高效降解污染物的工程菌。(1)经检测发现，滞留池内PAHs中的禁（由2个苯环共用2个碳原子形成）含量相对较高，研究者尝试培养能降解蔡的菌种，基本
30、操作步骤如下：CD配制以为唯一的培养基，按功能分类该培养基属于培养基。将培养基、培养皿、接种环进行灭菌处理。倒平板，用法接种土壤浸出液。在恒温培养箱中培养。挑取颜色、大小等有差异的，进一步分离和鉴定菌种。(2)步骤中对培养基进行高压蒸汽灭菌时，发现灭菌锅内压力达到IOOkPa而温度未达到l2lC，为同时达到设定的温度和压力要求，此时应该作过程）。(3)科研人员筛选出在滞留池中占比（较高、较底）且对蔡具有（较高、较（填操低）耐受性的菌株作为受体菌，运用转基因技术获得高效降解荼的工程菌，回答下列相关问题：卡抗疆i(，出，l，外谏基因转化检珊鉴定等-足22-受体菌限制酶号序别识-5-GGATCC-3
31、 BamHI 3-CCTAGG-5 5-AAGCTI-3 Hind III 3TICGAA5 5-GAATIC-3 EcoR I 3-CITAAG-5 5-TCTAGA-3 Xba I 3-AGATCT-5 O研究者先用PCR技术扩增能高效降解荼的外源基因，但外源基因序列两端无限制酶酶切位点，根据以图、表信息推测，扩增外源基因时应在所用一对引物的一端分别加上限制酶识别序列和（标明5-3序列方向）。将与经C产处理的受体菌细胞千缓冲液中混合，完成转化过程。将转化后的受体菌接种在加有的培养基上初步筛选后，再进一步检测、鉴定。【答案】(1)蔡(2)碳源(3)选择(4)稀释涂布甲板(5)单个菌落(6)将
32、锅内冷空气完全排尽）后重新关上排气阀加热(7)较高(8)较高(9).S-GGATCC-3(10).S-TCTAGA-3(11)基因表达载体（或重组质粒）素【解析】【分析】(12)卡那霉1、筛选能高效降解蔡的酌种的一般步骤足：取样、选抒培养、梯度稀释、涂布培养和筛选苗株。筛选时需要使用以禁为唯一碳源的选择培养基。2、转基因的具体步骤为：（1)目的基因的获取；（2)基因表达载体的构建；（3)将目的基因导入受体细胞；（4)目的基因的检料与鉴定。【详解】(1)(1)该实验巾，目的是筛选能降解禁的酌种，故需要配制以蔡为唯一碳源的培养基，这种培养基屈千选择培养基。对灭菌完成的培养基进行倒平板操作，然后用稀
33、释涂布平板法对土壤浸出液进行接种。接种时，为避免杂菌污染，盂要在酒精灯火焰（外焰）旁进行接种。接种完成后需要将平板放在恒温培养箱中进行培养，待菌落长出后，挑选颜色、大小等有差异的单个菌落进行进一步的接种，进而对菌种进行分浇的鉴定。(2)在对培养基进行高压蒸汽灭菌11寸，若锅内冷空气未排尽，会影响锅内温度，发现灭曲锅内压力达到lOOkPa而温度未达到121oc,为同时达到设庄的温度和压力要求，此时应该将锅内冷空气完全排尽后币新关上排气阀加热。(3)科研人员筛选出在生物滞留池中占比较高且对荼具有较高耐受性的菌株作为受体菌，运用转基因技术获得高效降解芘的工程菌。)研究者先用PCR技术扩增能高效降解荣
34、的外源拈因，但外源基因序列两端无限制酌酶切位点，根据图示可知，外源基因连接在载体启动子之后，终止子之前，外游某因替换载体中BamHI和XbaI位点之间的DNA片段，故扩增外源基因时应在所用的一对引物一端分别加上的限制朗识别序列是BamHI和XbaI位点序列，即5-GGATCC-3和5-TCTAGA-3。）将基因表达载体与经Ca2处押的处千感受态（或能吸收周围环境中DNA分子的牛珅状态）的受体菌细胞千缓冲液中混合，载体可进入受体陌细胞，完成转化过程。载体上的标记菲因是卡那需素抗性基因，将亢成转化的受休菌接种在加有卡那需素的培养某上可实现初步筛选。【点睛】本题结合图形，主要考查基因工程和微生物的分离和培养的相关知识，要求考生识记并运用微生物筛选、培养方法、流程，掌握转基因技术原理、方法、过程，再结合题下和图形中的信息答题。