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1、关于高中生物微生物的培养第1页，此课件共52页哦1.1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。2.2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。3.3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。一一 目标导航目标导航一、培养基与无菌技术一、培养基与无菌技术1 1培养基培养基(1)(1)概念：人们按照微生物对概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其_的的_。(2)(2)成分：一般含有成分：一般含有_、_、
2、_、_，此外还要，此外还要满足微生物对满足微生物对_(_(即生长因子即生长因子)、_以及氧气的以及氧气的需求。需求。营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖营养基质营养基质水水无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源特殊营养物质特殊营养物质pHpH第2页，此课件共52页哦营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需_的物质构成生物体的_和一些_，有些是异养生物的_无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需_的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的_酶和核酸的组成成分维生素、
3、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂微量有机物微量有机物碳元素碳元素细胞物质细胞物质代谢产物代谢产物能源物质能源物质氮元素氮元素第3页，此课件共52页哦(1)不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。(2)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。铵盐、硝酸盐。(3)对异养微生物来说，含对异养微
4、生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源又是氮源和的化合物既是碳源又是氮源和能量来源。能量来源。(4)微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。物质所需要的酶或合成能力有限。备注：备注：拓展深化拓展深化.葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中的作用？葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中的作用？葡萄糖葡萄糖提供提供C源和能源源和能源,构成生物体的细胞物质和代谢产物构成生物体的细胞物质和代谢产物.氨基酸氨基酸提供生长因子提供生长因子,N源源,C源和能源源和能源氨气
5、氨气提供提供N源和能源（硝化细菌的化能合成作用）源和能源（硝化细菌的化能合成作用）第4页，此课件共52页哦微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。牛肉膏牛肉膏天然培养基，主要提供天然培养基，主要提供C源源、磷酸盐和维生素、磷酸盐和维生素、N源。源。玉米粉玉米粉主要提供主要提供C源与能量源与能量植物组织培养微生物培养培养基成分水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等水、无机盐、碳源、氮源等大肠杆菌：异养兼性厌氧型大肠杆菌：异养兼性厌氧型硝化细菌：自养需氧型硝化
6、细菌：自养需氧型乳酸菌：异养厌氧型乳酸菌：异养厌氧型根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。由由可以得到什么结论？可以得到什么结论？第5页，此课件共52页哦1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐
7、是该微生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一营养型碳源氮源生长因子举例自养型微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、铵盐、硝酸盐等一般不需要硝化细菌异养型微生物糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、蛋白胨等有些种类需要乳酸菌自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？第6页，此课件共52页哦(3)(3)培养基的种类培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质_培养基加凝固剂，如_半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定_培养基微生物_、_、活菌计数、保藏菌种化学成分_培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产_培养基培养基成分明
8、确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途_培养基培养基中加入某种化学物质，以_ _不需要的微生物的生长，_ 所需要的微生物的生长培养、_出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素或链霉素；培养固氮菌可用无氮培养基)_培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品_不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)液体液体固体固体工业生产工业生产分离分离鉴定鉴定琼脂琼脂天然天然合成合成选择选择抑制抑制促进促进分离分离鉴别鉴别鉴别鉴别第7页，此课件共52页哦纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与
9、真菌混合菌的培养纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌的培养基类型是什么？基类型是什么？拓展深化拓展深化病毒目前的利用人工培养基来培养方法？病毒目前的利用人工培养基来培养方法？需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。2 2下列说法正确的是下列说法正确的是()A A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C C除水以外的无机物只能提供无机盐除水以外的无机物只能提供无机盐 D D
10、无机氮源不可能提供能量无机氮源不可能提供能量选择培养基选择培养基第8页，此课件共52页哦植物组织培养技术、微生物培植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较养技术和无土栽培技术的比较植物组织培养微生物培养无土栽培含义培养基成分特殊操作要求在在无菌条件无菌条件下，将下，将离体的离体的植物体器官或组织植物体器官或组织接种在接种在适当的培养基上进行培养，适当的培养基上进行培养，最终发育成完整最终发育成完整植物体植物体在在无菌条件无菌条件下，在下，在适宜的营养和环境适宜的营养和环境条件下条件下对微生物的对微生物的培养培养将植物生长发育过程中所将植物生长发育过程中所需需各种矿质元素按一定比各种
11、矿质元素按一定比例配成营养液例配成营养液，并利用这，并利用这种营养液种营养液栽培植物栽培植物水水、矿质元素矿质元素、蔗糖蔗糖、维生素维生素、有机添加物有机添加物和和植物激素植物激素等等水水、无机盐无机盐、碳源碳源、氮源氮源（异养微生物（异养微生物还加生长因子）还加生长因子）等等水水、必需矿质元素必需矿质元素严格控制无菌操作严格控制无菌操作，在培养，在培养过程中要过程中要更换培养基更换培养基，调节，调节细胞分裂素和生长素的比细胞分裂素和生长素的比例例和和添加顺序添加顺序。严格控制无菌操作严格控制无菌操作，整个培养过程整个培养过程无无需更换培养基需更换培养基适宜的环境条件，基质垫适宜的环境条件，基
12、质垫底并固定幼苗，底并固定幼苗，不需要保不需要保证无菌条件，证无菌条件，注意溶氧和注意溶氧和矿质元素的浓度矿质元素的浓度。第9页，此课件共52页哦3.3.下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的有关说法中，下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的有关说法中，不正确的是不正确的是（）A A 微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需更换培养基微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需更换培养基B B 植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植物植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植物组织培养不需要组织培养不需要C C 三者都需要加入
13、水、矿质元素和一些必要的有机物三者都需要加入水、矿质元素和一些必要的有机物D D 三者培养的目的和原理各不相同三者培养的目的和原理各不相同第10页，此课件共52页哦1.加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌 2.加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌3.不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌4.不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物5.如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？加入伊红加入伊红-美蓝试剂
14、，如果菌落出现深紫色并美蓝试剂，如果菌落出现深紫色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。第11页，此课件共52页哦【配对练习 2】关于配制培养基的叙述中，正确的是()A制作固体培养基必须加入琼脂B加入青霉素可得到放线菌C培养自生固氮菌不需氮源D发酵工程一般用半固体培养基解析：固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用液体培养基；自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故培养基配制时不需加氮源。答案：C第12页，此课件共52页哦(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，概念：防止一
15、切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。称为无菌技术。注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是_，_。(2)无菌技术的具体内容无菌技术的具体内容对实验操作的对实验操作的_、操作者的、操作者的_进行清洁和消毒。进行清洁和消毒。将用于微生物培养的将用于微生物培养的_、接种用具和培养基等进行、接种用具和培养基等进行_。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。进行。实验操作时应避免已实验操作时应避免已_处理的材料用具与周围的物品相接触。处理的材料用具与周围的物品相接触。
16、(3)消毒和灭菌的概念消毒和灭菌的概念消毒：消毒是指使用消毒：消毒是指使用_的物理或化学方法杀死物体表面或内部的的物理或化学方法杀死物体表面或内部的_(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)。灭菌：灭菌是指使用灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外_，包括，包括_。消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。2无菌技术无菌技术防止杂菌污染防止杂菌污染保证培养的纯度保证培养的纯度空间空间衣着和手衣着和手器皿器皿灭菌灭菌酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近灭菌灭菌较温和较温和部分微生物部分微生物强烈强烈所有的微生物所有的微生物芽孢和孢子芽孢和孢子芽孢和孢子
17、是否存活芽孢和孢子是否存活第13页，此课件共52页哦拓展深化拓展深化某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从
18、不孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。(4)消毒与灭菌的常用方法消毒与灭菌的常用方法方法条件作用对象消毒100，煮沸56 min杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢7075煮30 min或80煮15 min不耐高温的液体（如牛奶）70%的酒精对双手消毒50%的石炭酸、来苏水对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30 min物体表面或空气中的微生物煮沸法煮沸法巴氏消毒巴氏消毒法
19、法化学药化学药剂法剂法第14页，此课件共52页哦灭菌在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌在干热灭菌箱内，160170条件下，加热12 h耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等在高压蒸汽灭菌锅内，121，100 kPa，灭菌1530 min30 W照射30 min小型接种室、接种箱等紫外线灭紫外线灭菌菌灼烧灭灼烧灭菌菌干热干热灭菌灭菌高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌(一一)配制培养基配制培养基1配制原则配制原则(1)_(根据微生物的种类、培养目的等根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成；，如培养基可由简单的无机物组成；生
20、产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。入已知化学成分的物质。(2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。，注意各种营养物质的浓度和比例。(3)_，各种微生物适宜生长的，各种微生物适宜生长的pH范围不同，细菌范围不同，细菌6.57.5、放线菌、放线菌7.58.5、真菌真菌5.06.0。二、实验操作二、实验操作目的要明确目的要明确营养要协调营养要协调pH要适宜要适宜第15页，此课件共52页哦判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择
21、合适方法。合适方法。（1 1）豆浆）豆浆 （2 2）游泳池）游泳池 （3 3）超净工作台超净工作台 （4 4）玻棒、）玻棒、试管、吸管、锥形瓶试管、吸管、锥形瓶 （5 5）培养细菌用）培养细菌用的培养皿的培养皿 （6 6）无菌水）无菌水 （7 7）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基（8 8）接种针和接种环）接种针和接种环 （9 9）实验操作者的双手）实验操作者的双手灭菌（灼烧）灭菌（灼烧）消毒（巴氏）消毒（巴氏）消毒（化学）消毒（化学）消毒（先化学后紫外线）消毒（先化学后紫外线）消毒（化学）消毒（化学）消毒（化学）消毒（化学）灭菌（干热）灭菌（干热）灭菌（高压蒸汽）灭菌（高压蒸汽）灭菌（高
22、压蒸汽）灭菌（高压蒸汽）第16页，此课件共52页哦)【例 3】下列操作与灭菌无关的是(A接种前用火焰灼烧接种环B接种前用酒精擦拭双手C接种在酒精灯火焰旁完成D将平板倒置，放入培养箱中培养无菌操作是微生物培养的必要前提，学生必须树立“无菌概念”。前三项都是无菌操作的规范要求，第四项将平板倒置(为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基中，造成污染)，放入培养箱中培养与灭菌无关。【答案】：D第17页，此课件共52页哦注意注意不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。营养物质浓度过低不能满
23、足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例如，的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4 1时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为源与氮源的比为3 1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。时，菌体繁殖
24、受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法配制方法(以制以制备备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨固体培养基固体培养基为为例例)培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0 g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0 g氮源和维生素NaCl 5.0 g无机盐H2O定容至1 000 mL氢元素、氧元素琼脂(1)培养异养菌的牛肉膏蛋白培养异养菌的牛肉膏蛋白胨胨固体培养基的固体培养基的营营养构成养构成第18页，此课件共52页哦(2)实验流程实验流程倒平板倒平板计算计算称量称量溶化溶化调节调节pH分装分装灭菌灭菌先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量纸；先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；
25、加琼再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏水至脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏水至100100毫升。毫升。第19页，此课件共52页哦合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温温12 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。提醒提醒4下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是()A培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化
26、后，直接补充蒸馏水至100 mLB培养基配制完毕可直接使用培养基配制完毕可直接使用C加压至加压至100 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气之前，要彻底排出锅内的冷空气D将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个
27、大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。大肠杆菌。(二二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌第20页，此课件共52页哦1微生物接种的方法微生物接种的方法微生物接种的方法最常用的是微生物接种的方法最常用的是_和和_两种。两种。(1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。将将_放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。将试管口通过酒精灯的将
28、试管口通过酒精灯的_。将已冷却的接种环伸入菌液中，将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。一环菌液。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。_将培养皿皿盖打开一条缝隙，将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的接种环迅将沾有菌种的接种环迅速伸入速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将重复以上操作，在三、四、五
29、区域内划线。注意不要将_的划的划线与线与_相连。相连。将将_，放入培养箱中培养。，放入培养箱中培养。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法接种环接种环棉塞棉塞火焰火焰沾取沾取左手左手右手右手平板内平板内最后一区最后一区第一区第一区平板倒置平板倒置第21页，此课件共52页哦(2)_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作系列稀释操作a取盛有取盛有9 mL水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按10110
30、6的顺序编号。的顺序编号。b用用_吸取吸取1 mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。c从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，倍稀释的试管内吹吸均匀，获得获得102倍液。依此类推。倍液。依此类推。涂布平板操作涂布平板操作a将将_浸在盛有酒精的烧杯中。浸在盛有酒精的烧杯中。b取不超过取不超过0.1 mL的的_，滴加到培养基表面。，滴加到培养基表面。c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上
31、引燃，待酒精燃尽后，冷却将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s。d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。使菌液分布均匀。稀释涂布平板法稀释涂布平板法移液管移液管涂布器涂布器菌液菌液第22页，此课件共52页哦2注意事项注意事项(1)平板划线法平板划线法操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_，划线操，划线操作结束时，仍需灼烧作结束时，仍需灼烧_。从第二次以后的划线操作总是从从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目随
32、着划线次数开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落(2)稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_”，应特别注意：，应特别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要在酒精灯火焰周围使用。吸管要在酒精灯火焰周围使用。3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价(1)培养未接种培养基的作用是对照培养未接种培养基的作用
33、是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。(2)在肉汤培养基上，在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。(3)培养培养12 h和和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。(4)频繁使用的菌种利用频繁使用的菌种利用临时保藏法临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是保存，长期保存菌种的
34、方法是甘油管藏法甘油管藏法。前者利用。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第冰箱中，第36个月转种培养一次，缺点是保存时间个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在20的冷冻的冷冻箱中。箱中。火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌接种环接种环上一次划线末端上一次划线末端无菌无菌第23页，此课件共52页哦4菌种的保存菌种的保存为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我
35、们可以采用以采用_法；对于需要长期保存的菌种，可以采用法；对于需要长期保存的菌种，可以采用_法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是_，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种时保存的菌种_个月后需重新接种。个月后需重新接种。4有关平板划线操作的叙述，不正确的是有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结
36、束后，接种环上的菌种的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者菌污染环境和感染操作者临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏降低微生物的新陈代谢速率降低微生物的新陈代谢速率36第24页，此课件共52页哦一、选择题一、选择题1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛
37、肉膏连同称量纸一同放入烧杯将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至待培养基冷却至50左右时左右时进行倒平板进行倒平板D待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约510 min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置2金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是毒，下述实验结束后的做法错误的是()A对接种环进行灼烧处理对接种环进行灼烧处理B带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉倒掉C带菌培养基必须经加热后才能倒掉带菌培养基必须经加热后才能
38、倒掉D接种后双手必须经肥皂洗净，再用接种后双手必须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭的酒精棉球擦拭3防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是下列叙述错误的是()A实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌第25页，此课件共52页哦C在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防
39、止被微生物感染防止被微生物感染D使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境4下列叙述错误的是下列叙述错误的是()A右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近火焰附近B倒平板整个过程应在火焰旁进行倒平板整个过程应在火焰旁进行C打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖上培养皿的皿盖D为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置5
40、有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是()A用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀B移液管需经过灭菌移液管需经过灭菌C试管口与移液管应在离火焰试管口与移液管应在离火焰12 cm处处D涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀第26页，此课件共52页哦6以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是A计计算算
41、称量称量倒平板倒平板溶化溶化灭菌灭菌B计算计算称量称量溶化溶化倒平板倒平板灭菌灭菌C计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板D计算计算称量称量灭菌灭菌溶化溶化倒平板倒平板7为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温对于需要长期
42、保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法保藏的方法8有关平板划线操作的叙述，正确的是有关平板划线操作的叙述，正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可行线即可第27页，此课件共52页哦D最后将平板倒置，放入培养箱中培养最后将平板倒置，放入培养箱中培养二、简答题二、简答题9某学校打算开辟一块食用菌栽培
43、基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：菌菌种。请回答下列问题：(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：原料：_、_、_、_、_。其中提供氮源的是。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物
44、质是；提供碳源的主要物质是_。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合适的微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合适的_。在烧杯中加入琼脂后要不停地在烧杯中加入琼脂后要不停地_，防止，防止_。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入勒紧放入_中灭菌，压力中灭菌，压力_kPa，温度，温度_，时间，时间_。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞时，将试管取出。如果
45、棉塞上沾有培养基，此试管上沾有培养基，此试管_。(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空，把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。气彻底排出后将锅密闭。(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_(“内内”或或“外外”)焰灭菌，焰灭菌，并且待接种环并且待接种环_后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放入后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放入_冰箱中保藏。冰箱中保藏。牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨水水
46、无机盐无机盐琼脂琼脂蛋白胨蛋白胨琼脂糊底引起烧杯破裂琼脂糊底引起烧杯破裂比例比例搅拌搅拌废弃废弃高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅1001211530 min适量水适量水外外冷却冷却4第28页，此课件共52页哦10下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答：试剂用量牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 gNaCl5.0 g琼脂20.0 g水1 000 mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配方中能培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配
47、方中能充当碳源的成分是充当碳源的成分是_和和_。培养基配制完成以后，一般还要调节。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培并对培养基进行养基进行_处理。处理。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和和_两种。在接种两种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是_。(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域前没有菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时
48、，划下一个区域前没有对接种针进行灭菌处理对接种针进行灭菌处理牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨灭菌灭菌平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法蘸取酒精；引燃灭菌蘸取酒精；引燃灭菌第29页，此课件共52页哦目标导航目标导航1.研究培养基对微生物的选择作用。研究培养基对微生物的选择作用。2.进行微生物数量的测定。进行微生物数量的测定。第第2课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数一、研究思路一、研究思路1筛选菌株筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于人为提供有利于_生长的条件生长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pH等等)，同时
49、，同时_或或_其他微生物生长。其他微生物生长。(2)选择培养基选择培养基在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许_种类的微生物生长，同时种类的微生物生长，同时_或或_其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。目的菌株目的菌株抑制抑制阻止阻止特定特定抑制抑制阻止阻止第30页，此课件共52页哦(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基分离分解尿素的细菌的选择培养基在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是_，提，提供氮源的是供氮源的是_，琼脂的作用是凝固剂。，琼脂的作用是凝固剂。该培养基对微生物具有选择作用。其选
50、择机制是该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是_才能在该培养基上生长。才能在该培养基上生长。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成_，将，将尿素分解的反应式是尿素分解的反应式是_。Taq细菌能忍受细菌能忍受93左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据_。2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法(也叫活菌计数法也叫活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一