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1、关于发酵过程优化原理第一张，PPT共四十五页，创作于2022年6月微生物是发酵工业的灵魂活细胞体内含有大量不同的化合物和代谢物，其中水是含量最多的组分，约占细胞物质总量的70%细胞质量的其余部分，主要包括大分子DNA，RNA，蛋白质，脂类及碳水化合物这些大分子合成和组织成一个功能细胞。微生物细胞生长是细胞个体内许多化学反应的综合结果。这些反应可分为如下几类：供能反应、生物合成反应、聚合反应、组装反应 一一.发酵过程优化的微生物反应原理发酵过程优化的微生物反应原理1.1.概述概述第二张，PPT共四十五页，创作于2022年6月2(1)在大肠杆菌快速生长期间，生物合成的中间体很少渗漏到胞外培养基中，
2、结构单元(氨基酸、核酸等)的合成速率和聚合形成大分子的速率一致(2)大肠杆菌胞内的大分子物质随比生长速率而变化(3)一旦生长培养基中的结构单元足够，细胞就不再合成这些物质(4)特定的代谢途径代谢特定的底物，只有底物存在时，细胞才合成相应的酶(5)若两个不同的底物同时存在于培养基中，细胞先合成能在一种底物上以较高比生长速率生长的酶系，当这种底物消耗完毕，再合成利用另一底物的酶大肠杆菌生长过程中观察到下列现象大肠杆菌生长过程中观察到下列现象第三张，PPT共四十五页，创作于2022年6月3(1)底物传递进入细胞(2)通过胞内反应，将底物转变为细胞质和代谢产物(3)代谢产物排泄进入非生物相，即胞外培养
3、基2.2.细胞生长过程可分为三个步骤：细胞生长过程可分为三个步骤：第四张，PPT共四十五页，创作于2022年6月43.3.底物、代谢产物和细胞质成分的定义为：底物、代谢产物和细胞质成分的定义为：底物是一种存在于初始非生物相或者摄入物中起作用的可交换的化合物代谢产物是一种作为代谢物产生于某代谢途径进入非生物相的化合物细胞质成分是一种细胞利用底物产生的不可交换的化合物(不能穿过细胞膜的物质)第五张，PPT共四十五页，创作于2022年6月5研究表明在膜上可能存在三种不同的运输机制：(1)自由扩散(2)协助扩散(3)主动运输 前两种机制是沿着浓度梯度进行运输，是被动的过程，在运输过程中不需要提供外部能
4、量。而主动过程逆着浓度梯度进行运输，需要输入一定的吉布斯自由能。第六张，PPT共四十五页，创作于2022年6月6 微生物体内不同底物和代谢产物的扩散过程第七张，PPT共四十五页，创作于2022年6月74.微生物细胞的胞内反应(1)分解代谢反应 糖类在转化为代谢产物(CO2、乳酸、乙酸和乙醇等)的同时，还形成ATP、NADH和NADPH。NADH和NADPH都在分解代谢反应中产生，但NADPH主要消耗于合成代谢中，NADH则主要消耗于分解代谢途径，如氧化磷酸化(2)生物合成和聚合反应 为了合成细胞物质，需要合成结构单元并将其聚合。合成蛋白质需消耗大量的自由能，细胞一般根据其自身需求来调节蛋白质的
5、合成,其合成由蛋白质合成系统(PSS)负责，该系统中核糖体是主要部分 E.coli中大约70%的能量和还原力用于合成蛋白质第八张，PPT共四十五页，创作于2022年6月8合成E.coli细胞对前体代谢物的需求 细胞合成所需要的结构单元数在75100之间，这些物质都是从12种前体代谢物合成得到的，这些前体代谢物就是分解代谢反应的中间产物，因此分解代谢在细胞生长过程中起着双重的作用(为生物合成提供能量和前体代谢物)第九张，PPT共四十五页，创作于2022年6月9第十张，PPT共四十五页，创作于2022年6月10细胞代谢和生长过程偶联在一起的过程，称之为初级代谢但许多工业上重要的产品，其合成反应并不
6、与生长过程偶联，我们称之为次级代谢，这些反应合成的产物叫次级代谢产物，就象初级代谢形成的产物叫初级代谢产物一样乳酸是初级代谢产物，但它是乳酸菌在非生长条件下形成的，许多其它的初级代谢产物也同样是在非生长条件下产生的(3)次级细胞代谢第十一张，PPT共四十五页，创作于2022年6月11初级代谢产物初级代谢产物定义为“在细胞生长所需要的反应中形成的产物”可能比较确切一些次级代谢产物次级代谢产物定义为“在那些对于细胞生长不重要的反应中形成的产物”第十二张，PPT共四十五页，创作于2022年6月12一些工业上重要的初级和次级代谢产物一览第十三张，PPT共四十五页，创作于2022年6月13二二.发酵过程
7、数量化方法发酵过程数量化方法发酵过程的数量化处理包括：1.发酵过程的速度 2.化学计量学和热力学 3.生产率、转化率和产率 只有当变量可测量时，才有可能对发酵过程进行数量化处理第十四张，PPT共四十五页，创作于2022年6月141.1.发酵过程的速度发酵过程的速度发酵过程的速度概念第十五张，PPT共四十五页，创作于2022年6月15发酵过程常规的参数及其测量第十六张，PPT共四十五页，创作于2022年6月16菌体生长速度为 氧和底物利用速度为 P、C和Hv生成速度为:第十七张，PPT共四十五页，创作于2022年6月17细胞生长的比速率为：底物消耗的比速率为qs 产物形成的比速率为qP：第十八张
8、，PPT共四十五页，创作于2022年6月18 氧消耗的比速率为qo：二氧化碳生成的比速率为qc：发酵热生成的比速率qHv：第十九张，PPT共四十五页，创作于2022年6月19 化学计量学主要研究有关加工过程中反应组分组成的变化规律。化学计量方程是活细胞内成百个代谢反应综合起来的总方程。表示通用化了的碳源 根据元素分析得出的细胞组成 表示产物 在使用化学计量方程进行宏观处理时，并不需要了解这些循环的详细情况，这样可使发酵过程的分析不太复杂，而又不失去重要的信息。2.化学计量学第二十张，PPT共四十五页，创作于2022年6月20 3.产率系数 宏观产率系数(或称得率系数)Yi/j是化学计量学中一种
9、非常重要的参数，常用于对碳源等底物形成菌体或产物的潜力进行评价，其中i表示菌体或产物，j表示底物 例如，菌体对底物的产率系数可表示为：(1)(1)宏观产率系数宏观产率系数第二十一张，PPT共四十五页，创作于2022年6月21生物反应过程中宏观产率系数的定义第二十二张，PPT共四十五页，创作于2022年6月22有时，以摩尔为单位表示产率系数更有利：相似的概念可用于表达重要的常数：值在实践中对推导元素平衡方程很重要，对与氧化磷酸化有关的理论问题也有重要意义第二十三张，PPT共四十五页，创作于2022年6月23 假设发酵过程中完全没有菌体生成，则YP/S可达理论最高值，称为理论代谢产物产率（a）根据
10、化学计量关系计算 例如，由葡萄糖、氨和氧生成谷氨酸的化学计量方程为 依此计算 =147/180=0.82(g/g)此处没有考虑反应过程中NADH及ATP等辅助底物的生成和消耗(2)(2)理论代谢产物产率理论代谢产物产率第二十四张，PPT共四十五页，创作于2022年6月24（b）由生物化学计量关系计算 根据由底物生成目标代谢产物的代谢途径，进行代谢过程中有关NAD(P)+和ATP等辅底物的物料衡算，结合化学计量关系可求出上式：由该反应式得 =(14712)/(13180)=0.75(g/g)由于NADPH和ADP的再生过程要消耗底物，故依这种方法求得的值要小于单纯依据化学计量关系求得的结果。用生
11、化计量式时,必须清楚有关的代谢途径!第二十五张，PPT共四十五页，创作于2022年6月25(3)(3)实际发酵过程中的产率系数实际发酵过程中的产率系数在实际发酵中，产率是变化的，产率取决于下列因素：Y=f(菌株、底物、m、；t、tm、OTR、C/N，P/O)式中m为混合度，S为底物浓度，t为平均滞留时间，tm为混合时间，OTR为氧传递速度，C/N为碳氮比，P/O为磷氧比第二十六张，PPT共四十五页，创作于2022年6月26三三.微生物反应动力学微生物反应动力学1.被摄入到微生物细胞内的底物中，一部分转化为代谢产物，还有一部分则转化为新生细胞的组成物质。因此，对微生物反应动力学进行研究，至少要对
12、底物、菌体和产物三个状态变量进行数学描述2.微生物反应是很多种物质参与的复杂代谢过程的综合结果。因此，微生物反应的动力学方程只能通过数学模拟得到第二十七张，PPT共四十五页，创作于2022年6月273.进行数学模拟的难点在于细胞的生长、繁殖代谢是一个复杂的生物化学过程，该过程既包括细胞内的生化反应，也包括胞内与胞外的物质交换，还包括胞外的物质传递及反应4.为了优化反应过程，首先要进行合理的简化，在简化的基础上建立过程的物理模型，再据此推导得出数学模型。第二十八张，PPT共四十五页，创作于2022年6月28微生物反应动力学模型的分类第二十九张，PPT共四十五页，创作于2022年6月29（一）细胞
13、生长动力学模型1.无抑制作用的细胞生长动力学温度和pH恒定时，对于某一特定培养基组分的浓度s，Monod方程为式中:max称为最大比生长速率(h-1)，Ks称为半饱和常数(g/L),S为限制性底物浓度。底物消耗速率方程对应为第三十张，PPT共四十五页，创作于2022年6月30Monod方程应满足(1)菌体生长为均衡型非结构生长；(2)培养基中只有一种底物是生长限制性底物；(3)菌体产率系数恒定第三十一张，PPT共四十五页，创作于2022年6月312.细胞生长稳定期和延迟期的Monod型动力学(1)延迟期动力学模型的建立(2)生长稳定期动力学模型的建立式中和是经验常数，取=max和=xmax第三
14、十二张，PPT共四十五页，创作于2022年6月323.微生物死亡期和内源代谢(1)微生物死亡期的动力学模型 Kd为比死亡速率(h-1)对应于由底物生成菌体的一级反应速率为(2)内源代谢的动力学模型 或：ms为细胞的维持系数(s-1)，Y*X/S为最大细胞产率第三十三张，PPT共四十五页，创作于2022年6月334.底物和产物抑制的动力学模型(1)底物抑制动力学(Andrew底物抑制模型)式中KIS是底物抑制常数(2)产物抑制动力学（Hinshelwood模型）式中，P为产物浓度，k为动力学常数或：式中KIP为产物抑制常数第三十四张，PPT共四十五页，创作于2022年6月34（二）微生物产物形成
15、动力学模型Gaden根据产物生成速率和细胞生长速率之间的关系，将产物形成区分为三种类型类型也称为偶联模型（醇类、葡萄糖酸、乳酸）类型也称部分偶联模型（柠檬酸、氨基酸）类型也称为非偶联模型（抗生素、酶、维生素、多糖）第三十五张，PPT共四十五页，创作于2022年6月35第三十六张，PPT共四十五页，创作于2022年6月36 上述三种类型外还有一种模型是qP与负偶联的模型，例如黑曲霉生产黑色素，其qP与的关系可表示为：当考虑到产物可能存在分解时：式中，kd为产物分解常数第三十七张，PPT共四十五页，创作于2022年6月37Monod方程中参数的求解：方程中参数的求解：微分法微分法 比生长速率计算：
16、比生长速率计算：实验数据实验数据,X-t,S-t,-t线性化线性化,对Monod方程取倒数，可变换为：此两方程可用于计算此两方程可用于计算Monod方程中的参数。方程中的参数。（方程（方程1）（方程（方程2）第三十八张，PPT共四十五页，创作于2022年6月38tX,SS1/SSS/1/1/max-1/KSKS/max1/maxKS/max-KS（方程（方程1）（方程（方程2）第三十九张，PPT共四十五页，创作于2022年6月39计算题计算题1：在一定培养条件下，培养大肠杆菌，测得实验数据如下：在一定培养条件下，培养大肠杆菌，测得实验数据如下：考虑一下如何求出考虑一下如何求出Ks 和的值。和的
17、值。用以上两个公式都可以，如果用以下公式：用以上两个公式都可以，如果用以下公式：则：可先求出则：可先求出s/u，再作出，再作出s/u-s曲线，求出截距和斜率。曲线，求出截距和斜率。S(mg/L)613334064102122153170221 (h-1)0.060.120.240.310.430.530.60.660.690.7第四十张，PPT共四十五页，创作于2022年6月计算可得：计算可得：s/u=0.9414 s+94.351即：即：第四十一张，PPT共四十五页，创作于2022年6月四四.微生物反应优化的一般原理微生物反应优化的一般原理1.1.发酵过程优化的一般步骤发酵过程优化的一般步骤
18、(1)反应过程的简化反应过程的简化 是指把工艺过程的复杂结构压缩为少数系统，这些系统可以用关键变量来表示(2)定量化定量化 系统、准确地检测发酵过程的各种参数(3)分离分离 是指在生物过程和物理过程的各种速度相互不影响的情况下，精心设计实验以获得关于生物和物理现象的数据第四十二张，PPT共四十五页，创作于2022年6月42(4)数学建模数学建模数学模型是能以简化的形式表征过程行为，并实现特定目的的数学公式数学模型可将特定结果通用化，并为推论系统的其它性质提供基础建立数学模型的主要目标是：(a)为了预见任何系统的转化率或生产率；(b)用以检查在各种操作条件下工厂操作的性质和行为，检查模型适用的范围(包括外推性)；(c)用于进行工艺优化和计算机模拟；(d)用于检测出可能重要但被忽视了的参数；(e)检查是否已有效地区分生物现象和物理现象；(f)有助于阐明反应机理第四十三张，PPT共四十五页，创作于2022年6月432.分批微生物反应过程的优化最优化的目标函数：产量、生产率、纯利润等，有时也对这些指标的其中二个以上进行多目标函数优化最优化的操作变量：反应时间、培养基组成、温度、pH、溶氧等培养基组成的优化 预先设定XT为最大菌体浓度，则由可得到底物Si的初始浓度为第四十四张，PPT共四十五页，创作于2022年6月44感谢大家观看第四十五张，PPT共四十五页，创作于2022年6月