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1、关于高中生物微生物的培养与应用现在学习的是第1页，共29页1.概念：概念：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物 的总称。的总称。2.2.分类分类细胞结构细胞结构核结构核结构 微生物类群微生物类群无细胞无细胞结构结构无核无核病毒、亚病毒（拟病毒、类病病毒、亚病毒（拟病毒、类病毒、朊病毒）毒、朊病毒）有细胞有细胞结构结构原核原核古细菌、真细菌、古细菌、真细菌、放线菌、蓝细菌放线菌、蓝细菌真核真核酵母菌、霉菌、酵母菌、霉菌、藻类、原生动物藻类、原生动物知识点一：知识点一：微生物简介微生物简介现在学习的是第2页，共29页图图1-1 1-1 常见的三种细菌典型形态常见
2、的三种细菌典型形态 A.A.球菌球菌 B.B.杆菌杆菌 C.C.弧菌弧菌细菌细菌现在学习的是第3页，共29页真菌真菌酵母菌酵母菌青霉青霉毛霉毛霉蘑菇蘑菇灵芝灵芝木耳木耳现在学习的是第4页，共29页芽孢：芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里形成一个椭圆形的休眠体，有些细菌在一定的条件下，细胞里形成一个椭圆形的休眠体，叫做叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水芽孢
3、又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.现在学习的是第5页，共29页菌落：菌落：单个或少数细菌在固体单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌的子细胞群体，叫做菌落落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。现在学习的是第6页，共29页1 1培养基的类型及作用培养基的类型及作用培养基的类型及作用培养基的类型及作用划分划分划分划分标标标标准准准准培养基种培养基种培养基种培养
4、基种类类类类特点特点特点特点用途用途用途用途物理性物理性物理性物理性质质质质液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基不加凝固不加凝固不加凝固不加凝固剂剂剂剂工工工工业业业业生生生生产产产产半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基加凝固加凝固加凝固加凝固剂剂剂剂，如，如，如，如琼琼琼琼脂脂脂脂观观观观察微生物的运察微生物的运察微生物的运察微生物的运动动动动、分、分、分、分类鉴类鉴类鉴类鉴定定定定固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基微生物的分离、微生物的分离、微生物的分离、微生物的分离、鉴鉴鉴鉴定、活菌定、活菌定、活菌定、活菌计计计计数、数、数、数、保藏菌种保藏菌种保藏菌种保藏菌种化学
5、成分化学成分化学成分化学成分天然培养基天然培养基天然培养基天然培养基含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质质质工工工工业业业业生生生生产产产产合成培养基合成培养基合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分用化学成分用化学成分用化学成分已知的化学物已知的化学物已知的化学物已知的化学物质质质质配成配成配成配成)分分分分类类类类、鉴别鉴别鉴别鉴别用用用用 途途途途选择选择选择选择培养基培养基培养基培养基允允允允许许许许特定种特定种特定种特定种类类类类的微生物生的微生物生的微生物生的微生物生长长
6、长长，同同同同时时时时抑制或阻止其他微生物抑制或阻止其他微生物抑制或阻止其他微生物抑制或阻止其他微生物生生生生长长长长培养、分离出特定微生物，如培养培养、分离出特定微生物，如培养培养、分离出特定微生物，如培养培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入酵母菌和霉菌，可在培养基中加入酵母菌和霉菌，可在培养基中加入酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高在培养基中加入高在培养基中加入高在培养基中加入高浓浓浓浓度食度食度食度食盐盐盐盐 鉴别鉴别鉴别鉴别培养基培
7、养基培养基培养基根据微生物的代根据微生物的代根据微生物的代根据微生物的代谢谢谢谢特点，在特点，在特点，在特点，在培养基中加入某种指示培养基中加入某种指示培养基中加入某种指示培养基中加入某种指示剂剂剂剂或或或或化学化学化学化学药药药药品品品品鉴别鉴别鉴别鉴别不同种不同种不同种不同种类类类类的微生物，如用伊的微生物，如用伊的微生物，如用伊的微生物，如用伊红红红红美美美美蓝蓝蓝蓝培养基培养基培养基培养基鉴别饮鉴别饮鉴别饮鉴别饮用水或乳制品用水或乳制品用水或乳制品用水或乳制品中是否有大中是否有大中是否有大中是否有大肠肠肠肠杆菌杆菌杆菌杆菌(若有，菌落呈深若有，菌落呈深若有，菌落呈深若有，菌落呈深紫色，
8、并紫色，并紫色，并紫色，并带带带带有金属光有金属光有金属光有金属光泽泽泽泽)知识点二：知识点二：培养基培养基现在学习的是第7页，共29页pHpH要适宜：要适宜：细菌细菌pHpH为为6.56.57.5;7.5;放线菌放线菌pHpH为为7.57.58.5;8.5;真菌真菌;pH5.0;pH5.06.06.0培养基的营养物质培养基的营养物质 不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无无机盐机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊特殊营养物质营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不即
9、细菌生长必需，而自身不能合成的化合物能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求。等的要求。现在学习的是第8页，共29页营养物质营养物质作用作用举例举例碳源碳源提供碳元素（有机碳源还能提供提供碳元素（有机碳源还能提供能量）能量）无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3 有机碳源：糖类、脂肪酸、有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油花生粉饼、石油氮源氮源提供氮元素，主要用于合成蛋白提供氮元素，主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物质、核酸以及含氮的代谢产物分子态氮、氨、铵盐、硝
10、酸分子态氮、氨、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨等等生长因子生长因子微生物生长不可缺少的微量有机微生物生长不可缺少的微量有机物，一般是酶和核酸的组成成分。物，一般是酶和核酸的组成成分。主要包括维生素、氨基酸和主要包括维生素、氨基酸和碱基等碱基等无机盐无机盐细胞内的组成成分，生理调节物细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂的激活剂,包括大量元素和微量元包括大量元素和微量元素素水水在生物体内含量很高，在低等生在生物体内含量很高，在低等生物内含量更高物内含量更高培养基的营养物质及作用培养基的营养物质及作用现在学习的是第9
11、页，共29页1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。（成功的关键）（成功的关键）知识点三：知识点三：无菌技术无菌技术现在学习的是第10页，共29页2.2.消毒与灭菌消毒与灭菌现在学习的是第11页，共29页现在学习的是第12页，共29页现在学习的是第13页，共29页1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否
12、需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。物感染。（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。思考：思考：现在学习的是第14页，共29页 高浓度酒精能将细菌表面的蛋白质凝高浓度酒精能将细菌表面的蛋白质凝固，并形成一层保护膜，固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细阻止酒精进入细菌体内，因而
13、不能将细菌彻底杀死。菌体内，因而不能将细菌彻底杀死。酒精浓度低于酒精浓度低于70%70%，虽可进入细菌体内，虽可进入细菌体内，但不能将细菌彻底杀死。但不能将细菌彻底杀死。只有只有70%-75%70%-75%的的酒精即能顺利地进入到细菌体内，又能有酒精即能顺利地进入到细菌体内，又能有效地将细菌体内的蛋白质凝固，因而可彻效地将细菌体内的蛋白质凝固，因而可彻底杀死细菌。底杀死细菌。3.3.利用酒精消毒时，酒精浓度是不是越高越利用酒精消毒时，酒精浓度是不是越高越好？好？现在学习的是第15页，共29页知识点四：知识点四：制备牛肉膏蛋白胨制备牛肉膏蛋白胨 固体培养基固体培养基现在学习的是第16页，共29页
14、 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项:(1)(1)步骤：计算步骤：计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒倒平板平板 (2)(2)(2)(2)注意事项注意事项注意事项注意事项:倒平板的温度一般在倒平板的温度一般在倒平板的温度一般在倒平板的温度一般在50505050左右适宜，温度过高会烫左右适宜，温度过高会烫左右适宜，温度过高会烫左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。手，过低培养基又会凝固。手，过低培养基又会凝固。手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠
15、落入培养基，造成污染。地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。现在学习的是第17页，共29页 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染答：通过灼烧灭菌，防
16、止瓶口的微生物污染培养基。培养基。现在学习的是第18页，共29页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的
17、水珠落入培养基，造成污染。止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。生物。现在学习的是第19页，共29页微生物的接种技术：微生物的接种技术：接种接种：将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌：将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上的过程。的培养基上的过程。平板划线接种平板划线接种：主要用于：主要用于分离分离、纯化纯化培养培养稀释涂布接种：主要用于稀释涂布接种：主要用于分离分离菌种并菌种并计数计数知识点五：知识点五：大肠杆菌的
18、纯化大肠杆菌的纯化现在学习的是第20页，共29页 纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项：纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项：纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项：纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项：(1)(1)(1)(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)
19、(2)(2)(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分
20、，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。的单个菌落。的单个菌落。的单个菌落。(如下图如下图如下图如下图)现在学习的是第21页，共29页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避
21、免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避
22、免细菌污染环境和感染操作者。避免细菌污染环境和感染操作者。现在学习的是第22页，共29页 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？么总是从上一次划线的末端开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目能使细菌的数目随着划线次
23、数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。菌繁殖而来的菌落。现在学习的是第23页，共29页稀释涂布平板法稀释涂布平板法现在学习的是第24页，共29页现在学习的是第25页，共29页现在学习的是第26页，共29页涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步步应如何进行无菌操作？应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不
24、要接触酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。现在学习的是第27页，共29页（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点
25、，则说明接种操作是符合要求并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。课题成果评价课题成果评价 现在学习的是第28页，共29页感谢大家观看现在学习的是第29页，共29页