《葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.pptx（22页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度1.掌握血糖测定原理，计算方法，参考正常值，临床意义。2.了解尿糖的测定及意义。1.收集耳缘静脉血,制备血浆,葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度。2.收集尿液,班氏法测定。一.实验要求 二.实验内容 血糖（blood glucose,BG）指血浆（清）中的糖类物质，主要为葡萄糖。一.血糖的来源：食物、糖原的分解、糖异生。二.血糖的去路：有氧氧化、转换成非糖物质、尿排出、糖酵解。血糖血糖1.正常血糖浓度:3.9-6.1mmol/L(成年人空腹)低血糖:低于2.8mmol/L高血糖:超过7.8mmol/L2.低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥饿高血糖的因素：进食、情绪
2、紧张时、糖尿病.3.糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等.肾上腺素由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素。肾肾上腺素升高血糖机制：上腺素升高血糖机制：在应激状态、内脏神经刺激和低血糖等情况下，肾上腺素被释放入血液循环，促进糖原分解并升高血糖，促进脂肪分解，促进非糖物质向血糖的转化，使血糖浓度增大。肾上腺素上腺素adrenaline;epinephrine 一、血糖一、血糖测测定定福林-酚试剂法葡萄糖氧化酶法邻甲苯胺法葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶法原理法原理葡萄糖葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GOD）氧化，37oCH2O2 苯酚苯酚 4-氨基安替吡啉氨基安替吡啉H2
3、O 红色红色醌亚胺 +O237oC 辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶（POD）Trinder反应反应溶液在505nm下有吸收峰,可用比色法测定,得出葡萄糖的浓度。标准浓度法A标=KC标LA样=KC样L C样=A样A标 C标【试剂】酶酚混合试剂（PH7.0）5mmol/L葡萄糖标准应用液班氏试剂【器材】试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温水浴、722型分光光度计。实验实验前准前准备备【标本】1.血浆 应在血液采集1小时内尽早分离。具体操作具体操作（1）称重；（2）取血：找到耳缘静脉，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林（有何作用）。用三棱针刺破耳缘静脉放血(自然血流)，将血液收集于草酸钠抗凝管内（边接边摇,以防凝
4、固），取约5ml。离心，2000rpm，10min，取上清，编号；（3）注射激素后再取血:皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重)，记录在注射时间。30min后取血5ml于抗凝管内,离心，2000rpm，10min，取上清，编号。（4）取4支试管，按下表加入试剂:标准标准(ml)正常正常(ml)注射后注射后(ml)空白空白(ml)血清样品血清样品葡萄糖标准液葡萄糖标准液蒸馏水蒸馏水酶酚混合试剂酶酚混合试剂0.023.000.023.000.023.000.023.00 将各管充分混匀，37 水浴中保温15min；取出冷却至室温后，505nm处比色；以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。计算
5、：测定管测定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）测定管光密度测定管光密度 标准管光密度标准管光密度51.注射前后的血糖浓度2.注射后血糖浓度增高率A A肾肾-A-A正正 A A正正 100%增高率增高率 =结果果记录标准标准(ml)正常正常(ml)注射激素后注射激素后(ml)空白空白(ml)A血糖浓度增高率尿糖是指尿中的糖类，主要是指尿中的葡萄糖。正常情况下，肾小管能将肾小球滤过的葡萄糖全部重吸收回血液，当血糖肾糖阈8.96-10.08mmol/L,超过肾小管的重吸收能力,部分葡萄糖随尿排出。尿糖的测定虽然不能单纯作为糖尿病的诊断标准，但是从某种层面上也能反映一些问题。血浆血浆尿糖尿糖尿糖尿
6、糖动脉血血细胞、大分子蛋白质等部分水、无机盐、葡萄糖、维生素、尿素等重吸收近端小管二、二、二、1.班氏定性试验：2.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：反应原理同血糖葡萄糖氧化酶法。尿糖尿糖测定定班氏定性班氏定性试验试验原理：原理：利用葡萄糖或其它还原性物质在碱性高温环境中，将反应液中Cu2+还原为亚铜离子Cu+，形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化亚铜。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。(CHOH)(CHOH)n nCHOCHOCHCH2 2OHOH+2Cu2Cu2+2+4OH4OH-COOHCOOH(CHOH)(CHOH)n nCHCH2 2OHOH+2CuOH+H H2 2O O2
7、CuOHH H2 2O O+CuCu2 2O O醛醛糖糖醛醛糖酸糖酸黄色或黄色或红红色色 操作步骤20滴班氏剂A尿液2滴B尿液2滴煮沸5min煮沸5min葡萄糖含量葡萄糖含量(g/L)试试管管变变化化结结果符号果符号无糖试剂仍清晰呈蓝色，如有多量尿酸存在也可能少许蓝灰色沉淀微量0.5以下仅冷却后有少量绿色沉淀+少量0.51煮沸约1min后，出现少量黄绿色沉淀+中等量12煮沸约15s，即呈土黄色沉淀+多量2以上开始煮时，即呈多量红棕色沉淀 +【注意事项】1.操作到位，取量要准确，吸量管不能混用。2.血清分离后要及时的测定以免影响实验结果。3.试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。不可入口！
8、避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。结果分析三.测定的血糖浓度异常：反应不彻底引起的（偏低）葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低）移液器引起的（偏高或偏低）一.结果可报告范围：本法对葡萄糖的检测范围为0.0622.2 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。二.当样品中抗坏血酸浓度 852 mol/L，胆红素浓度 684 mol/L，血红蛋白浓度 2.00 g/L，甘油三酯浓度 22.6 mmol/L时没有观察到干扰。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第
9、二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚H2O 红色醌式物质红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶（POD）Trinder反反应应【讨论】【思考【思考题】1.为什么要在饥饿条件下采血？血糖主要来源是食物，进食会增高血糖浓度。2.除糖尿病外，若血糖浓度测定结果不正常可考虑哪些原因？注射葡萄糖、饮食、糖代谢疾病、应激反应3.本法测定血糖为何不需制备血滤液？血滤液除蛋白，对血糖测定没有影响。4.为什么取血前要涂凡士林？起润滑，防渗血作用。