《HIV感染和-AIDS的实验诊断ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV感染和-AIDS的实验诊断ppt课件.ppt（58页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 HIV感染和感染和 AIDS的的实验诊断断1.HIV感染及AIDS的实验诊断2.揭开揭开AIDS历史的史的 第一第一页MMWRJUNE5,1981/VOL.30/NO.21MORBIDITYANDMORTALITYWEEKLYREPORT3.爱滋病是一种有病毒引起的全身性传染病,其定义是血液中查到人类免疫缺陷病毒抗体或其他相关的病毒学指标,机体抵抗感染和疾病的免疫机能受到破坏，而发生的一系列相应症状HIV感染者的定义是血液呈HIV阳性而无症状的感染者。获得性免疫缺陷得性免疫缺陷综合征合征(Acquired immuno-deficiency Syndrome,Acquired immuno-
2、deficiency Syndrome,AIDS)AIDS)4.1.发展展简史史1983年,法国巴斯德研究所分离到一种新的逆转录病毒，命名为LAV。1984年美国国立癌肿研究所分离出命名为HTLV-的病毒。同年，美国加州大学分离出AIDS相关病毒（AIDS Related Virus,ARV）.1986年，非洲西部发现了另一种病毒国际微生物学会及病毒分类学会统一命名为HIV。一）生物学特征5.2.HIV的结构与蛋白质功能HIV呈球形或卵形，直径为100-120nm，双层结构。核心核心由两个相同拷贝的RNA及蛋白质、反转录酶、核糖核酸酶及整合酶组成，核心外为病毒衣壳病毒衣壳，20面体立体对称，有
3、蛋白质（P17/P18、P24/P25）。最外层是膜蛋白膜蛋白。包膜上有刺突，含糖蛋白gp120，在双层脂质中有gp41。一）生物学特征生物学特征6.HIV病毒病毒颗粒及其粒及其结构蛋白和其他毒粒蛋白构蛋白和其他毒粒蛋白7.人类免疫缺陷病毒HIV8.HIV基因基因编码的的产物及其功能物及其功能9.HIV结构蛋白包括:核 心 蛋 白(gag),包 膜 蛋 白(env)聚合蛋白(pol)。核心蛋白 包 括:P17位于核蛋白与壳层之间的基质上，包被于包膜蛋白的内部。P24和P15包被于内部核酸外围核衣壳主要为P24。包膜蛋白 为糖蛋白:gp160是前体分子，在感染初期产生，然后分解成g p 1 2
4、0 和 g p 4 1。聚合酶蛋白包 括:P66、P51和P31，聚合酶抗原位于病毒的核区内，与病毒核酸紧密相关。其功能为转录RNA为DNA；整合病毒 DNA到宿主细胞的DNA上 和切 割 前 体 分 子 使 之 成为有 活 性 的 小 分 子。HIV的结构蛋白10.HIV-1分为M、O、N三组，M组包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J共10个亚型，加上O、N型共12个亚型。HIV-2至少有A、B、C、D、E、F等6个亚型。3.HIV的病原特异性的病原特异性：11.HIVHIV亚型型ABCDEFGHIJOHIV2SIVAdapted from:J.Levy HIV and the Pat
5、hogenesis of AIDSHIV112.HIV-1 亚型全球分布B,a,c,d,f,oA,O,d,g,hB,a,d,e,oBBBBB,f,cB,eBCA,D,eC,a,dC,a,b,eC,E,bE,bB,e,cB,eB,a,c,d,g,hB,iUNAIDS Dec.1996非洲及亚洲部分地区有重组株病毒。13.HIV的亚型特点有相对优势亚型同一亚型差异很大亚型内的变异水平估算存在时间不同亚型传播途径和致病性不一不同亚型对抗-HIV药物引起耐药不同亚型重组14.属于逆逆转录病毒病毒，复制速度快可感染人体各种细胞，造成多器官损伤破坏具有调节免疫系统功能T4淋巴淋巴细胞胞在血液、淋巴液、精液
6、、阴道分泌液和乳汁中其抗体无保护作用对外界抵抗力弱外界抵抗力弱（低于乙肝病毒）人人类免疫缺陷病毒免疫缺陷病毒15.1.艾滋病成为全球第四大杀手，传染性疾病的第一大第一大杀手手夺取了超过280万人的性命；2.截止2008年，15-49岁HIV患病人数已有4000万，其中40%是15-24岁的青年.(有120万儿童)3.亚洲人感染艾滋病的增长速度最快，尤其是中国中国和印度；4.HIV的研究仍跟不上其破坏的速度；5.治疗性控制是可以达到的。二）流行病学16.全球全球爱滋病感染人数及感染途径滋病感染人数及感染途径根据联合国爱滋病委员会和世界卫生组织统计，全球每年新感染爱滋病带毒者410万。(24h全球
7、增加16000感染者)因HIV死亡的人数超过了280万,已超过了肺结核(病死率200万)和疟疾(100万).17.1.西方国家HAART的使用，患病率和病死率在下降，而发展中国家AIDS形势严峻；2.以注射吸毒和性传播(以异性间的传播为主)；3.不洁的血液采集;4.女性病例上升；母母婴传播5.儿童病例增加（2个月2重组或多肽间接42-45d3重组+多肽夹心22d4抗原+抗体夹心16d(抗原5pg)5基因扩增法，基因芯片6-11.5d33.HIV抗体抗体筛查试剂l1.MurexHIV1.2.O：第三代抗体第三代抗体试剂的双抗原的双抗原夹心法模式心法模式两步法酶标法测试，可以用来检测HIV抗体I型
8、，II型和O亚型。手工/自动化酶标仪检测，用血清/血浆样本。34.Murex HIV-1.2.O.Murex HIV-1.2.O.夹心模式心模式板底样本结合物抗原包被（1）辣根过氧化物酶标记抗原（2）模式：双抗原夹心法。35.Murex HIV-1.2.O Murex HIV-1.2.O 抗原抗原HIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-2 envHIV-1 envHIV-1 p24 HIV-1 envPODPOD PODHIV-O HIV-OHIV-2多肽抗原重组抗原板结合物CD SDPODHIV-1 envHIV-1 p24HIV-1
9、 p24P41/p3636.前前带/后后带效效应的机制的机制两步冲洗法-可避免此效应低浓度的结合物高浓度的结合物37.HOOKHOOK效效应的机制的机制lAg变构是二步夹心酶免出现钩状HOOK的原因l被测抗原如具有多重决定族与亲和性高于包被抗体的酶标抗体发生交叉重叠结合，由于立体效应和互相挤压，Ag分子发生构象改变而从包被抗体上脱落，造成反应信号下降38.2.POCT 在艾滋病毒检测中的应用l快速DetermineHIV1/2O抗体检测第三代抗体第三代抗体试剂试剂的双抗原的双抗原夹夹心法模式心法模式可以用来可以用来检测检测HIVHIV抗体抗体抗体抗体I I型，型，型，型，IIII型和型和型和型
10、和OO亚亚型型型型。可用手指可用手指/静脉血，静脉血，1515分分钟钟出出结结果，可用血清果，可用血清/血血浆浆/全血全血样样本本结结果可密封保存。果可密封保存。39.40.41.42.快速试剂研制的背景l就地检测（POCT）概念：急急诊-手术，紧急输血，事故紧急检测。（医护人员和病人的保护）l筛查概念：母婴筛查，就职，移民，性及吸毒犯罪人员体检等-简单易用易用。l日常检测：大，中，小型实验室，及极少量HIV样本实验室，偏远地区，实验室条件或设备不齐，外出检测-方便携方便携带，使用。l结果可保存果可保存。43.灵敏度排名及分数灵敏度排名及分数产产品品排名排名分数分数Genscreen HIV
11、1/2Genscreen HIV 1/21 1237237Murex HIV 1.2.OMurex HIV 1.2.O2 2235235Imx HIV Imx HIV III III3 3231231Ortho HIV 1/2Ortho HIV 1/23 3231231Abbott HIV Abbott HIV Beads Beads 4 4229229Murex 1/2Murex 1/25 5227227Organon Uni II.x5Organon Uni II.x5.214-225214-225Innotest HI 1/2Innotest HI 1/2LastLast17817844
12、.3.第四代第四代试剂及抗原有关的及抗原有关的试剂HIV 抗原抗原/抗体抗体联合合试剂：lMurexHIVAg/Ab：第四代试剂大大提高灵敏度的筛查试剂，进一步缩短了检测“窗口期”。lRIADeltaHIVAg/Ab：放免HIV抗原/抗体联合试剂。HIV抗原抗原试剂：lMurexHIV抗原单克隆试剂：临床上只用于HIV抗原检测以早期检测样本，或观察HIV疾病进程。lMurexHIV抗原确认试剂,确认抗原试剂阳性样本。45.HIV 标记物物 CDCgroup I CDCgroup II/III CDCgroup IVHIV Ag/RNAIgMIgG(env)IgG(p24)HIV Ag/RNA第
13、一代第二代第三代第四代抗原补充46.47.48.4.HIV特殊特殊试剂lHIV 抗体抗体WB确确认试剂：为唯一一种经典和全球公认的抗体确认试剂，2.2版本包含有极早期血清转换片段，便于早期样本的确认。lLCx HIV 核酸物核酸物质定性定性/定量分析定量分析：（LCR和和PCR技技术）用于HIV病人遗传物质检测，可用于部分确认，和病人治疗监测。49.结构蛋白HIV-1HIV-2envgp160前体gp140gp120外部gp105/125gp41跨膜gp36/41polP66逆转录酶p68P51逆转录酶p53P31内切酶p31/34gagp55前体p56p24核心p26p17基质p16 Wes
14、tern Blot分析分析HIV 蛋白蛋白50.Western blot原理51.52.HIV病毒核酸分析和血清学免疫病毒核酸分析和血清学免疫测定比定比较血清学免疫测定核酸分析感染后天数天血清HIV抗体核酸分析53.5.自身红细胞凝集试验原理l双功能试剂：抗RBC,gp120l简单，快速，微量，不需分离血清l有假阳性54.6.HIV亚型分析；型分析；HIV变异的识别；7.细胞因子的测定；8.PCR追踪HIV自然感染史。HIV的的实验诊断断55.世界世界爱滋病日l1988年月将每年的月日定为世界爱滋病日，号召世界各国和国际组织在这一天举办相关活动，宣传和普及预防爱滋病的知识l在加拿大举行的第16届国际爱滋病大会,美国前总统克林顿和微软公司比尔.盖茨均出席会议.”时不我待”爱滋病会议永远是政治会议.(探讨消除歧视,提高人权和全民享有医疗)56.结束语艾滋病问题的解决尚无固定的时间表,也不会有奇迹出现.必须准备与艾滋病长期共存.随着对HIV实验诊断试剂盒和新技术的不断进步,早期早期检测才有可能;如果没有PCR方法的建立不可能对HIV的基因基因结构构有透彻的了解.为此,只有随着人类社会及科学的不断进展,通过无数人的努力艾滋病才可能被征服.57.谢 谢58.