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1、19.1紫外紫外可见分光光度法可见分光光度法9.2原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法9.3电势分析法电势分析法9.4色谱分析法色谱分析法第1页/共189页2学习要求1.掌握电位分析法的基本原理、指示电极和参比电极的含义。了解各类电极的结构和机理。2.掌握测定溶液pH值的方法。掌握直接电位法测定离子浓度及确定电位滴定终点的方法。3.掌握原子吸收光谱分析的基本原理和定量分析方法。了解原子吸收分光光度计的主要构造和应用范围。4.掌握色谱分离的原理、分类及定性、定量方法。了解评价分离效率的指标，了解气相及高效液相色谱仪的构造和各自的应用范围。第2页/共189页3仪器分析的基本特点Instrument
2、alAnalysis以被测物质的物理及物理以被测物质的物理及物理化学性质为基础的分析方法化学性质为基础的分析方法从二十世纪中叶开始，仪器分析得到迅速的发展，已广泛应用于现代科学技术的各个领域。多属微量分析，快速灵敏，相对误差较大，但绝对误差不大。仪器分析法的种类很多。有光谱法、色谱法、电化学分析法等。本章只介绍电位分析法，原子吸收分光光度法、气相色谱法和液相色谱法这四种常用的仪器分析法。第3页/共189页49.1 9.1 紫外紫外可见分光光度法可见分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry）9.1.1 概述9.1.2 光吸收的基本定律9.1.
3、3 显色反应及其影响因素9.1.4 紫外可见分光光度计9.1.5 紫外可见分光光度测定的方法9.1.6 分光光度法的误差和测量条件的选择9.1.7 紫外可见分光光度法应用实例第4页/共189页59.1.1 9.1.1 概述概述 吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外吸光光度法及红外光谱法等。特点：灵敏度高（测定下限可达测定下限可达10105 510106 6mol/Lmol/L）准确度高（满足微量组分的测定要求)简便快速（在适当条件下，不经分离可直接测定）应用广泛（无机、有机成分、农药残留、生物体内的微量成分、药物分析、环境卫生分析）第5页/共189页
4、6 光是一种电磁波。所有电磁波都具有波粒二象性。光的波长、频率与光速c的关系为：光速在真空中等于2.9979108ms-1。光子的能量与波长的关系为：式中E为光子的能量；h为普朗克常数，为6.62610-34JS。光的基本性质光的基本性质第6页/共189页7第7页/共189页8物质的颜色与光的关系物质的颜色与光的关系单色光单色光(monochromatic light)只具有一种波长的光。混合光混合光 由两种以上波长组成的光。白光白光是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的。物质的颜色物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性的吸收作用而产生的。例如：硫酸铜溶液因吸收白光
5、中的黄色光而呈蓝色；高锰酸钾溶液因吸白光中的绿色光而呈紫色。物质呈现的颜色和吸收的光颜色之间是互补关系。第8页/共189页9 表表9-2 9-2 物质颜色和吸收光颜色的关系物质颜色和吸收光颜色的关系 物质颜色物质颜色 吸收光颜色吸收光颜色 吸收光波吸收光波/nm/nm 黄黄绿绿 紫紫 400 400 450450 黄黄 蓝蓝 450 450 480480 橙橙 绿蓝绿蓝 480 480 490490 红红 蓝绿蓝绿 490 490 500500 紫红紫红 绿绿 500 500 560560 紫紫 黄绿黄绿 560 560 580580 蓝蓝 黄黄 580 580 600600 绿蓝绿蓝 橙橙
6、600 600 650650 蓝绿蓝绿 红红 650 650 760760白光青蓝青绿黄橙红紫蓝第9页/共189页10当一束平行的单色光照射到有色溶液时，光的一部分将被溶液吸收，一部分透过溶液，还有一部分被器皿表面所反射。设入射光强度为I0，透过光强度为It，溶液的浓度为c，液层宽度为b，经实验表明它们之间有下列关系：(9-1)朗伯比尔定律9.1.2 光的吸收基本定律第10页/共189页11透光度透光度 T T(Transmittance)(Transmittance)透光度定义：透光度定义：T取值为取值为0.0%100.0%全部全部吸收吸收T=0.0%全部透射全部透射T=100.0%入射光I
7、0透射光It第11页/共189页12透光度、吸光度与溶液浓度及液层宽度的关系（9-2）A 吸光度 T 透光度 K-吸光系数，与入射光波长、溶液的性质及温度有关。当c的单位为gL-1，b的单位为cm时，k以a表示其单位为Lg-1cm-1，此时式（9-1）变为 (9-3)第12页/共189页13 如果浓度c的单位为molL-1，b的单位为cm，这时k常用 表示。称为摩尔吸光系数(molar absorptivity)，其单位为Lmol-1cm-1，它表示吸光质点的浓度为1molL-1，溶液的宽度为1cm时，溶液对光的吸收能力。值越大，表示吸光质点对某波长的光吸收能力愈强，故光度测定的灵敏度越高。值
8、在103以上即可进行分光光度法测定，高灵敏度的分光光度法可达到105106。式（9-3）可写成为：A=bc （9-6）与a的关系为：=Ma （9-7）式中M为吸光物质的摩尔质量第13页/共189页14朗伯朗伯比尔定律的几种形式比尔定律的几种形式入射光强度入射光强度透射光强度透射光强度透光度透光度吸光度吸光度摩尔吸光系数摩尔吸光系数,L mol 1cm 1溶液厚度溶液厚度溶液浓度溶液浓度物理意义物理意义：一定温度下，一定波长的单色光通过均匀的、：一定温度下，一定波长的单色光通过均匀的、非散射的溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和厚度的非散射的溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和厚度的乘积成正比。乘积
9、成正比。第14页/共189页15例9-1浓度为25.0g/50mL的Cu2+溶液，用双环已酮草酰二腙分光光度法测定，于波长600nm处，用2.0cm比色皿测得T=50.1%，求吸光系数a和摩尔吸光系数。已知M(Cu)=64.0。解:已知T=0.501，则A=lgT=0.300，b=2.0cm,则根据朗伯比尔定律A=abc，而=Ma=64.0gmol-13.00102Lg-1cm-1=1.92104(Lmol-1cm-1)第15页/共189页16例例9-29-2 某有色溶液，当用1cm比色皿时，其透光度为T，若改用2cm比色皿，则透光度应为多少？解解:由A=-lgT=abc可得 T=10-abc
10、 当b1=1cm时，T1=10-ac=T 当b2=2cm时，T2=10-2ac=T2第16页/共189页17 定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲，见图中的虚线。偏离朗伯一比尔定律的原因CA标准工作曲线图正误差正误差负误差负误差第17页/共189页18 单色光不纯所引起的偏离 朗伯一比尔定律只对一定波长的单色光才能成立，但在实际工作中，即使质量较好的分光光度计所得的入射光，仍然具有一定波长范围的波带宽度。在这种情况下，吸光度与浓度并不完全成直线关系，因而导致了对朗伯一比尔定律的偏离。所得
11、入射光的波长范围越窄，即“单色光”越纯，则偏离越小。第18页/共189页19由于溶液本身的原因所引起的偏离 吸光系数k与溶液的折光指数n有关。溶液浓度在0.01molL-1或更低时，n基本上是一个常数，浓度过高会偏离朗伯-比尔定律。朗伯-比尔定律是建立在均匀、非散射的溶液这个基础上的。如果介质不均匀，呈胶体、乳浊、悬浮状态，则入射光除了被吸收外，还会有反射、散射的损失，因而实际测得的吸光度增大，导致对朗伯-比尔定律的偏离第19页/共189页20溶质的离解、缔合、互变异构溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化引起的偏离及化学变化引起的偏离 有色化合物的离解是偏离朗伯比尔定律的主要化学因素。例如，显
12、色剂KSCN与Fe3+形成红色配合物Fe(SCN)3，存在下列平衡：Fe(SCN)3 Fe3+3SCN 溶液稀释时，上述平衡向右，离解度增大。所以当溶液体积增大一倍时，Fe(SCN)3的浓度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，导致偏离朗伯比尔定律。第20页/共189页21显色反应及显色剂：被测元素在某种试剂的作用下，转变成有色 化 合 物 的 反 应 叫 显 色 反 应（color reaction），所加入试剂称为显色剂(color reagent)。常见的显色反应大多数是生成配合物的反应，少数是氧化还原反应和增加吸光能力的生化反应9.1.3 9.1.3 显色反应及其影响因素显色反应及其影响
13、因素第21页/共189页22 显色反应的要求：选择性好 所用的显色剂仅与被测组分显色而与其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。灵敏度要足够高 有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有104-105数量级。有色配合物的组成要恒定 显色剂与被测物质的反应要定量进行，生成有色配合物的组成要恒定。生成的有色配合物稳定性好 即要求配合物有较大的稳定常数，有色配合物不易受外界环境条件的影响，亦不受溶液中其它化学因素的影响。有较好的重现性，结果才准确。色差大 有色配合物与显色剂之间的颜色差别要大，这样试剂空白小，显色时颜色变化才明显。第22页/共189页23影响显色反应的因素影响显色反应的因素显色剂的用量显色
14、剂的用量 显色反应一般可表示为：M+R MR 有色配合物MR的稳定常数越大，显色剂R的用量越多，越有利于显色反应的进行。但有时过多的显色剂反而对测定不利。在实际工作中，常根据实验结果来确定显色剂的用量。c(R)第23页/共189页24溶液的酸度溶液的酸度 许多显色剂都是有机弱酸或有机弱碱，溶液的酸度会直接影响显色剂的解离程度。对某些能形成逐级配合物的显色反应，产物的组成会随介质酸度的改变而改变，从而影响溶液的颜色。另外，某些金属离子会随着溶液酸度的降低而发生水解，甚至产生沉淀，使稳定性较低的有色配合物的解离。pHpH1pH80C）的条件下使用时，Ag-AgCl电极的电位较甘汞电极稳定。25C时
15、，内充饱和KCl溶液的Ag-AgCl电极的电位值为0.199V。第90页/共189页919.3.2 9.3.2 离子选择性电极离子选择性电极 离子选择性电极（ionselectiveelectrode,ISE）是20世纪60年代后迅速发展的新型指示电极。有常规电极和微电极之分，后者在生命科学中有极其美好的应用前景。离子选择性电极有特殊响应机理离子在溶液和选选择择性性敏感膜敏感膜之间的扩散和交换扩散和交换而形成膜电位膜电位(membranepotential)。第91页/共189页92 1.1.离子选择性电极和膜电位离子选择性电极和膜电位 选择性敏感膜是对特定离子有选择性交换能力的材料。按敏感膜
16、材料性质不同，电极可分类为：分类为：晶体电极：晶体电极：用晶体敏感膜用晶体敏感膜制作，如氟化镧单晶制成的氟离子选择性电极，用氯化银多晶制成的氯离子选择性电极。非晶体电极：非晶体电极：用玻璃膜玻璃膜和流动载体(液膜液膜)制成的电极（前者如pH玻璃电极，后者如流动载体钙离子选择性电极)等。第92页/共189页93 2.pH2.pH玻璃电极玻璃电极pH玻璃电极是对溶液中的对溶液中的H+离子活度具有选择性响应离子活度具有选择性响应的电极，它主要用于测量溶液的酸度。组成见图(由玻璃膜，内部溶液，内参比电极组成)。第93页/共189页94复合式复合式pH玻璃电极示意图玻璃电极示意图 新型玻璃电极多为复合型
17、，将指示电极和参比电极二合一，外加长脚护套，玻璃泡不易破损。1玻璃膜；2.多孔陶瓷；3.加液口；4.内参比电极；5.外参比电极；6.外参比电极的参比溶液。第94页/共189页95 玻璃电极的膜结构玻璃电极的膜结构电极的球泡形玻璃膜厚0.030.1mm，组成特殊(Na2O，22%；CaO，6%；SiO2，72%)玻璃电极的特殊内部结构使玻璃膜有选择性响应。在掺有Na2O的硅氧网络结构形成部分荷负电的硅-氧骨架，可与带正电荷的Na+离子形成离子键第95页/共189页96 玻璃电极膜电位的形成玻璃电极膜电位的形成pH玻璃电极需水水化化后才能使用。水化层中的Na+与溶液中H+发生离子交换。SiO-Na
18、+(表面)+H+(溶液)SiO-H+(表面)+Na+（溶液）插入待测试样后，因膜外表面水化层中的H+离子活度与待测溶液中H+离子活度不同，在两相界面上因H+离子扩散迁移而建立起相间电位。第96页/共189页97内试膜=试-内若待测液H+离子活度较大，溶液中H+向玻璃膜外表面水化层扩散，在玻璃外表面和溶液界面形成双电层，产生相间电位。同理，在玻璃内表面也形成相应的相电位。在膜两侧形成了膜电位：第97页/共189页98 玻璃电极膜电位的表示外表面的相间电位符合Nernst方程：同理，玻璃膜的内表面也存在着因H+离子的扩散迁移而建立起相间电位：第98页/共189页99 玻璃电极膜电位间的关系通常玻璃
19、膜内、外表面结构及相关因素完全一致，玻璃膜内、外膜表面相间电位的代数和为：因玻璃泡内装溶液的H+离子活度是固定的，则：忽略扩散电位，可看成整个玻璃膜的膜电位。第99页/共189页100 可简化成：可简化成：2525 时时时时可表示为：可表示为：因玻璃电极的电位是通过电极内部的Ag-AgCl内参比电极测量的，故整个pH玻璃电极的电极电位为：第100页/共189页101 玻璃电极膜电位的偏离pH大时为“碱差碱差”：除H+外还响应K+、Na+离子，所测pH值低于低于实际值。pH小时为“酸差酸差”：水分子的质子化使其活度小于1，所测pH值高于高于实际值。因电极玻璃膜响应H+离子的非专属性非专属性，在p
20、H很大或很小时会出现较大的偏差：第101页/共189页102 玻璃电极的改性改变玻璃膜的成分，可改变使玻璃电极测定的选择性，成为测定其它阳离子的选择性电极。如，将玻璃膜的成分改为：Na2O，11%，Al2O3，18%，SiO2，71%，即可将玻璃电极改性为测定钠的选择性电极。第102页/共189页103 3.3.氟离子选择性电极氟离子选择性电极 敏感膜：（氟化镧单晶）：掺有EuF2的LaF3单晶切片；内参比电极：Ag-AgCl电极（管内）内参比溶液：0.1mol/LNaCl+0.1mol/LNaF混合溶液F-用来控制膜内表面的电位，Cl-用以固定内参比电极的电位。第103页/共189页104
21、电极膜电位的产生电极膜电位的产生当电极浸入含F-待测试液时，溶液中的F-离子将与单晶膜上的F-离子发生交换。若试样溶液中F-大大，溶液中的F-离子迁移进入晶体膜的空穴中；若试样溶液中F-小小，晶体表面的F-离子转移到溶液，在膜晶格中留下F-点位的空穴。从而在膜和溶液相界面上形形成成了了双双电电层层，产产生生膜膜电位电位。第104页/共189页105 电极膜电位的表示电极膜电位的表示膜电位的大小与试样溶液中F-活度关系符合能斯特方程：与pH电极类似，结合内参比电极的电位，氟离子电极在活度为的F-离子试液中的电极电位为：因此可以通通过过测测量量氟氟离离子子选选择择性性电电极极的的电电位位，测测定定
22、试样溶液中试样溶液中F离子的活度离子的活度。第105页/共189页106 氟电极的应用范围氟电极的应用范围测定F-离子的浓度范围一般在110-5molL-1之间测定时溶液酸度应控制在pH56之间pH6，膜表面LaF3水解生成La(OH)3，沉淀会使膜表面性质变化，且又增大了电极表面附近的试样溶液中F-浓度，干扰F-浓度的测定。第106页/共189页1079.3.3 直接电势法 直直接接电电势势法法(directpotentiometry)通过测量指示电极的电极电位，并根据电位与待测离子间的能斯特关系，求得待测离子的活(浓)度的方法。经仪器适当的电路转换，直接电位法可直接求出样品溶液的pH值值及
23、相关离子的浓度浓度。第107页/共189页108 1.1.溶液溶液pHpH值的测定值的测定可用酸度计直接测定溶液的pH值，其测量电池为，饱和甘汞电极饱和甘汞电极试样溶液试样溶液 pH玻璃电极玻璃电极该电池的电动势为：E =E玻璃 E甘汞代入玻璃电极电势表达式，并将甘汞电极的电势(一定条件下是常数一定条件下是常数)与K合并，可得:第108页/共189页109 pHpH值的实用定义值的实用定义实测时都采取与标准缓冲溶液比对的方法来确定待测溶液的pH值：标准缓冲溶液昂昂昂昂昂昂待测溶液故得到pH值的实用定义：第109页/共189页110 标准缓冲体系的pH值温度(C)邻苯二甲酸氢钾(0.05molL
24、-1)KH2PO4-Na2HPO4(各0.025molL-1)硼砂(0.01molL-1)04.0036.9849.464103.9986.9239.332204.0026.8819.225254.0086.8659.180304.0156.8539.139354.0246.8449.102第110页/共189页1112.2.离子浓度的测定离子浓度的测定 以离子选择性电极为指示电极，甘汞电极作为参比电极，与待测溶液一起组成一个测量电池，测量其电动势以确定离子活度。饱和甘汞电极饱和甘汞电极试样溶液试样溶液 离子选择性电极离子选择性电极结合前面所讨论的方法，可得i为离子i的活度，zi该离子所带的电
25、荷数，若带一个正电荷，zi=1；两个正电荷，zi=2；一个负电荷，zi=-1。其余类推。第111页/共189页112(1)(1)标准曲线法标准曲线法 与分光光度法中的标准曲线法相似。（a）配制一系列已知浓度的待测物标准溶液（b）用相应的离子选择性电极和甘汞电极测定对应的电动势，（c）以测得的E值对相应的lgci作标准曲线。（d）在相同的条件下测出待测试样溶液的E值，从标准曲线上查出待测离子的lgci值，再换算成待测离子的浓度。第112页/共189页113 方法特点：方法特点：要解决的问题：要解决的问题：浓度与活度之间的差异解决的方法：解决的方法：不是不是求解i将活度校正为浓度而而是是控制体系的
26、离子强度，从而使活度系数i成为不随试样变化而变化的常数 不同变量标准曲线的对比 1.以活度为变量 2.以浓度为变量第113页/共189页114 方法原理方法原理标准溶液和试样溶液中均加入不干扰测定的强电解质，所加浓度一致且远高于试样溶液中的背景电解质和待测离子的浓度。使待测组份标准溶液和的活度系数被保持一致。式中 是一常数，可并入K中，即可使E lgC 保持线性关系，完全可通过直线方程来定量。第114页/共189页115 实验条件控制实验条件控制除控制离子强度外，还需控制溶液酸度、掩蔽存在的干扰离子等。方方法法：加入由离子强度调节剂、缓冲剂、掩蔽剂所组 成 的 混 合 试 剂“总总 离离 子子
27、 强强 度度 调调 节节 缓缓 冲冲 剂剂”（totalionstrengthadjustmentbuffer,TISAB）例例如如，氟离子选择性电极测定F-离子浓度：需控制试液的pH=5.0左右(HAcNaAc体体系系)；用柠檬酸钠掩蔽试样中共存的Fe3+、Al3+等(能与能与F形成配合物形成配合物)。第115页/共189页116 方法特点方法特点（1）用一条标准曲线可以对多个试样进行定量，因此操作比较简便。（2）通过加入TISAB，可以在一定程度上消除离子强度、干扰组分等所引起的干扰。标准曲线法适适用用于于试样组成较为简单的大批量试样的测定。第116页/共189页117(2)标准加入法 基
28、本思路基本思路：向待测的试样溶液中加入一定量的小小体体积积待测离子的标标准准溶溶液液，通过加入标准溶液前后电动势的变化与加入量之间的关系，对原试样溶液中的待测离子浓度进行定量。第117页/共189页118 方法原理方法原理Vs待测试样溶液体积，cx待测离子浓度 离子的活度系数加入待测离子标准溶液后后：其中：cs最好是cx的50100倍Vs最好是Vx的1/501/100目的：加入体积很小，对试样影响可忽略不计第118页/共189页119将上两式相减：其中Vs0.200.20大于大于0.50.5简单样品分析简单样品分析第170页/共189页171气气液液色色谱谱为分配型色谱机理，固定相由一些高沸点
29、有机化合物(固定液)涂渍在多孔的担体(最常用的担体是硅藻土担体)之上所形成的液体固定相。目前已有至少2000种色谱固定液。气气固固色色谱谱为吸附色谱机理，固定相为一些固体吸附剂（如Al2O3、硅胶、分子筛等）。第171页/共189页1724.4.检测系统检测系统作作用用：将经色谱柱分离并在载气携带下从色谱柱后依此流出之各组分的浓度转换成易检测的电信号并记录为色谱图。种类种类：根据检测性能而分类。最常用的有：热导池检测器(TCD)根据待测组分和载气导热能力的差异而设计，属通用型检测器。氢火焰离子化检测器(FID)根据有机化合物在氢火焰中燃烧时能产生少量离子而设计。灵敏度较TCD高，但只能响应有机
30、化合物。第172页/共189页1735.5.记录系统记录系统所有结果将用记录系统给予记录。最简单的配置是使用记录仪，而后测量峰宽峰高并手工计算峰面积等参数。现均配置色谱处理机或色谱工作站，自动担负色谱图的记录和保留值、峰高、峰面积(乃至塔板数和分离度)的计算，并能直接报告分析结果。第173页/共189页174气相色谱法的特点气相色谱法的特点 分分离离效效率率高高一般一根12m的色谱柱，理论塔板数可达数千，毛细管柱可达数万。分分析析速速度度快快最快时可在30min内完成200300个组分的定性定量分析。灵灵敏敏度度高高气相色谱可检测出10-1110-12g的物质，可以直接用以测定试样(如环境检测
31、中的水和大气)中的微(痕)量物质。价廉价廉设备不太复杂，操作费用比较低。第174页/共189页175气相色谱法的应用气相色谱法的应用主要用于分析分子量较小（400）的低沸点（500C）化合物，如炼油厂的低沸点油类、化学品中的痕量杂质、环境中的有机污染物、饮料中的成分、食品中的农药残留、化妆品中的香料等等，被广泛地应用于石油、化工、环保、轻工、医药卫生、食品饮料等行业。第175页/共189页1769.4.5 HPLC9.4.5 HPLC法的特点及仪器法的特点及仪器液相色谱液相色谱采用不同配比的液体为流动相。早先：常压自流系统的柱色谱现代：采用高压液体(可达到40MPa)为流动相采用极细固定相(5
32、10m)，故柱效高(N可达数万)，又称为高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)。第176页/共189页1771.HPLC1.HPLC分离模式分离模式有液液分配色谱、液固吸附色谱、离子交换色谱、空间排阻色谱(基于分子体积大小而分离)、亲和色谱等。不同的分离模式主要是固定相和流动相有所不同，仪器及操作方法大同小异。第177页/共189页1782.HPLC特点高效高效：理论塔板数一般可达104左右。高速高速：分离分析一个试样中的几个组分一般只要几到几十分钟。高灵敏度高灵敏度：常用的紫外检测器(VWD或DAD)最低检测量为10-710-12g
33、。用荧光检测器更佳。适用面广适用面广：有多种分离模式可供选择且不受组分是否易挥发的限制，其适用面广。广泛应用于化工、制药、医院、卫生、生物、食品、轻工等行业。化学品、合成药物和天然化合物、高聚物、生物大分子、无机离子、金属有机化合物等均可。价高价高：仪器设备相对较贵，操作费用较高。第178页/共189页1793.HPLC3.HPLC仪器仪器 高效液相色谱仪一般由储液器、高压泵、进样系统、分离系统、检测和记录系统等部分组成。第179页/共189页180高效液相色谱仪高效液相色谱仪第180页/共189页181(1)HPLC(1)HPLC流动相流动相色谱流动相决不仅仅是被分离物质的运载体，它直接影响
34、到分离的好坏，影响到测定的成功与否。与GC不同，HPLC的流动相对组分具有很强的选择性，可以根据具体的分析任务选择极性、酸度、离子强度各异的溶剂与一定的固定相配合，形成最佳的分离体系。流动相的要求：与固定相不互溶不发生不可逆吸附 有合适的pH值 化学惰性不与样品及固定相发生反应第181页/共189页182(2)(2)流动相供应和驱动系统流动相供应和驱动系统由储液器和高压泵组成。因所填固定相极细，渗透性变差，需高压流动相方可通过色谱柱。目前高效液相色谱仪上用的高压泵大多是机械式往复柱塞泵，可以产生几百个大气压的压力。第182页/共189页183梯度洗脱装置梯度洗脱装置配比固定的流动相可采用单泵驱
35、动，配比需不断改变的可选用梯度泵。可按需要预设程序，目前最多可使4种溶剂以任意比例相混合，自动得到洗脱强度随时间变化的流动相，以提高柱效和分离速度。第183页/共189页184辅助装置辅助装置过滤器：除掉机械杂质及固体颗粒。混合器：体积不宜大，靠流经泵的动力学特性而混合。脉动阻尼器：种类多，都有一定容积和弹性压力测量装置：流量测量装置：第184页/共189页185(3)(3)进样系统进样系统因HPLC柱压高，不能直接用注射器进样。需用进样阀进样。第185页/共189页186取样状态取样状态：流动相直接进柱，进样口与定量管连接，样品充满定量管后，多余样品从6流出。进样状态进样状态：泵将流动相压入
36、定量管，将样品全部携带进入色谱柱分析。第186页/共189页187(4)(4)分离系统分离系统色谱柱：内径3.94.5mm、长度1530cm的直型不锈钢管，内充极细(粒径510m)的固定相。用18个碳的烷烃改性的C18硅胶是最常用的固定相。第187页/共189页188（5 5）检测记录系统）检测记录系统常用有折光检测器(RID)和紫外吸收检测器(VWD)。RID通用型通用型检测器，测定流动相折光率的变化；VWD专用型专用型检测器，适用于有紫外吸收的化合物的检测。还有可变波长紫外检测器和二极管阵列检测器(DAD)。其他如荧光检测器、电导检测器(多用于离子色谱)。第188页/共189页189第九章 仪器分析法选介感谢您的观看！第189页/共189页