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1、发酵工程实验指导发酵工程实验指导第1页，此课件共17页哦2乳酸菌的功能与应用价值乳酸菌的功能与应用价值抗菌，防腐，抗氧化，微生态（益生菌等）发酵保健食品（酸奶）；发酵代谢产物：有机酸，胞外多糖，抗菌肽，等；果蔬发酵（酸菜等）；环境废物转化，环境保护；等。乳酸菌的应用乳酸菌的功能第2页，此课件共17页哦3发酵工程的研究内容构成发酵工程的研究内容构成 工业微生物（生产菌株）的分离与筛选；菌株改造（菌种选育）培养基制备技术；发酵过程控制与优化；产物的分离与纯化第3页，此课件共17页哦4第一部分：乳酸菌的分离、筛选与保藏第一部分：乳酸菌的分离、筛选与保藏第二部分：乳酸菌的培养与发酵测定第二部分：乳酸菌
2、的培养与发酵测定附上：实验原始记录附上：实验原始记录 实验一：实验准备实验一：实验准备 实验二：乳酸菌的分离与筛选实验二：乳酸菌的分离与筛选 实验三：菌种培养与保藏实验三：菌种培养与保藏 实验四：乳酸菌的发酵培养实验四：乳酸菌的发酵培养 实验五：乳酸菌发酵测定与产物分析实验五：乳酸菌发酵测定与产物分析一、实验目的与意义及原理等一、实验目的与意义及原理等二、材料与方法（或步骤）二、材料与方法（或步骤）三、结果与分析三、结果与分析问题回答问题回答实验报告撰写基本格式实验报告撰写基本格式撰写完成实验报告（上交材料）撰写完成实验报告（上交材料）实验内容设计实验内容设计第4页，此课件共17页哦5实验二时
3、间安排周XX培养基制备；分离：划线分离；稀释分离选菌落，接入斜面培养基（标记），培养；保存第5页，此课件共17页哦6实验乳酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定产酸变化注意点：新保存的菌株可直接接种，不必再活化。菌种移接至发酵三角瓶，培养(E2)（细胞生物量g/L：离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH变化：酸度计）发酵产物乳酸定性分析(E3)（薄层层析法）总实验流程总实验流程采样分离(E1)乳酸菌菌株第6页，此课件共17页哦7实验一：培养基制备与器材准备实验一：培养基制备与器材准备每组内容每人倒1个平板用于划线分离做一套稀释倒平板，1个稀释度倒平板1个斜面培养基每人1支，第一部分第一部分MRS培养
4、基200ML，营养琼脂30ML，无菌水试管4支（9ML），无菌移液管5支（1ML），注意：碳酸钙按比例混合（MRS培养基200ML加5克）；培养基可几个组合并配制。发酵模块：共6个组，每3个组配600ML，营养琼脂一个班配1瓶。第7页，此课件共17页哦8分离得到的乳酸菌菌株（编号）菌落观察生理生化特性（略）形态鉴定（略）采样稀释倒平板编号，斜面培养与保存（通过产酸特性直接鉴定）实验二：乳酸菌的分离与培养实验二：乳酸菌的分离与培养第一部分第一部分第8页，此课件共17页哦9实验三实验三 乳酸菌菌种的培养与保藏乳酸菌菌种的培养与保藏分离得到的乳酸菌菌株（编号）斜面移接与培养(每一株）1株保藏1株待以
5、下实验用注意点：注明菌种编号与日期；如Lcd131,Lcd132；（例：陈丹，第一组第3位同学）第一阶段结束，总结安排一周完成第9页，此课件共17页哦10时间安排 （制药班级，21人）周三培养基制备；分离：划线分离；稀释分离周五选菌落，接入斜面培养基（标记），培养；配制发酵培养基；（每个菌株接种2瓶平行实验）下周一下周三接种发酵培养基（标记），每个菌株接种2瓶。开始记录时间。（16至24h内检测一次）发酵结束，样品检测，乳酸薄层层析法测定。（周二）（周四）（周四）第10页，此课件共17页哦11实验乳酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定（自选）产酸变化注意点：新保存的菌株可直接接种，不必再活化。实验
6、四实验四 乳酸菌培养与发酵测定乳酸菌培养与发酵测定菌种移接至发酵三角瓶，培养（细胞生物量g/L：离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH变化：酸度计）发酵产物乳酸定性分析（E3）（薄层层析法）总实验流程总实验流程第二部分第二部分第11页，此课件共17页哦12发酵培养基的配制发酵培养基的配制接种3环培养瓶包扎方法说明说明第12页，此课件共17页哦13细胞生长的测定细胞生长的测定细胞湿密度细胞湿密度：单位体积：单位体积(ml)发酵液菌体的重量发酵液菌体的重量g（湿重）（湿重）;方法：取一定量方法：取一定量(ml)发酵液，经离心去除上清液，菌体称发酵液，经离心去除上清液，菌体称重。重。细胞浓度：细胞浓
7、度：单位体积单位体积(ml)活细胞数活细胞数(cfu)，单位，单位:cfu/ml 方法：取一定量方法：取一定量(ml)发酵液，经适当稀释后。倒平板培养计发酵液，经适当稀释后。倒平板培养计数，再由菌落数与稀释倍数的积。数，再由菌落数与稀释倍数的积。光密度（光密度（OD）：）：反映细胞的混浊度；反映细胞的混浊度；方法：由分光光度计在一定波长下测定吸光值。方法：由分光光度计在一定波长下测定吸光值。第13页，此课件共17页哦14分析结束以后每一组清洗各自的分析结束以后每一组清洗各自的实验物品，包括斜面菌种等。实验物品，包括斜面菌种等。请同学注意：请同学注意：发酵液预处理可直接取发酵清液，调发酵液预处理
8、可直接取发酵清液，调pH至至3左右左右因培养结束；因培养结束；最后一次分析检测不用无菌操作！最后一次分析检测不用无菌操作！第14页，此课件共17页哦15实验五实验五 乳酸菌发酵产物（乳酸）的定性分析乳酸菌发酵产物（乳酸）的定性分析 -薄层层析法薄层层析法方法流程方法流程1.发酵液预处理可直接取发酵上清液，调发酵液预处理可直接取发酵上清液，调pH至至3，另用自然，另用自然pH做对照；做对照；2.划线及点样时，不可将薄层刺破，点样斑点直径不超过划线及点样时，不可将薄层刺破，点样斑点直径不超过2mm，重复，重复点样时要在同一位置。每次点样后适当吹干。点样时要在同一位置。每次点样后适当吹干。3.显色时
9、，注意喷雾均匀。显色时，注意喷雾均匀。4.实验数据处理：记录显色点与点样点间的距离。实验数据处理：记录显色点与点样点间的距离。发酵液预处理展开系统饱和点样展开显色操作注意事项操作注意事项记录计算，等第15页，此课件共17页哦16展层溶剂：展层溶剂：正丁醇：甲酸：水=80：15：5（V/V/V）；展开系统的饱和：展开系统的饱和：预先取适量配制好的展开剂注入层析缸一边，将已点样的的薄板也放入层析缸的另一边，密闭层析缸1520min，使展开液蒸汽饱和层析系统 展开：将展开：将薄板移至有适量展开液的层析缸一边展开；显色：显色：3%的溴甲酚绿酒精溶液喷雾，再用热风吹干，注意：显色显色液喷雾要足够。显色时
10、间要充分。显色时间要充分。1、描述分离效果（作图或照片显示）；2、计算Rf值；3、分析实验结果及误差原因。（请记录以下（请记录以下3个问题）个问题）四、实验结果与讨论具体操作步骤按照实验指导书具体操作步骤按照实验指导书实验报告内容格式参照下页；报告统一提交时间：实验报告内容格式参照下页；报告统一提交时间：13周周-周四周四第16页，此课件共17页哦171菌种分离初筛结果菌种分离初筛结果表1 样品A乳酸菌分离初筛菌落描述序号编号色泽形态边缘大小产酸特性好氧特性其它1L912L92结果与分析结果与分析材料与方法（或步骤）材料与方法（或步骤）1.样品：分离样品采自。样品：分离样品采自。第17页，此课件共17页哦