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1、植物组织培养和动物植物组织培养和动物(dngw)细胞培养的比较细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的细胞的 细胞细胞培养基性质培养基性质 培养基培养基培养基培养基培养基特有培养基特有成分成分 、植物激素、植物激素 葡萄糖、葡萄糖、培养结果培养结果植物体植物体培养目的培养目的快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株病毒植株获得获得全能性全能性增殖增殖(zngzh)固体固体(gt)液体液体蔗糖蔗糖动物血动物血清清细胞株、细胞系细胞株、细胞系 细胞或细细胞或细胞分泌蛋白胞分泌蛋白第一页，共二十三页。温故而知新温故而知新植物体细胞杂交植物体细胞杂交
2、(zjio)（马铃薯番茄马铃薯番茄）融合融合(rngh)(rngh)的的原生质原生质体体ABAB再再生生(zishng)出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂种杂种细胞细胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物组织培养植物组织培养原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？如果可以，两者相同吗？如果可以，两者相同吗？第二页，共二十三页。带着问题带着问题(wnt)走进课堂？走进课堂？2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工
3、程(gngchng)(gngchng)第三页，共二十三页。自主阅读，自主阅读，p52第第2自然段，自然段，思考下列思考下列(xili)问题：问题：什么叫什么叫动物细胞融合动物细胞融合？（概念（概念(ginin)(ginin)要点）要点）两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用 两个两个(lin)或多个或多个动物细胞动物细胞 一个细胞一个细胞（杂交（杂交单核细胞）单核细胞）第四页，共二十三页。动动物物(d d n ng gw w)细细胞胞融融合合过过程程示示意意图图不同DNA的两个(lin)细胞 灭活的病毒(bngd)有丝分裂两个完整的杂交细胞第五页，共二十三页。一、动物细胞(xbo)
4、融合（细胞(xbo)杂交）1、概念(ginin)：指两个(lin)或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒第六页，共二十三页。思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程为什么细胞融合过程(guchng)(guchng)中使用的病毒中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合(rngh)，不，不灭灭
5、活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。第七页，共二十三页。5、过程(guchng)：动物细胞A动物细胞B诱导(yudo)，融合2个完整(wnzhng)的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞第八页，共二十三页。6、意义：突破了有性杂交方法(fngf)的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞(xbo)遗传、细胞(xbo)免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体第九页，共二十三页。思考题思考
6、题1.植物体细胞杂交时首先应用什么(shn me)方法去掉细胞壁？酶解法(ji f)，如纤维素酶或果胶酶2.动物细胞融合时需要进行(jnxng)去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能 还可以利用灭活的病毒进行诱导5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能第十页，共二十三页。植物体细胞杂交植物体细胞杂交(zjio)和动物细胞融合的比较和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植
7、物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得获得(hud)杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞细胞(xbo)的全能性的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导原后诱导原生质体融合生质体融合使细胞分散后诱导细胞使细胞分散后诱导细胞融合融合物理（离心、振荡、电物理（离心、振荡、电刺激）刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）物理、化学方法（同左）灭活的病毒灭活的病毒主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体第十一页，共二十三页。2.动物(dngw)细胞融合的概
8、念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个(y)细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞杂交细胞。第十二页，共二十三页。1 1、抗体抗体1.1 1.1 概念：概念：抗体是机体受抗原抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合该抗原发生特异性结合的具有免疫的具有免疫(miny)(miny)功能的功能的球蛋白球蛋白 。1.2 1.2 来源：来源：B B淋巴细胞。淋巴细胞。第十三页，共二十三页。B B淋巴细胞与抗体淋巴细胞与抗体(kngt)(kngt)的关系：的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗淋巴细
9、胞受抗原刺激后，可以产生抗体。体。动物动物(dngw)(dngw)体内的体内的B B淋巴细胞可以产生百万淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个缺陷是什么？怎样解决这个(zh ge)问题？问题？第十四页，共二十三页。2.1、单克隆、单克隆 由一个细胞由一个细胞(xbo)经过无性繁殖经过无性繁殖(多次有丝分裂多次有丝分裂)形形成的一个细胞群，叫一个克隆，即
10、单克隆。成的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。2.2、单克隆抗体、单克隆抗体 由一个效应由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生一个细胞群产生(chnshng)的化学性质单一，特异的化学性质单一，特异性强的抗体，即单克隆抗体。性强的抗体，即单克隆抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，淋巴细胞，形成细胞群。形成细胞群。第十五页，共二十三页。3、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本(qn bn)的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。4、过程(guchng)B淋巴细胞骨髓瘤细胞(xbo)诱导融合B-B细
11、胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体第十六页，共二十三页。6.单克隆抗体单克隆抗体(kngt)的应用：的应用：特异性强、灵敏度高、产量特异性强、灵敏度高、产量(chnling)(chnling)大大 作为诊断试剂：准确识别作为诊断试剂：准确识别(shbi)(shbi)各种抗原物质，并与各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗5、单克隆抗体的特点：单克隆抗体
12、的特点：第十七页，共二十三页。思考思考(sko)问题问题：1 1、本过程、本过程(guchng)(guchng)利用了哪些原利用了哪些原理？理？免疫原理免疫原理(yunl)(yunl)，细胞融合原理，细胞融合原理(yunl)(yunl)和动物细胞培和动物细胞培养原理养原理(yunl)(yunl)这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有物质，不仅具有B B细胞分泌抗体的能力，而且还有细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么
13、选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？第十八页，共二十三页。知识结构两个(lin)过程动物(dngw)细胞培养过程单克隆抗体(kngt)制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势第十九页，共二十三页。1、动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用动物细胞融合过程中所用(su yn)的诱导剂的诱导剂灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是灭活的
14、病毒，抗原性和感染力的有无是（）A.失去抗原性，具有感染力失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力具有抗原性，失去感染力BD 第二十页，共二十三页。3 3、“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C.C.产生产生(chnshng)(chnshng)特定抗体的特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D4、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂科学家们用小鼠骨髓瘤细
15、胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆交瘤细胞，经培养可产生大量克隆(k ln)抗体，与骨髓瘤抗体，与骨髓瘤细胞融合的是细胞融合的是（）A.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 B.未经过免疫的未经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 C.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 D.未经过免疫的未经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 C第二十一页，共二十三页。5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合(rngh)后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.
16、C.D.C6.动物细胞融合(rngh)和植物原生质融合(rngh)决定于 ()A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D细胞质酶的活性 A第二十二页，共二十三页。内容(nirng)总结植物组织培养和动物细胞培养的比较(bjio)。温故而知新植物体细胞杂交（马铃薯番茄）。自主阅读，p52第2自然段，思考下列问题：。因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂。（膜融合、质融合）。抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及。B-B细胞。瘤-瘤细胞。免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理。B.具有抗原性，也具有感染力。A第二十三页，共二十三页。