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1、温故而知新植物体细胞杂交（马铃薯番茄）融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈伤组织再再分分化化植物组织培养植物组织培养原生质体B原生质体A去 壁去 壁人人工工诱诱导导植物细胞A植物细胞B动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？如果可以，两者相同吗？如果可以，两者相同吗？第1页/共22页带着问题走进课堂？2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工程第2页/共22页自主阅读，自主阅读，p52第第2自然段，自然段，思考下列问题：思考下列问题：什么叫动物细胞融合什么叫动物细胞融合？（概念要点）（概念要点）两
2、个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用 两个或多个动物细胞 一个细胞（杂交单核细胞）第3页/共22页 动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞第4页/共22页一、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒第5页/共22页思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子
3、和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。第6页/共22页5、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞第7页/共22页6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用
4、杂交瘤技术制造单克隆抗体第8页/共22页思考题1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能 还可以利用灭活的病毒进行诱导5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能第9页/共22页植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植
5、物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体第10页/共22页2.2.动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。第11页/共22页1 1、抗体、抗体1.1 1.1 概念：概念：抗体是机体受抗抗体
6、是机体受抗原刺激后产生的、并原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功性结合的具有免疫功能的球蛋白能的球蛋白 。1.2 1.2 来源：来源：B B淋巴细胞。淋巴细胞。第12页/共22页 B B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读自主阅读P
7、52：传统的抗体的生产方法及传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？缺陷是什么？怎样解决这个问题？第13页/共22页2.1、单克隆 由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。2.2、单克隆抗体 由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，即单克隆抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。第14页/共22页3、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。4、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）
8、克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体第15页/共22页6.单克隆抗体的应用：特异性强、灵敏度高、产量大特异性强、灵敏度高、产量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗5、单克隆抗体的特点：第16页/共22页思考问题：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养
9、原理这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体的能力，而且细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体抗体2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？第17页/共22页知识结构两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势第18页/共22页1、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源
10、杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是（）A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力BD 第19页/共22页3 3、“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C.C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D4、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞 C第20页/共22页5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.C.D.C6.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ()A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D细胞质酶的活性 A第21页/共22页感谢您的观看！第22页/共22页