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1、实验二与的化学显色反应第1页，共14页，编辑于2022年，星期五作业：作业：1、说明、说明DNA和和RNA的亚细胞定位在哪里的亚细胞定位在哪里?为什为什么？么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用第2页，共14页，编辑于2022年，星期五实验原理实验原理Unna染色法染色法n 主要成分：甲基绿主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料（派洛宁混合染料（碱性染料碱性染料）n原理：核酸是原理：核酸是酸性酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是但是DNA和和 RNA对对甲基
2、绿甲基绿-派洛宁派洛宁混合染料的亲和力不混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来第3页，共14页，编辑于2022年，星期五“样品的固定样品的固定”王金发王金发 书书 p37目的：目的：迅速迅速杀死细胞杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在后面，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处理、切片时不被破坏。的处理、切片时不被破坏。固定使得固定使得细胞大分子交联而保持在一定位置上细胞大分子交联而保
3、持在一定位置上，不至于在后面的染色等不至于在后面的染色等处理过程处理过程中移位或丢失而产生中移位或丢失而产生人工假象人工假象。常用的固定液：常用的固定液：(醛类醛类：甲醛、戊二醛：甲醛、戊二醛)第4页，共14页，编辑于2022年，星期五Unna染色法实验步骤撕取洋葱内表皮撕取洋葱内表皮 小离心管小离心管CarnoyCarnoy固定剂固定剂 15 min15 min95%95%酒精复水酒精复水5 min5 min 70%70%酒精复水酒精复水5 min5 min H H2 2O 5min O 5min 小离心管小离心管 表面皿中实验组表面皿中实验组 对照组对照组 5%5%三氯乙酸三氯乙酸（TCA
4、TCA）9090保温保温,15min,15min H H2 2O 5minO 5min Unna Unna 染液染液 20min(20min(室温室温)H2O漂洗几秒后漂洗几秒后 丙酮丙酮 分色分色6-10Sec6-10Sec H H2 2O O洗片刻洗片刻 水压片分别镜检观察水压片分别镜检观察Unna 法法第5页，共14页，编辑于2022年，星期五背景知识背景知识n核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：胞核内存在有两种核酸：DNA和和RNA，它们具有类似的，它们具有类似的化学组成，即均由化学组成，即均由含氮碱
5、基含氮碱基，戊糖戊糖和和磷酸磷酸组成，可表示组成，可表示如下如下:磷酸磷酸 核糖（核糖（RNA）核酸核酸 核苷酸核苷酸 戊糖戊糖 脱氧核糖（脱氧核糖（DNA）核苷核苷 A、G、C、U (RNA)碱基（嘌呤碱基（嘌呤/嘧啶）嘧啶）A、G、C、T（DNA）第6页，共14页，编辑于2022年，星期五nDNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋结构。螺旋结构。nRNA是单链线形，主要有三种类型是单链线形，主要有三种类型:核糖体核糖体RNA(rRNA)转运转运RNA（tRNA)信使信使RNA（mRNA)rRNA含量大，占细胞含量大，占细胞RNA总量的总量的80左右，左
6、右，是核糖体的重要是核糖体的重要组成部分，而组成部分，而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在都是在核仁核仁中进行的。中进行的。tRNA约占全部约占全部RNA的的15，它在蛋白质生物合成过程中具有转运，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。氨基酸的作用。mRNA的含量最少，只占的含量最少，只占5左右，它是以左右，它是以DNA为模板合成的，为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。它又是蛋白质合成的模板。第7页，共14页，编辑于2022年，星期五 rRNA基因的转录基因的转录 快速生长的哺乳动物细胞中快速生长的哺乳动物细胞中(培养的培养的Hela细胞细
7、胞),转转录生成的录生成的RNA总量的总量的80%-rRNA;15%-tRNA;编码编码蛋白质的蛋白质的mRNA量少量少 处于生长中的高等真核细胞一般需处于生长中的高等真核细胞一般需107核糖体核糖体以确保蛋白质的合成以确保蛋白质的合成,so真核细胞中有关编码真核细胞中有关编码核核糖体基因糖体基因(ribosomal gene)会在染色体的会在染色体的核仁核仁区以区以100-5000个重复个重复copy串联成中度重复序列串联成中度重复序列,成簇分成簇分布在少数布在少数特定染色体特定染色体的核仁区。的核仁区。第8页，共14页，编辑于2022年，星期五The general structure o
8、f ribosomes in prokaryotes and eukaryotesrNTs:number of ribonucleotides 第9页，共14页，编辑于2022年，星期五The macromolecular composition of a mammalian ribosome第10页，共14页，编辑于2022年，星期五Structure of T.thermophilus 70S ribosome as determined by x-ray crystallographySmall ribosomal proteins,dark gray;Large ribosomal p
9、roteins,light gray第11页，共14页，编辑于2022年，星期五 Light micrograph of an isolated nucleus from a Xenopus ootyte stained to reveal the hundreds of nucleoli.核仁核仁第12页，共14页，编辑于2022年，星期五纤维中心纤维中心(FC)：位于：位于核仁中央，低电子密度、核仁中央，低电子密度、染色浅，染色浅，rRNA基因的储基因的储存位点存位点。稠密区稠密区(DFC)：电子密度：电子密度最高，由致密的纤维构成，最高，由致密的纤维构成，一般见不到颗粒；一般见不到颗粒；
10、含正在含正在转录的转录的RNA分子分子。颗粒区颗粒区(GC)：位于周边，直径为位于周边，直径为15-20nm的的核糖核蛋白颗粒核糖核蛋白颗粒(RNP)-代表代表已合成的核糖已合成的核糖体亚单位前体体亚单位前体颗粒。颗粒。A section of part of a nucleus with a nucleolus第13页，共14页，编辑于2022年，星期五 核仁核仁(nucleolus)重要功能重要功能 rRNA合成加工合成加工nrRNA基因转录基因转录nrRNA前体的加工前体的加工核糖体大小亚单位各自的装配核糖体大小亚单位各自的装配rRNA是核糖体的重要组成部分是核糖体的重要组成部分,而而rRNA的合的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁核仁中进行的。中进行的。第14页，共14页，编辑于2022年，星期五