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1、实验分组（4040人）俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。按从前到后从左到右顺序，编为15，610。两个小组编为一个大组：1+2,4+5,6+7,9+10,3+8。甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 讲 台左右第1页/共20页食品卫生微生物学检验一实验准备培养基制备高压蒸汽灭菌器材预算刻度吸管的无菌操作方法第2页/共20页培养基的制备培养基的制备（40人份）组号培养基称量g水量ml瓶数 分装量ml1+2+3+4乳糖胆盐发酵培养基8.752504瓶105营养琼脂
2、51308瓶6氯化钠22259瓶6氯化钠0.91009瓶7、8伊红美蓝10.83003瓶7、8EC肉汤7.42001瓶5加热时常摇动，煮至完全溶解分装于带有倒放小倒管的试管中试管筐内罩上硫酸纸、牛皮纸，扎好高压蒸汽灭菌15分钟第3页/共20页 1500W1500W电炉安全警告1.1.电源插塞与电炉插孔接触良好插头插入插座。2.2.如果培养基潽了，流入电炉；必须立即切断电源、拔除插头；以免触电，危及生命！东西两侧边台各一个电炉，每个电炉可同时放置3 3个500ml500ml锥形瓶进行加热。第4页/共20页 培养基隔石棉网煮沸，使完全溶解。加热时,常摇动。沸腾时，不能摇动！第5页/共20页 称量纸
3、置于左盘，游码移至标尺左端“0”0”点位置上，指针应对准中线，取得平衡。否则将杠杆两端的调整螺母旋动调节平衡。秤物时“左物右码”，砝码在右盘，物品在左盘上，尽可能放在秤盘中心。天平保持干燥、清洁。用过的药勺要清洗干净。第6页/共20页标准的分类根据适用范围分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准四级。根据法律的约束性分为强制性标准和推荐性标准。标准号:代号+序号+年份组成 GB/T 4789.2-2003代号GB表示国家标准，T指推荐性标准。序号4789指食品卫生微生物学检验，点2指该检验的第二部分（菌落总数测定）。2003是指该标准制定或修改的年份。第7页/共20页食品卫生标准中的微生物指
4、标指示菌概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检样卫生状况及安全性的指示性微生物。项目：菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌群、总大肠菌群。食源性致病菌及其毒素沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌等。霉菌、酵母菌及其毒素黄曲霉毒素B1、B2等。第8页/共20页菌落总数菌落总数是指被检样品的单位重量(g)、容积(ml)、表面积(cm2)或体积(m3)内，所含有的能在某种固体培养基上,经一定条件、一定时间培养后长出的菌落数量。包括细菌、霉菌和酵母菌的菌落总数。菌落总数所用培养基、培养温度
5、、培养时间的差异会影响到菌落计数的结果。因此，必须严格遵照国家规定的检验方法中的操作条件，以获得始终可比的结果。菌落总数的食品卫生意义：判定检样被微生物污染的程度，预测食品存放的期限。第9页/共20页大肠菌群大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，是评价食品卫生质量的重要指标之一。大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属等四个属的细菌。大肠菌群是作为粪便污染指示菌提出
6、来的，该菌群的检出，可推测检样中存在着肠道致病菌污染的可能性。大肠菌群的食品卫生意义：作为粪便污染食品的指示菌，作为肠道致病菌污染食品的指示菌。第10页/共20页大肠菌群大肠菌群属代表种致病性埃希菌属(Escherichia）大肠埃希菌(E.coli)肠道外感染，急性腹泻。枸橼酸杆菌属(Citrobacter)弗劳地枸橼酸杆菌(C.freundii)条件致病菌，引起继发性感染。克雷伯菌属(Klebsiella)肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)肺炎，泌尿系、创伤感染、败血症等。肠杆菌属(Enterobacter)产气杆菌(E.aerogenes)很少引起原发性感染。第11页/共20页实验
7、预算编写实验预算必须仔细阅读操作步骤，确认器材。例如：P10 7.操作步骤 7.1.1“以无菌操作将检样25g(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内。”取“25ml”联想到10ml无菌刻度吸管和洗牙球，无菌吸管应该怎样包装灭菌？“剪碎”固体样品需要无菌剪刀，如果是液体检品则不需要。“225ml灭菌生理盐水”，应该装在250ml的盐水瓶里，怎样配制生理盐水？需要什么物品和器材？考虑问题应该周到，设备、材料准备齐全，确保实验顺利进行。第12页/共20页器材准备1.冰箱：042.恒温培养箱：35373.恒温水浴箱：45474.灭菌1ml刻度吸管：3支10组2倍5.灭菌10
8、ml刻度吸管：2支10组2倍6.灭菌90mm平皿：7个10组2倍7.灭菌70mm平皿：4个210组2倍8.灭菌中试管：2支10组2倍第13页/共20页培养基预算乳糖发酵管：微量乳糖发酵管（已购买）乳糖胆盐发酵管（见P2054.9)：10ml10支10组120 300ml4瓶分装100支（倒放小倒管）单独灭菌（115）以下培养基121(0.12MPa)15分钟营养琼脂培养基：（15ml7个平皿=105ml 120 130ml）130ml10组120（12瓶）0.85%生理盐水：225ml1瓶10组120（12瓶）0.85%生理盐水：100ml1瓶10组120（12瓶）伊红美蓝平板：42块10组1
9、20（300 ml3瓶）EC肉汤(见P2064.11)：5ml 4支10组120 250ml1瓶 分装50支（倒放小倒管）(Escherichia coli Broth,简称 EC Broth)第14页/共20页刻度吸管的无菌操作方法吸球的选择：无菌操作时，一般不使用洗耳球。5毫升和10毫升刻度吸管用洗牙球，1毫升刻度吸管套用合适的小吸球。无菌操作方法：左手手指捏住吸管头包装纸套约5厘米处，右手向前旋松纸套、撕断包装纸头，如果吸管头部外测有棉花絮，应该烧掉，然后套上吸球，以免连接部位漏气。此时，包装纸套出口处已经污染。应把包装纸反向拉开，折出一个无菌倾斜出口，退出吸管，管尖呈3040度角离开无
10、菌包装纸套。吸球的按压程度，以按压松开以后，能吸取110的液体为宜。这个按压程度，很容易控制吸管中液体，移液过程中，也不会因为失控，对吸球过度加压或减压，液体就不会外流，空气也不容易进入吸管内，这样可以把污染降到最低程度。第15页/共20页刻度吸管的准备 吸管头塞脱脂棉11.5厘米，松紧合适，太松不能有效过滤微生物，太紧阻力大，影响吸取标本。将大版报纸纵向裁成1/2和1/6版大小的纸条(长54cm，宽 20cm 和6.5cm）。用宽6.5cm的纸条包吸管，纸条与吸管呈30度角，从管尖部分开始包（不得从吸管头包起），纸条包住吸管向前转动几圈，将吸管尖退入纸筒内约34 厘米，把纸筒起始端压平，打折
11、180度（折34 厘米长、纸筒壁厚度约三层纸，不容易被管尖扎破），转动并压住起始端打折部分，继续转动。转动时，右手将纸条向前推平，左手将吸管向后拉紧，同时向前转动，吸管就能够包得很紧。纸筒形成以后，把末端空心纸筒压平固定，打折，系牢，多余的纸撕掉。每10支用1/2版（宽 20cm）的报纸包成1包。高压蒸汽灭菌，烤干备用。第16页/共20页实验室人员基本要求 GB4789.1GB4789.1检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证自身安全。有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的实验。第17页/共20页常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。试管架上器材：靠近插座一侧第1 1和第2 2列分别放置接种针和接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。第18页/共20页实验室器材 整齐有序第19页/共20页感谢您的观看！第20页/共20页