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1、第二章细胞工程学案1. 细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平和细胞器水平的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。2. 植物细胞工程的技术有植物组织培养（基础技术）和植物体细胞杂交技术3. 植物组织培养的原理：植物细胞的全能性4.细胞的全能性：具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点。脱分化再分化5.全能性表达的难易程度：受精卵生殖细胞干细胞体细胞；植物细胞动物细胞 6.植物组织培养技术过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 根、芽 植物体7.细胞的脱分化：就
2、是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化的细胞的过程。8.植物组织培养：就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整植株的过程。9.植物体细胞杂交技术是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术；10.植物体细胞杂交技术原理：细胞膜的流动性、植物细胞的全能性；11.植物体细胞杂交技术过程：（1）去壁：利用纤维素酶和果胶酶 去除细胞壁，获得原生质体；（2）人工诱导原生质体融合（关键环节）：人工诱导的方法分为物理法和化学法，物理法
3、包括：离心、振动、电激等；化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂来诱导细胞融合；（3）杂种细胞再生出细胞壁后，再通过植物组织培养技术获得杂种植物；与再生细胞壁有关的细胞器有高尔基体、线粒体等。12.植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交的障碍。13.植物体细胞杂交过程中细胞融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，植物体细胞杂交完成的标志是得到杂种植株。14、植物体细胞杂交并没有出现“地上结番茄，地下长马铃薯”的原因是生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，两个物种的遗传物质的表达受到相互干扰；15、作物脱毒：选取植物的根尖或芽尖的分生区进行植物组织培养获得；16、人工种子：以植
4、物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子；17、动物细胞培养：从动物细胞中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖；18、动物细胞培养的原理：细胞增殖；19、动物细胞培养的过程：取动物组织块剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养；20、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁；细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
5、21、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内；22、培养动物细胞时，需要无菌无毒的环境，通常要在细胞培养液中添加一定量的抗生素，以防止培养过程中的污染；此外，应定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害；在培养基中还需要添加血清血浆等天然物质；通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其至于95%空气加5%CO2的混合气体的培养基中进行培养，其中CO2的主要作用是维持培养液的PH；23、动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其 并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体，核移植移得到的动物称为克隆动物；24、哺乳动物核移植
6、可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）；25、体细胞核移植的大致过程是：26、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交生物膜的流动性、植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合物理法：振动、电击、离心；化学法：用聚乙二醇（PEG）诱导获得杂种植株动物细胞融合生物膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除可应用诱导植物原生质体的手段外，还可用灭活的病毒诱导制备单克隆抗体27、单克隆抗体的制备过程：28、杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。29、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可大量制备。 学科网（北京）股份有限公司