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1、可见分光光度法和紫外分光光度法现在学习的是第1页，共20页内容提要1.物质的吸收光谱2.分光光度法基本原理透光率和吸光度LambertBeer定律3.可见分光光度法分光光度计测定方法4.提高测量灵敏度和准确度的方法5.紫外分光光度法简介现在学习的是第2页，共20页教学基本要求n了解光的基本性质及物质对光的选择性吸收。了解吸收光谱的意义。n掌握分光光度法的基本原理，LambertBerr定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数、质量吸光系数等基本概念及相互关系。了解光的加和性。n了解分光光度计的基本构造，熟悉可见分光光度法的测定方法标准曲线法和标准对照法，了解比吸光系数比较法和差示分光光度法。n了解
2、提高测量灵敏度和准确度的方法。n了解紫外分光光度法的一般概念 现在学习的是第3页，共20页第一节 物质的吸收光谱一、物质对光的选择性吸收n光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的基态转为激发态，只有当分子的能量(h)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(E)相等时才能被吸收。M(基态)+h M*(激发态)n物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性地吸收了某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补光。现在学习的是第4页，共20页第一节 物质的吸收光谱现在学习的是第5页，共20页第一节 物质的吸收光谱二、物质的吸收光谱n将不同波长的单色光依次通过有色溶液，测量溶液的吸光度A(absorbance)。n以波长
3、为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，得吸收曲线，或称吸收光谱。n吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用max表示。n一般，max是定性鉴别物质的基础。n不同浓度的溶液，max不变，浓度与峰值成正比，这是进行定量分析的依据。现在学习的是第6页，共20页第一节 物质的吸收光谱n三(邻二氮菲)合铁(II)离子的吸收光谱图 max=510nm不同浓度的溶液，max不变，浓度与峰值成正比。现在学习的是第7页，共20页第二节 分光光度法基本原理一、透光率和吸光度n入射光强度I0，吸收光强度Ia，透过光强度It，反射光强度为IrI0 Ia+It+Irn被测溶液和参比溶液的吸收池同样材料和厚度，反射光强
4、度影响相互抵消，上式简化为I0 Ia+It现在学习的是第8页，共20页第二节 分光光度法基本原理一、透光率和吸光度n透射光的强度It与入射光强度I0之比称为透光率(transmittance)，用T表示n透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。A愈大，溶液对光的吸收愈多。现在学习的是第9页，共20页第二节 分光光度法基本原理二、LambertBeer定律nLambert Beer定律：A=bc 溶液厚度b，单位cm；浓度c，单位molL1；摩尔吸光系数，单位Lmol 1cm1 n若用质量浓度代替cA ab 质量吸光系数a的单位Lg 1cm1 na和可通过下式相互换算 aM 现在学习的是第10页
5、，共20页第三节 可见分光光度法 一、分光光度计 n主要部件 光源 单色光器 检测器 吸收池 讯号处理及显示器n光源：钨灯，发出3203 200nm的连续光谱，n单色光器：以棱镜或光栅分光，提供单色光。n吸收池：分光光度计中用来盛放溶液的容器。n检测器：通过吸收池的光转换为光电流，再经放大输入指示器，然后显示。现在学习的是第11页，共20页第三节 可见分光光度法(a)自准式单色光器示意图(b)棱镜对光的色散作用 现在学习的是第12页，共20页第三节 可见分光光度法 二、测定方法1.标准曲线法 n取系列浓度标准溶液，测定吸光度A，作吸光度A对溶液浓度c的图，得过坐标原点的直线。n在相同条件下，测
6、量被测溶液的吸光度，在标准曲线上查得溶液浓度。维生素B12的标准曲线 现在学习的是第13页，共20页第三节 可见分光光度法 二、测定方法2.标准对照法 n预先配制一个与待测液浓度相接近的标准溶液(其浓度用cs表示)，测得其吸光度为As，再测定待测液的吸光度Ax，则待测液浓度cs可从下式求得 现在学习的是第14页，共20页第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法一、分光光度法的误差1.溶液偏离Beer定律 n偏离Beer定律，A-c曲线弯曲。主要原因：化学因素 吸光物质发生解离、缔合、溶剂化等现象；光学因素 复色光引起对Beer定律的偏离。两种不同吸光系数的混合光对Beer定律的偏离 现在学习的是第
7、15页，共20页第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法一、分光光度法的误差2.仪器测定误差 n光电管灵敏性差、光源不稳定及读数不准。n透光率误差T引起浓度误差c：n透光率20%65%，A为0.20.7时，浓度相对误差较小。测量误差和透光率的关系 现在学习的是第16页，共20页第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法三、选择合适的测定条件n波长的选择n显色剂的用量n溶液的酸度n显色时间和温度n共存离子的干扰及其消除现在学习的是第17页，共20页第五节 紫外分光光度法简介 一、751G型分光光度计n紫外分光光度法适用测定在近紫外区(200380nm)有特征吸收的物质。n751G型分光光度计装有可转换的适
8、用于可见分光光度法的钨灯光源和适用于紫外分光光度法的氢(氘)灯光源(发射200400nm)。n紫外光不能透过玻璃，故紫外分光光度计中棱镜、透镜、氢灯和光电管以及吸收池等均须用石英制造。现在学习的是第18页，共20页第五节 紫外分光光度法简介 751G分光光度计光学系统简图1.钨灯 2.氢灯 3.凹面反射镜 4.平面镜 5.狭缝 6.准直镜7.石英棱镜 8.透镜 9.吸收池 10.蓝敏光电管 11.红敏光电管 现在学习的是第19页，共20页第五节 紫外分光光度法简介 二、紫外分光光度法的应用1.定性鉴别比较max、(max)或a(max)比较吸光度(或吸光系数的比值)2.定量测定3.有机化合物的结构研究现在学习的是第20页，共20页