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1、植物植物组织培养技培养技术 不可育，异源二倍体，减数分裂不可育，异源二倍体，减数分裂联会紊乱，会紊乱，不会不会产生正常配子。但体生正常配子。但体细胞胞杂交可以，因交可以，因为是异源四倍体。是异源四倍体。书本书本P66 P66 复习与提高复习与提高 第第1 1题题产生特定抗体的生特定抗体的B淋巴淋巴细胞胞 既能无限增既能无限增值，又能，又能产生抗肝病毒生抗肝病毒的的专一抗体一抗体M期获能能第第3 3章章 基因工程基因工程第第1 1节节 重组重组DNADNA技术的基本工具技术的基本工具第第3 3章章 基因工程基因工程 上个世纪90年代以来，由于棉铃虫在我国大部分棉区持续性大发生或爆发，给棉花生产带
2、来了巨大的威胁，棉农谈“虫”色变，仅1992年一年即造成直接经济损失60多亿元，间接损失超过100亿元，对整个国民经济发展造成了很大影响。同时由于棉铃虫的大爆发，防虫治虫使棉花的生产成本增加，植棉的比较效益降低。1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。郭三堆和他的抗虫棉郭三堆和他的抗虫棉一、基因工程及其诞生与发展1基因工程概念的理解 (1)操作场所：_。(2)操作技术：_等技术，又叫重组DNA技术。(3)操作结果：赋予生物新的_，创造出更符合人们需要的 新的_和生物产品。(4
3、)操作水平：_水平。(5)原理：。生物体外转基因遗传特性生物类型DNA分子基因重组（广义）2基因工程的诞生和发展 （书本68-69，课后拓展阅读）基因工程基因工程 在培育转基因抗虫棉时，首先要在体外对含有需要基因的DNA分子进行“切割”、改造和“拼接”；然后将重组DNA分子导入到棉花的细胞中，并使其在细胞中表达。实现这一精确的操作过程至少需要三种”分子工具“分子运输车“”分子手术刀“分子缝合针”二、DNA重组技术的基本工具（一）限制性内切核酸酶(又称限制酶)“分子手术刀”阅读书本P71 思考以下问题。1、限制酶的主要来源？这些生物存在限制酶的作用是什么？2、限制酶有什么作用？作用特点是？3、粘
4、性末端和平末端如何理解区分？原核生物易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶可以将外源DNA切割掉，使之失效。二、DNA重组技术的基本工具（一）限制性内切核酸酶(又称限制酶)“分子手术刀”(1)来源：主要来自_。原核生物(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定 _，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_断开。核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键已知限制酶EcoR 识别的_和_为GAATTC，产生_。碱基序列酶切位点中心轴线黏性末端黏性末端已知限制酶Sma 识别的_和_为CCCGGG，产生_。碱基序列酶切位点平末端中心轴线平末端（5）EcoR 限制酶和Sma 限制酶识别的_不同，切割位点_，说明限
5、制酶具有_。碱基序列不同专一性EcoR 限制酶的名字是怎么来的？平末端黏性末端想一想：什么情况下产生的是平末端？粘性末端？（二）DNA连接酶“分子缝合针”阅读书本P72 思考以下问题。1、DNA连接酶的作用？两类异同点？2、几种与核酸有关的酶笔记。（二）DNA连接酶“分子缝合针”(1)作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个 核苷酸之间的_。(2)种类种类比较E.coli DNA连接酶T4 DNA连接酶来源特点大肠杆菌T4噬菌体只能连接黏性末端既可以连接黏性末端，又可以连接平末端磷酸二酯键 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？记忆：几种酶的作用DNA聚合酶限制酶RNA聚合酶
6、DNA水解酶解旋酶DNA连接酶使特定部位的磷酸二酯键断裂，用于提取目的基因和切割载体 在两个DNA片段之间重新形成磷酸二酯键，用于目的基因和载体的连接。DNA复制时，催化单个脱氧核苷酸连接到已有的DNA单链上 转录时解旋，催化单个核糖核苷酸连接到成RNA链上 水解DNA（初步水解、彻底水解）DNA复制前，解旋断开氢键（三）基因进入受体细胞的载体“分子运输车”(1)常用载体：_，它是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，具有自我复制能力的很小的_分子。(2)其他载体：_、_等。质粒双链环状DNA噬菌体动植物病毒1种类 与质粒一样，将外源基因导入大与质粒一样，将外源基因导入大肠杆菌等受体
7、细胞肠杆菌等受体细胞 将外源基因导入动物将外源基因导入动物或植物细胞或植物细胞对_无毒害作用，否则_将受到损 伤甚至死亡。（说明：一般来说，天然载体不能同时满足所有条件，要对其进行人工改造才可以使用。：具有特殊的标记基因，供重组DNA的_。鉴定和选择受体细胞受体细胞基因进入受体细胞的载体-构建有一个至多个_，供外源基因插入。2具备条件能够在_中进行自我复制，或整合到染色体 DNA上，随染色体DNA进行同步复制。受体细胞限制酶切割位点（三）基因进入受体细胞的载体“分子运输车”即时练习1作为基因的运输工具载体，必须具备的条件之一及理由是()A能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的
8、 目的基因 B具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合 D对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择A便于目的基因的插入，而不是表达便于重组DNA的筛选以便宿主细胞能进行正常的生命活动 练习2：书本P74 概念检测 思考讨论-重组DNA分子 含目的基因的DNA 运载体 -质粒 重组DNA技术模拟练习：书本P74 拓展应用2 书本P74 拓展应用2 Xba Xba，因为与，因为与SpeSpe切割产切割产生了相同的粘性末端生了相同的粘性末端 识别不同的核苷酸系序列，但能切割产生相同的粘性末端的限制酶被称识别不同的核苷酸系序列，但能切割产生相同的粘性
9、末端的限制酶被称为为同尾酶同尾酶。如果目的基因的核苷酸序列中恰好有某限制酶的识别序列，那么。如果目的基因的核苷酸序列中恰好有某限制酶的识别序列，那么就可以考虑用同尾酶就可以考虑用同尾酶(目的基因的核苷酸序列中没有它识别的序列）来获取目的基因的核苷酸序列中没有它识别的序列）来获取目的基因。目的基因。五探究与实践DNA 的粗提取与鉴定-粗提取原理粗提取原理鉴定定试剂，注意要加，注意要加热DNA也溶于水中。蛋白也溶于水中。蛋白质在在NaCL溶液析出溶液析出使使DNA从从细胞核中胞核中释放出来放出来不使用不使用滤纸，否，否则DNA会吸会吸附在附在滤纸上上含有含有DNA、RNA、蛋白、蛋白质、脂脂质、糖
10、、糖类等等步骤：研磨、过滤步骤：DNA析出（酒精析出DNA）每一根每一根丝都是都是许多多DNA聚集聚集避免破坏断裂避免破坏断裂DNA蛋白蛋白质溶解于酒精中，溶解于酒精中，DNA析出析出 家庭小实验-粗提取香蕉中的DNA3.结果分析与评价1.你提出白色丝状物或沉淀物了吗?用二苯胺试剂鉴定的结果如何?观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功;如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗?可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。学法大视野P73 自学检测 应用提升 P74 课堂达标