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1、分子实验技术1 1第1页，此课件共42页哦第一节、重组第一节、重组DNADNA技术技术-基因工程基因工程 第二节、分子杂交及相关技术第二节、分子杂交及相关技术第三节、聚合酶链反应的原理和应用第三节、聚合酶链反应的原理和应用第四节、基因定位的常用方法第四节、基因定位的常用方法2 2第2页，此课件共42页哦分子生物学技术l l7070年代以来年代以来,分子生物学技术迅速发展起分子生物学技术迅速发展起来来,使人们有可能进行人类基因组及单个使人们有可能进行人类基因组及单个基因的结构研究基因的结构研究,分析其功能特征分析其功能特征,了解其了解其变化规律。分子生物学技术为揭示人类遗变化规律。分子生物学技术
2、为揭示人类遗传病的本质起着重要作用。下面就一些分传病的本质起着重要作用。下面就一些分子生物学技术予以介绍。子生物学技术予以介绍。3 3第3页，此课件共42页哦194619501955196019651970197519801985199019951944DNA是遗传物质1949Hbs贫血1953双螺旋1956HbsGlu-Val1966遗传密码第一个R酶1972重组质粒1975DNA杂交1977DNA测序1981转G小鼠1983HD病G定位1985PCR1986位置克隆1987G剔除小鼠1989位置克隆1990第一个基因治疗1995细菌G组序列1996酵母基因组序列现代分子遗传学发展现代分子遗
3、传学发展重要事件重要事件4 4第4页，此课件共42页哦第一节第一节 重组重组DNADNA技术技术-基因工程基因工程l l重组重组DNADNA技术是现代分子生物技术发展中最重技术是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一。即是基因工程要的成就之一。即是基因工程(Gene(Gene Engineering)Engineering)的核心技术。的核心技术。l l重组重组DNADNA技术（技术（Recombinant DNA Recombinant DNA TechniqueTechnique）是人类根据需要选择目的基因是人类根据需要选择目的基因（DNADNA片段）在体外与基因运载体重组，转移片段）在体
4、外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的。新的物种和治疗人类疾病的目的。l l这一技术的发展和应用，关键在于限制酶的这一技术的发展和应用，关键在于限制酶的发现和应用。发现和应用。5 5第5页，此课件共42页哦 一、限制酶一、限制酶l l限制性内切核酸酶限制性内切核酸酶(restrictive(restrictive endonucleases)endonucleases)，又称限制酶。是特异性地，又称限制酶。是特异性地切断切断DNADNA链中磷酸二酯键的核酸酶（链中磷酸二酯键的核酸酶（“分子手分子手术刀术刀
5、”）。）。l l发现于原核生物体内，现已分离出发现于原核生物体内，现已分离出100100多种，多种，几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNADNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。技术和基因诊断中重要的一类工具酶。6 6第6页，此课件共42页哦1 1、限制酶的命名、限制酶的命名l l根据其来源命名。如：根据其来源命名。如：属名属名 菌株名菌株名 E co R I 种名种名 编号编号l lEcoRIEcoRI来源于大肠杆菌来源于大肠杆菌E.coliE.coli的的RY13RY13菌株菌株,I,I指在该菌株中分离的第一个限制酶。指在该菌株中分离的第一个限制
6、酶。7 7第7页，此课件共42页哦2 2、限制酶识别序列和切割形成、限制酶识别序列和切割形成l l 每种限制酶能识别和切割的通常每种限制酶能识别和切割的通常每种限制酶能识别和切割的通常每种限制酶能识别和切割的通常4 48 8个核苷酸序列，个核苷酸序列，个核苷酸序列，个核苷酸序列，称为限制性位点或切点。称为限制性位点或切点。称为限制性位点或切点。称为限制性位点或切点。如：如：如：如：Hare 5Hare 5-GGCC-3-GGCC-3 Bam HI 5Bam HI 5Bam HI 5Bam HI 5-GGATCC-3-GGATCC-3-GGATCC-3-GGATCC-3 平末端平末端平末端平末端
7、(blunt end)(blunt end)对称轴切，连接效果差对称轴切，连接效果差 切割形成切割形成切割形成切割形成 粘性末端（粘性末端（粘性末端（粘性末端（sticky endsticky endsticky endsticky end）交错切。）交错切。）交错切。）交错切。8 8第8页，此课件共42页哦9 9第9页，此课件共42页哦部分常用限制酶及切点1010第10页，此课件共42页哦互补末端连接1111第11页，此课件共42页哦产生相同序列的突出末端的不同片段产生相同序列的突出末端的不同片段可有三种方式：可有三种方式：l1)1)用同一种限制酶切割；用同一种限制酶切割；l l2)2)用识
8、别相同靶序列的不同限制酶切割；用识别相同靶序列的不同限制酶切割；l l3)3)用识别不同靶序列但可产生一致的粘性用识别不同靶序列但可产生一致的粘性末端的限制酶切割。末端的限制酶切割。1212第12页，此课件共42页哦3 3、特点：、特点：l l根据上述限制酶的特点，在基因工程和基因诊断中的重要根据上述限制酶的特点，在基因工程和基因诊断中的重要根据上述限制酶的特点，在基因工程和基因诊断中的重要根据上述限制酶的特点，在基因工程和基因诊断中的重要用途：用途：用途：用途：l l1)1)1)1)不论不论不论不论DNADNADNADNA的来源如何，同一种限制酶切割后产生的的来源如何，同一种限制酶切割后产生
9、的的来源如何，同一种限制酶切割后产生的的来源如何，同一种限制酶切割后产生的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属的DNADNADNADNA重重组。如人和质粒组。如人和质粒DNADNADNADNA等。等。等。等。l l2)2)用于人类基因组的用于人类基因组的用于人类基因组的用于人类基因组的DNADNADNADNA分析，具特定的酶切位点。分析，具特定的酶切位点。l l3)Gene3)Gene3)Gene3)Gene突变改变酶切位点的消失或新产生将改变酶切突变改变酶切位点的消失或新
10、产生将改变酶切突变改变酶切位点的消失或新产生将改变酶切突变改变酶切位点的消失或新产生将改变酶切片段长度。应用于限制性片段多态性分析。片段长度。应用于限制性片段多态性分析。片段长度。应用于限制性片段多态性分析。片段长度。应用于限制性片段多态性分析。1313第13页，此课件共42页哦二、基因运载体及其选择二、基因运载体及其选择l l载体（载体（VectorVector）:将外源目的将外源目的DNADNA导入受体细导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。胞，并能自我复制和增殖的工具。1414第14页，此课件共42页哦l l载体具以下特征载体具以下特征：l l1)1)分子量小，便于携带较大的分子量小，
11、便于携带较大的DNADNA片段，能进片段，能进入宿主细胞并在其中增殖；入宿主细胞并在其中增殖；l l2)2)有多种限制酶切点，每种限制酶最好只有有多种限制酶切点，每种限制酶最好只有单一切点；单一切点；l l3)3)被切割后的载体，插入外源被切割后的载体，插入外源DNADNA后，不影响后，不影响其复制能力，并有可选择的标记基因（如，其复制能力，并有可选择的标记基因（如，抗药基因）。抗药基因）。l l常用的载体有常用的载体有：质粒，：质粒，噬菌体，粘粒，噬菌体，粘粒，BACBAC，YACYAC，PIPI等。等。1515第15页，此课件共42页哦（一）（一）.质粒质粒plasmidplasmid P
12、lasmid Plasmid 独立于细菌染色体外的双链环独立于细菌染色体外的双链环独立于细菌染色体外的双链环独立于细菌染色体外的双链环DNADNADNADNA分子。分子。分子。分子。PBR322PBR322 大肠杆菌大肠杆菌 pSC101pSC101pSC101pSC101 Plasmid chromosomePlasmid chromosome COIEICOIEICOIEICOIEI plasmid plasmid 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌 pc194pc194pc194pc194 scp12scp12scp12scp12 真核生物真核生物-酵母质粒酵母质粒酵母质粒
13、酵母质粒 1616第16页，此课件共42页哦常用的质粒如常用的质粒如常用的质粒如常用的质粒如pUC19pUC19pUC19pUC19，多连接子，多连接子，多连接子，多连接子MCSMCSMCSMCS。插入外源基因片段长度约。插入外源基因片段长度约。插入外源基因片段长度约。插入外源基因片段长度约10kb10kb10kb10kb。将外源基因插入到将外源基因插入到将外源基因插入到将外源基因插入到MCSMCSMCSMCS中，随质粒的表达而表达，增殖而扩增。外源中，随质粒的表达而表达，增殖而扩增。外源中，随质粒的表达而表达，增殖而扩增。外源中，随质粒的表达而表达，增殖而扩增。外源基因插入到基因插入到基因插
14、入到基因插入到MCSMCSMCSMCS后，后，后，后，-半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色-白色菌白色菌白色菌白色菌落。如果不插入外源基因，则产生兰色。从而筛选阳性菌落。落。如果不插入外源基因，则产生兰色。从而筛选阳性菌落。落。如果不插入外源基因，则产生兰色。从而筛选阳性菌落。落。如果不插入外源基因，则产生兰色。从而筛选阳性菌落。EcoRIHindIIIOriOri复制起复制起点点LacZAPRpUC191717第17页，此课件共42页哦（二）（二）.-.-噬菌体噬菌体(phage)(phage)l l是一种
15、可在体外包装的细菌病毒是一种可在体外包装的细菌病毒,可高效感染可高效感染大肠杆菌大肠杆菌.-.-噬菌体噬菌体DNADNA是线状双链是线状双链DNADNA分子分子,全长约全长约50kb,50kb,每条链各带每条链各带12bp12bp长的单链互补末长的单链互补末端端-粘末端粘末端(COS(COS序列序列)。进入宿主细胞后不久，。进入宿主细胞后不久，COSCOS序列碱基配对环化。序列碱基配对环化。l l改建后的改建后的噬菌体发展了多种较大型的克隆噬菌体发展了多种较大型的克隆载体，如：载体，如：1818第18页，此课件共42页哦l l1 1、置换、置换载体载体 溶解途径溶解途径 载体和外源载体和外源D
16、NADNA整合到宿主菌整合到宿主菌DNADNA中。中。可克隆可克隆23kb23kb的外源的外源DNADNA。l l2 2、插入、插入载体载体 裂解途径裂解途径 DNADNA在宿主细胞中复制，然后包装成在宿主细胞中复制，然后包装成噬菌体，裂解宿主，释放噬菌体。可噬菌体，裂解宿主，释放噬菌体。可克隆克隆5kb5kb的的cDNAcDNA。1919第19页，此课件共42页哦裂裂解解途途径径2020第20页，此课件共42页哦（三）三）.粘粒粘粒(cosmid vector)(cosmid vector)（303040kb40kb）是将质粒和是将质粒和噬菌体改建的一种载体噬菌体改建的一种载体.它含它含CO
17、SCOS序列序列,插入一小插入一小plasmid plasmid 而得名而得名CosmidCosmid。改。改建后的粘粒含有建后的粘粒含有噬菌体的复制起点和噬菌体的复制起点和cos cos 末端。全长末端。全长8kb8kb。大片段外源。大片段外源DNADNA插入后，在插入后，在体外包装进而被克隆。可包装体外包装进而被克隆。可包装303045kb45kb长的长的DNADNA片段，多用于基因文库构建。片段，多用于基因文库构建。2121第21页，此课件共42页哦(四四)大片段大片段DNADNA克隆载体克隆载体l l人类和哺乳动物的基因组很大，甚人类和哺乳动物的基因组很大，甚至许多单个基因也相当大（如
18、：至许多单个基因也相当大（如：DMD DMD gene 2300kbgene 2300kb），克隆分析就需要，克隆分析就需要更大的基因载体。如近年来构建的更大的基因载体。如近年来构建的一些载体：一些载体：BACBAC，PIPI，YACYAC等。等。2222第22页，此课件共42页哦1 1、细菌人工染色体（、细菌人工染色体（、细菌人工染色体（、细菌人工染色体（bacterial artificial bacterial artificial bacterial artificial bacterial artificial chromosome,BACchromosome,BACchromoso
19、me,BACchromosome,BAC）l l优点：能携带大片段优点：能携带大片段优点：能携带大片段优点：能携带大片段DNADNADNADNA，约，约，约，约300kb300kb300kb300kb。在每个细胞中，一个载体分在每个细胞中，一个载体分在每个细胞中，一个载体分在每个细胞中，一个载体分子能繁殖多个拷贝，高产子能繁殖多个拷贝，高产子能繁殖多个拷贝，高产子能繁殖多个拷贝，高产DNADNADNADNA。l l缺点：会出现插入片段在结构缺点：会出现插入片段在结构缺点：会出现插入片段在结构缺点：会出现插入片段在结构上的不稳定，导致克隆上的不稳定，导致克隆上的不稳定，导致克隆上的不稳定，导致克
20、隆DNADNADNADNA部部部部分的缺失或重排。为克服上分的缺失或重排。为克服上分的缺失或重排。为克服上分的缺失或重排。为克服上述缺点，人们采用低拷贝数述缺点，人们采用低拷贝数述缺点，人们采用低拷贝数述缺点，人们采用低拷贝数复制子载体，如，复制子载体，如，复制子载体，如，复制子载体，如，E coliE coliE coliE coli中中中中的的的的F F F F因子。此质粒含有因子。此质粒含有因子。此质粒含有因子。此质粒含有2 2 2 2种基种基种基种基因（因（因（因（part A,part Bpart A,part Bpart A,part Bpart A,part B）。每）。每）。每
21、）。每个个个个E coliE coliE coliE coli能接受能接受能接受能接受 300kbDNA300kbDNA300kbDNA300kbDNA片段。片段。片段。片段。2323第23页，此课件共42页哦2 2、噬菌体、噬菌体PIPI载体和载体和PACPACl lPIPI噬菌体与噬菌体与噬菌体一样，外有蛋白质噬菌体一样，外有蛋白质壳。内含相当大的（壳。内含相当大的（110110115kb115kb）线性）线性DNADNA，并在体外包装于，并在体外包装于PIPI壳内。壳内。PIPI进入进入宿主细胞后环化，扩增。宿主细胞后环化，扩增。l l19941994年，有人将年，有人将PIPI和和F
22、F因子克隆结合产生因子克隆结合产生PIPI人工染色体克隆系统人工染色体克隆系统-PAC-PAC。2424第24页，此课件共42页哦3 3、酵母人工染色体（、酵母人工染色体（、酵母人工染色体（、酵母人工染色体（yeast artificial yeast artificial yeast artificial yeast artificial chromosome,YACchromosome,YACchromosome,YACchromosome,YAC）l l适用适用适用适用于克于克于克于克隆大隆大隆大隆大片段片段片段片段DNADNADNADNA，0.20.20.20.22Mb2Mb2Mb2M
23、b。2525第25页，此课件共42页哦YAC YAC 的主要功能成份有三：的主要功能成份有三：l l1 1）着丝粒着丝粒着丝粒着丝粒：mitosismitosismitosismitosis姊妹染色单体和减姊妹染色单体和减姊妹染色单体和减姊妹染色单体和减I I I I同源染同源染同源染同源染色体分离之必需。色体分离之必需。色体分离之必需。色体分离之必需。l l2 2 2 2）端粒：端粒：端粒：端粒：保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。l l3 3 3 3）自主复制序列（自主复制序列（自主复制序列（自主复
24、制序列（ARSARSARSARS）元件）元件：是染色体自主复：是染色体自主复：是染色体自主复：是染色体自主复制的复制起点。制的复制起点。制的复制起点。制的复制起点。l l构建构建构建构建YACYACYACYAC需要需要需要需要4 4 4 4个短序列：个短序列：个短序列：个短序列：2 2 2 2个端粒，着丝粒，个端粒，着丝粒，个端粒，着丝粒，个端粒，着丝粒，ARSARSARSARS元件，与外源元件，与外源DNADNADNADNA连接成线性连接成线性DNADNADNADNA分子，导入酵分子，导入酵母细胞克隆。母细胞克隆。2626第26页，此课件共42页哦三、三、DNADNA重组与分子克隆化重组与分
25、子克隆化l l 为获得所需的基因或特异序列，需从为获得所需的基因或特异序列，需从细胞中分离得到目的基因与载体细胞中分离得到目的基因与载体DNADNA重重组，并用适当方法在宿主细胞中表达，组，并用适当方法在宿主细胞中表达，扩增得到大量相同的扩增得到大量相同的DNADNA片段，片段，称为称为DNADNA克隆，亦称分子克隆。克隆，亦称分子克隆。2727第27页，此课件共42页哦 基本原理与过程：1 1 1 1、分离纯化目的基因、分离纯化目的基因、分离纯化目的基因、分离纯化目的基因2 2、目的基因、目的基因、目的基因、目的基因 +vector=+vector=+vector=+vector=重组重组重
26、组重组DNADNA分子分子分子分子3 3 3 3、重组、重组、重组、重组DNADNADNADNA分子导入受体细胞，并在其内增殖。分子导入受体细胞，并在其内增殖。分子导入受体细胞，并在其内增殖。分子导入受体细胞，并在其内增殖。4 4、筛选含有重组、筛选含有重组DNADNADNADNA的细胞的细胞的细胞的细胞细胞克隆（细胞克隆（细胞克隆（细胞克隆（cell cell cloneclone），将转化的细胞置于琼脂表面，以刺激细胞克），将转化的细胞置于琼脂表面，以刺激细胞克），将转化的细胞置于琼脂表面，以刺激细胞克），将转化的细胞置于琼脂表面，以刺激细胞克隆生长，这些细胞是由单个细胞形成的遗传相同的细
27、胞隆生长，这些细胞是由单个细胞形成的遗传相同的细胞隆生长，这些细胞是由单个细胞形成的遗传相同的细胞隆生长，这些细胞是由单个细胞形成的遗传相同的细胞群体，故称细胞克隆。再将每个克隆移至液体培养基中群体，故称细胞克隆。再将每个克隆移至液体培养基中群体，故称细胞克隆。再将每个克隆移至液体培养基中群体，故称细胞克隆。再将每个克隆移至液体培养基中进行扩增。进行扩增。进行扩增。进行扩增。5 5 5 5、分离重组、分离重组、分离重组、分离重组DNADNADNADNA克隆：即收获扩增的培养细胞，并选择克隆：即收获扩增的培养细胞，并选择克隆：即收获扩增的培养细胞，并选择克隆：即收获扩增的培养细胞，并选择分离重组
28、分离重组分离重组分离重组DNADNADNADNA。2828第28页，此课件共42页哦分离纯化目的基因分离纯化目的基因目的基因目的基因 +vector=+vector=重组重组DNADNA分子分子2929第29页，此课件共42页哦重组重组DNADNA 和和分子分子克隆克隆 3030第30页，此课件共42页哦重组重组DNADNA和分子克隆的几种方法：和分子克隆的几种方法：（依目的基因的来源依目的基因的来源）1 1、从基因组中分离目的基因在细胞中克隆、从基因组中分离目的基因在细胞中克隆2 2、由特定、由特定mRNAmRNA逆转录合成逆转录合成cDNAcDNA后再进行后再进行 克隆克隆3 3、化学合成
29、目的基因进行克隆、化学合成目的基因进行克隆4 4、PCRPCR体外扩增目的片段进行克隆体外扩增目的片段进行克隆3131第31页，此课件共42页哦从基因从基因组中分组中分离目的离目的基因在基因在细胞中细胞中克隆克隆3232第32页，此课件共42页哦筛选含有重组筛选含有重组筛选含有重组筛选含有重组DNADNADNADNA的细胞的细胞的细胞的细胞细胞克隆（细胞克隆（细胞克隆（细胞克隆（cell clonecell clonecell clonecell clone）3333第33页，此课件共42页哦筛查含有目的基因的细胞克隆筛查含有目的基因的细胞克隆3434第34页，此课件共42页哦四、目的基因表达
30、四、目的基因表达l l上述细胞的克隆系统可直接导入的目基因扩上述细胞的克隆系统可直接导入的目基因扩增，获得足够量的目的基因来进行结构与功增，获得足够量的目的基因来进行结构与功能的研究。能的研究。l l重组重组DNADNA技术的另一目的是获得基因重组后的技术的另一目的是获得基因重组后的产物产物RNARNA，蛋白质。，蛋白质。l l就是将目的基因与表达载体重组，导入宿主就是将目的基因与表达载体重组，导入宿主细胞进而表达出相应的基因产物（蛋白）。细胞进而表达出相应的基因产物（蛋白）。如胰岛素，干扰素；生产疫苗的抗原和特异如胰岛素，干扰素；生产疫苗的抗原和特异的抗体等。此类克隆系统称为表达克隆。的抗体
31、等。此类克隆系统称为表达克隆。（expression cloningexpression cloning）.3535第35页，此课件共42页哦目的基目的基因表达因表达3636第36页，此课件共42页哦（一）真核细胞的基因在原核细胞（一）真核细胞的基因在原核细胞（细菌）中表达（细菌）中表达 l l 原核细胞中缺乏真核基因表达装置（如，原核细胞中缺乏真核基因表达装置（如，原核细胞中缺乏真核基因表达装置（如，原核细胞中缺乏真核基因表达装置（如，RNARNARNARNA剪接因子剪接因子剪接因子剪接因子等），因此不能直接表达。通常采用大肠杆等），因此不能直接表达。通常采用大肠杆等），因此不能直接表达。通
32、常采用大肠杆等），因此不能直接表达。通常采用大肠杆 菌为宿主。菌为宿主。真核多肽的表达要求：真核多肽的表达要求：真核多肽的表达要求：真核多肽的表达要求：1 1 1 1）适当的）适当的cDNAcDNAcDNAcDNA（完整的编码序列）；（完整的编码序列）；（完整的编码序列）；（完整的编码序列）；2 2）适当的表达载体，提供特定多肽信息；）适当的表达载体，提供特定多肽信息；）适当的表达载体，提供特定多肽信息；）适当的表达载体，提供特定多肽信息；3 3 3 3）外部进行表达调控，表达系统设计有启动子。）外部进行表达调控，表达系统设计有启动子。）外部进行表达调控，表达系统设计有启动子。）外部进行表达调
33、控，表达系统设计有启动子。产物特征：产物特征：产物特征：产物特征：1 1 1 1）真核细胞的蛋白由于不能羟基化而不稳定；）真核细胞的蛋白由于不能羟基化而不稳定；）真核细胞的蛋白由于不能羟基化而不稳定；）真核细胞的蛋白由于不能羟基化而不稳定；2 2）活性受限或无活性。）活性受限或无活性。）活性受限或无活性。）活性受限或无活性。3737第37页，此课件共42页哦(二二)、真核细胞基因在真核细胞中表达、真核细胞基因在真核细胞中表达l l真核宿主细胞提供一个相似但又不相同的真核宿主细胞提供一个相似但又不相同的环境。常采用酵母或昆虫细胞作为宿主。环境。常采用酵母或昆虫细胞作为宿主。l l应用于真核细胞蛋
34、白质的大量制备，研究应用于真核细胞蛋白质的大量制备，研究特定基因的表达。特定基因的表达。l l产物翻译后羟基化，羧基化等，有加强蛋产物翻译后羟基化，羧基化等，有加强蛋白的稳定和功能活性。白的稳定和功能活性。3838第38页，此课件共42页哦 五、基因文库、基因文库l l基因文库（基因文库（gene librarygene library）,应用应用DNADNA重组重组技术构建的含有基因组的全部基因的技术构建的含有基因组的全部基因的DNADNA克隆。克隆。3939第39页，此课件共42页哦（一）一）一）一）构建基因构建基因构建基因构建基因组组组组DNADNA文文库库4040第40页，此课件共42
35、页哦（二）染色体特异的基因文库二）染色体特异的基因文库 （chromosome specific librarychromosome specific library）单个染色体单个染色体 细胞克隆细胞克隆 （流式（流式C C仪）仪）细胞细胞 染色体染色体 染色体文库染色体文库 染色体区带染色体区带 区带特异区带特异 （显微切割（显微切割 ）DNADNA文库文库 4141第41页，此课件共42页哦 （三）（三）cDNAcDNA文库（文库（cDNA librarycDNA library）cDNAcDNA文库文库构建：构建：特定组织特定组织细胞一细胞一定发育定发育阶段阶段 总总 mRNAmRNA4242第42页，此课件共42页哦