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1、 HIV感染及AIDS的实验诊断第1页/共58页揭开AIDS历史的 第一页MMWR MORBIDITY AND MORTALITY WEEKLY REPORT第2页/共58页 爱滋病是一种有病毒引起的全身性传染病,其定义是血液中查到人类免疫缺陷病毒抗体或其他相关的病毒学指标,机体抵抗感染和疾病的免疫机能受到破坏，而发生的一系列相应症状HIV感染者的定义是血液呈HIV阳性而无症状的感染者。获得性免疫缺陷综合征(Acquired immuno-deficiency Syndrome,Acquired immuno-deficiency Syndrome,AIDS)AIDS)第3页/共58页1.发展
2、简史 1983年,法国巴斯德研究所分离到一种新的 逆转录病毒，命名为LAV。1984年美国国立 癌肿研究所分离出命名为HTLV-的病毒。同年，美国加州大学分离出AIDS相关病毒（AIDS Related Virus,ARV）.1986年，非洲西部发现了另一种病毒国际微生物学会及病毒分类学会统一命名为HIV。一）生物学特征第4页/共58页的结构与蛋白质功能的结构与蛋白质功能HIVHIV呈球形或卵形，直径为呈球形或卵形，直径为100-100-120nm120nm，双层结构。，双层结构。核心核心核心核心由两个由两个相同拷贝的相同拷贝的RNARNA及蛋白质、反转及蛋白质、反转录酶、核糖核酸酶及整合酶组
3、录酶、核糖核酸酶及整合酶组成，核心外为成，核心外为病毒衣壳病毒衣壳病毒衣壳病毒衣壳，2020面面体立体对称，有蛋白质体立体对称，有蛋白质（P17/P18P17/P18、P24/P25P24/P25）。最外）。最外层是层是膜蛋白膜蛋白膜蛋白膜蛋白。包膜上有刺突，。包膜上有刺突，含糖蛋白含糖蛋白gp120gp120，在双层脂质中，在双层脂质中有有 gp41gp41 。一）生物学特征第5页/共58页HIV病毒颗粒及其结构蛋白和其他毒粒蛋白第6页/共58页人类免疫缺陷病毒HIV第7页/共58页HIV基因编码的产物及其功能第8页/共58页HIV结构蛋白包括:核心蛋白(gag),包膜蛋白(env)聚合蛋白
4、(pol)。核心蛋白包括:P17位于核蛋白与壳层之间的基质上，包被于包膜蛋白的内部。P24和P15包被于内部核酸外围核衣壳主要为P 2 4。包膜蛋白为糖蛋白:gp160 是前体分子，在感染初 期 产 生，然 后 分 解 成 g p 1 2 0 和 g p 4 1。聚合酶蛋白包括:P66、P51和P31，聚合酶抗原位于病毒的核区内，与病毒核酸紧密相关。其功能为转录RNA为DNA；整合病毒DNA到宿主细胞的DNA上和切割前体分子使之成为有活性的小分子。HIV 的结构蛋白第9页/共58页HIV-1分为M、O、N三组，M组包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J共10个亚型，加上O、N型共12个亚型
5、。HIV-2至少有A、B、C、D、E、F 等6个亚型。3.HIV的病原特异性：第10页/共58页HIVHIV亚型ABCDEFGHIJOHIV2SIVAdapted from:J.Levy HIV and the Pathogenesis of AIDSHIV1第11页/共58页HIV-1 HIV-1 亚型全球分布B,a,c,d,f,oA,O,d,g,hB,a,d,e,oBBBBB,f,cB,eBCA,D,eC,a,dC,a,b,eC,E,bE,bB,e,cB,eB,a,c,d,g,hB,iUNAIDS Dec.1996非洲及亚洲部分地区有重组株病毒。第12页/共58页HIV的亚型特点有相对优势
6、亚型同一亚型差异很大亚型内的变异水平估算存在时间不同亚型传播途径和致病性不一不同亚型对抗-HIV药物引起耐药不同亚型重组第13页/共58页属于逆转录病毒，复制速度快可感染人体各种细胞，造成多器官损伤破坏具有调节免疫系统功能T4淋巴细胞在血液、淋巴液、精液、阴道分泌液和乳汁中其抗体无保护作用对外界抵抗力弱（低于乙肝病毒）人类免疫缺陷病毒第14页/共58页1.艾滋病成为全球第四大杀手，传染性疾病 的第一大杀手夺取了超过280万人的性命；2.截止2008年，15-49岁HIV患病人数已有4000万，其中40%是15-24岁的青年.(有120万儿童)3.亚洲人感染艾滋病的增长速度最快，尤其 是中国和印
7、度；4.HIV的研究仍跟不上其破坏的速度；5.治疗性控制是可以达到的。二）流行病学第15页/共58页全球爱滋病感染人数及感染途径 根据联合国爱滋病委员会和世界卫生组织统计，全球每年新感染爱滋病带毒者410万。(24h全球增加16000感染者)因HIV死亡的人数超过了280万,已超过了 肺结核(病死率200万)和疟疾(100万).第16页/共58页1.西方国家HAART的使用，患病率和病死率在下降，而发展中国家AIDS形势严峻；2.以注射吸毒和性传播(以异性间的传播为主)；3.不洁的血液采集;4.女性病例上升；母婴传播5.儿童病例增加（2个月2 重组或多肽 间接 42-45d3 重组+多肽 夹心
8、 22d4 抗原+抗体 夹心 16d(抗原5pg)5 基因扩增法，基因芯片 第32页/共58页HIV抗体筛查试剂：第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式两步法酶标法测试，可以用来检测HIV抗体I型，II型和O亚型。手工/自动化酶标仪检测，用血清/血浆样本。第33页/共58页Murex HIV-1.2.O.Murex HIV-1.2.O.夹心模式板底样本结合物抗原包被（1）辣根过氧化物酶标记抗原（2）模式：双抗原夹心法。第34页/共58页Murex HIV-1.2.O Murex HIV-1.2.O 抗原HIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-
9、2 envHIV-1 envHIV-1 p24 HIV-1 envPODPOD PODHIV-O HIV-OHIV-2多肽抗原重组抗原板结合物CD SDPODHIV-1 envHIV-1 p24HIV-1 p24P41/p36第35页/共58页前带/后带效应的机制两步冲洗法-可避免此效应低浓度的结合物高浓度的结合物第36页/共58页 HOOKHOOK效应的机制Ag 变构是二步夹心酶免出现钩状HOOK的原因被测抗原如具有多重决定族与亲和性高于包被抗体的酶标抗体发生交叉重叠结合，由于立体效应和互相挤压，Ag分子发生构象改变而从包被抗体上脱落，造成反应信号下降第37页/共58页2.POCT 在艾滋病
10、毒检测中的应用快速Determine HIV1/2 O抗体检测第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式可以用来检测可以用来检测HIVHIV抗体抗体I I型，型，II II型和型和OO亚型亚型。可用手指可用手指/静脉血，静脉血，1515分钟出结果，可用血清分钟出结果，可用血清/血浆血浆/全血样本结果可密封保存。全血样本结果可密封保存。第38页/共58页第39页/共58页第40页/共58页第41页/共58页快速试剂研制的背景就地检测（POCT）概念：急诊-手术，紧急输血，事故紧急检测。（医护人员和病人的保护）筛查概念：母婴筛查，就职，移民，性及吸毒犯罪人员体检等-简单易用。
11、日常检测：大，中，小型实验室，及极少量HIV样本实验室，偏远地区，实验室条件或设备不齐，外出检测-方便携带，使用。结果可保存。第42页/共58页 灵敏度排名及分数产品产品排名排名分数分数Genscreen HIV 1/2Genscreen HIV 1/21 1237237Murex HIV 1.2.OMurex HIV 1.2.O2 2235235Imx HIV Imx HIV III III3 3231231Ortho HIV 1/2Ortho HIV 1/23 3231231Abbott HIV Abbott HIV Beads Beads 4 4229229Murex 1/2Murex
12、1/25 5227227Organon Uni II.x5Organon Uni II.x5.214-225214-225Innotest HI 1/2Innotest HI 1/2LastLast178178第43页/共58页3.第四代试剂及抗原有关的试剂HIV 抗原/抗体联合试剂：Murex HIV Ag/Ab：第四代试剂大大提高灵敏度的筛查试剂，进一步缩短了 检测“窗口期”。RIA Delta HIV Ag/Ab：放免HIV抗原/抗体联合试剂。HIV抗原试剂：Murex HIV抗原单克隆试剂：临床上只用于HIV抗原检测以早期检测样本，或观察HIV 疾病进程。Murex HIV 抗原确认试
13、剂,确认抗原试剂阳性样本。第44页/共58页HIV 标记物 CDCgroup I CDCgroup II/III CDCgroup IVHIV Ag/RNAIgMIgG(env)IgG(p24)HIV Ag/RNA第一代第二代第三代第四代抗原补充第45页/共58页第46页/共58页第47页/共58页 4.HIV特殊试剂HIV 抗体WB确认试剂：为唯一一种经典和全球公认的抗体确认试剂，2.2版本包含有极早期血清转换片段，便于早期样本的确认。LCx HIV 核酸物质定性/定量分析：（LCR和PCR技术）用于HIV 病人遗传物质检测，可用于部分确认，和病人治疗监测。第48页/共58页结构蛋白HIV-
14、1HIV-2envgp160前体gp140gp120外部gp105/125gp41跨膜gp36/41polP66逆转录酶p68P51逆转录酶p53P31内切酶p31/34gagp55前体p56p24核心p26p17基质p16 Western Blot分析HIV 蛋白第49页/共58页 Western blot原理第50页/共58页第51页/共58页HIV病毒核酸分析和血清学免疫测定比较血清学免疫测定核酸分析感染后天数天血清HIV抗体核酸分析第52页/共58页 5.自身红细胞凝集试验原理双功能试剂：抗RBC,gp120简单，快速，微量，不需分离血清有假阳性第53页/共58页6.HIV亚型分析；H
15、IV变异的识别；7.细胞因子的测定；8.PCR追踪HIV自然感染史。HIV的实验诊断第54页/共58页世界爱滋病日1988年月将每年的月日定为世界爱滋病日，号召世界各国和国际组织在这一天举办相关活动，宣传和普及预防爱滋病的知识在加拿大举行的第16届国际爱滋病大会,美国前总统克林顿和微软公司比尔.盖茨 均出席会议.”时不我待”爱滋病会议永远 是政治会议.(探讨消除歧视,提高人权和全民享有医疗)第55页/共58页 结束语艾滋病问题的解决尚无固定的时间表,也不会有奇迹出现.必须准备与艾滋病长期共存.随着对HIV实验诊断试剂盒和新技术的不断进步,早期检测才有可能;如果没有PCR方法的建立不可能对HIV的基因结构有透彻的了解.为此,只有随着人类社会及科学的不断进展,通过无数人的努力艾滋病才可能被征服.第56页/共58页谢 谢第57页/共58页感谢您的观看！第58页/共58页