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1、色谱法简介色谱法的历史色谱法的原理色谱法的分类HPLC简介液相色谱图术语解释主要内容主要内容第1页/共18页l什么是色谱色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法常见的分离方法 蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤 色谱：目前最有效的分离方法第2页/共18页Chromatography的由来100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法，他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Chromatogr
2、aphy(色谱法)第3页/共18页Chromatography的发展1906年正式命名(见诸文献)20世纪30年代开始广泛研究和应用 -主要是气象色谱的应用高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代第4页/共18页Chromatography的原理 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离 两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相又叫洗脱剂,溶剂相(Phase):物理化学术语,特指在某一系统中,具
3、有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面第5页/共18页Chromatography的原理分离是一个物理过程。固定相(Stationary Phase)流动相(Mobile Phase)进样(Injection)洗脱(Elution)相互作用(Interaction)第6页/共18页色谱法的分类按分离过程的机理分:吸附色谱(Absorption Chromatography)根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离分配色谱(Partition Chromatography)分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同离子交换色谱(Ion
4、Exchange Chromatography)根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography)GPC(Gel Permeation Chromatography)固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂GFC(Gel Filtration Chromatography)固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液第7页/共18页色谱法分类示意图第8页/共18页液相色谱的分类按流动相和固定相的相对极性分:正相色谱(Normal Phase Chromatography)：固定相的极性大于流动相反相色谱(Reversed Ph
5、ase Chromatography)：固定相的极性小于流动相有机化合物的极性：分子间作用力(静电引力,偶极力,色散力,氢键力)综合表现的一种描述第9页/共18页常见有机溶剂的极性示例第10页/共18页高效液相色谱简介高效液相色谱法 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器第11页/共18页HPLC 流程第12页/共18页液相色谱图名词术语色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的
6、直线峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距离切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离第13页/共18页液相色谱图名词术语峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值标准偏差()(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一半拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所
7、产生的峰,亦称假峰第14页/共18页液相色谱图名词术语基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象第15页/共18页液相色谱图名词术语死时间(t0)(Dead time):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间 保留时间(tR)(Retention time):组分从进样到出现峰最大值所需的时间死体积(V0)(Dead volume):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的流动相体积保留体积(VR)(Retention volume):组分从进样到出 现峰最大值所需的流动相体积第16页/共18页谢 谢！第17页/共18页感谢您的观看！第18页/共18页