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1、实验十、醋酸纤维薄膜电泳实验十、醋酸纤维薄膜电泳 血清蛋白分析和血清蛋白分析和 人体动脉血压的测定人体动脉血压的测定一、目的和要求一、目的和要求 、了解电泳的原理，掌握醋酸、了解电泳的原理，掌握醋酸 纤维薄膜电泳的操作纤维薄膜电泳的操作 、学习动脉血压的原理，测定、学习动脉血压的原理，测定 收缩压与舒张压收缩压与舒张压二、实验原理二、实验原理 （一）电泳（一）电泳 在外界电场的作用下，生物大分子从电极在外界电场的作用下，生物大分子从电极在外界电场的作用下，生物大分子从电极在外界电场的作用下，生物大分子从电极一侧向另一侧移动的现象一侧向另一侧移动的现象一侧向另一侧移动的现象一侧向另一侧移动的现象
2、 1 1、蛋白质、蛋白质 由氨基酸通过肽键连接而成由氨基酸通过肽键连接而成由氨基酸通过肽键连接而成由氨基酸通过肽键连接而成2 2、等电点、等电点 (isoelectricisoelectric point,point,pIpI)在一定的在一定的pH条件下，当其正、负电荷数相等条件下，当其正、负电荷数相等时，整体便失去了所有电荷，这时的时，整体便失去了所有电荷，这时的pH称为等电称为等电点（点（pI）。）。氨基酸在等电点时电泳移动速度为零氨基酸在等电点时电泳移动速度为零 在碱性环境中，蛋白分子在碱性环境中，蛋白分子 负电负电 阳极阳极 在酸性环境中，蛋白分子在酸性环境中，蛋白分子 正电正电 阴极
3、阴极3 3、醋酸纤维素薄膜、醋酸纤维素薄膜 (Cellulose Acetate Membranes)(Cellulose Acetate Membranes)采用醋酸纤维素为支持物的电泳方法叫醋采用醋酸纤维素为支持物的电泳方法叫醋采用醋酸纤维素为支持物的电泳方法叫醋采用醋酸纤维素为支持物的电泳方法叫醋酸纤维薄膜电泳，具有很高的流速和热稳定性酸纤维薄膜电泳，具有很高的流速和热稳定性酸纤维薄膜电泳，具有很高的流速和热稳定性酸纤维薄膜电泳，具有很高的流速和热稳定性以及非常低的吸附，将其溶于丙酮等有机溶剂以及非常低的吸附，将其溶于丙酮等有机溶剂以及非常低的吸附，将其溶于丙酮等有机溶剂以及非常低的吸附
4、，将其溶于丙酮等有机溶剂中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜4 4、血清蛋白电泳、血清蛋白电泳 将抽取的血液置入不加抗凝剂的试管中，将抽取的血液置入不加抗凝剂的试管中，将抽取的血液置入不加抗凝剂的试管中，将抽取的血液置入不加抗凝剂的试管中，使血凝固后，析出的上清液就是血清。使血凝固后，析出的上清液就是血清。使血凝固后，析出的上清液就是血清。使血凝固后，析出的上清液就是血清。血清中主要含白蛋白、球蛋白。血清中主要含白蛋白、球蛋白。血清中主要含白蛋白、球蛋白。血清中主要含白蛋白、球蛋白。血清蛋白电泳是一种临
5、床化验检查项目。血清蛋白电泳是一种临床化验检查项目。血清蛋白电泳是一种临床化验检查项目。血清蛋白电泳是一种临床化验检查项目。由于蛋白的绝大部分均由肝脏合成，所由于蛋白的绝大部分均由肝脏合成，所由于蛋白的绝大部分均由肝脏合成，所由于蛋白的绝大部分均由肝脏合成，所以，各种蛋白质的质与量的变化，除与免疫以，各种蛋白质的质与量的变化，除与免疫以，各种蛋白质的质与量的变化，除与免疫以，各种蛋白质的质与量的变化，除与免疫性疾病等有关外，主要反映肝脏的生理、病性疾病等有关外，主要反映肝脏的生理、病性疾病等有关外，主要反映肝脏的生理、病性疾病等有关外，主要反映肝脏的生理、病理情况理情况理情况理情况 血清中各种
6、蛋白质的等电点均低于血清中各种蛋白质的等电点均低于血清中各种蛋白质的等电点均低于血清中各种蛋白质的等电点均低于pH 7.0pH 7.0pH 7.0pH 7.0，在，在，在，在pH 8.6pH 8.6pH 8.6pH 8.6的缓冲液中带负电，的缓冲液中带负电，的缓冲液中带负电，的缓冲液中带负电，向正极移动，分子小且带电荷多者，则向正极移动，分子小且带电荷多者，则向正极移动，分子小且带电荷多者，则向正极移动，分子小且带电荷多者，则 移动速度较快移动速度较快移动速度较快移动速度较快pI%球蛋白球蛋白 6.867.3 1220 球蛋白球蛋白 5.12 6.512 2球蛋白球蛋白 5.06 49 1球蛋
7、白球蛋白 5.06 25清蛋白清蛋白 4.645772（二）血压测定（二）血压测定 1 1、血压、血压 是是是是指血管内的血液对于单位面积血管壁指血管内的血液对于单位面积血管壁指血管内的血液对于单位面积血管壁指血管内的血液对于单位面积血管壁的侧压，目前采用千帕的侧压，目前采用千帕的侧压，目前采用千帕的侧压，目前采用千帕(KPaKPaKPaKPa)为单位。以前为单位。以前为单位。以前为单位。以前采用采用采用采用 mmHg mmHg mmHg mmHg 表示。表示。表示。表示。收缩压：收缩期动脉血压的最高值收缩压：收缩期动脉血压的最高值收缩压：收缩期动脉血压的最高值收缩压：收缩期动脉血压的最高值
8、(高压高压高压高压)舒张压：舒张期动脉血压的最低值舒张压：舒张期动脉血压的最低值舒张压：舒张期动脉血压的最低值舒张压：舒张期动脉血压的最低值 (低压低压低压低压)2 2、血压测定方法、血压测定方法 此次实验采用此次实验采用此次实验采用此次实验采用KorotkoffKorotkoffKorotkoffKorotkoff氏听诊法氏听诊法氏听诊法氏听诊法 正常的收缩压正常的收缩压正常的收缩压正常的收缩压/舒张压舒张压舒张压舒张压 (mmHg)(mmHg)(mmHg)(mmHg)收缩压收缩压收缩压收缩压:130 mmHg:130 mmHg:130 mmHg:130 mmHg 舒张压舒张压舒张压舒张压:
9、85 mmHg:85 mmHg:85 mmHg:85 mmHg无光泽面无光泽面座位号1.50.5三、实验方法三、实验方法（一）电泳（一）电泳 1 1、薄膜的使用、薄膜的使用 在毛（无光泽）面划线，在毛（无光泽）面划线，在毛（无光泽）面划线，在毛（无光泽）面划线，并写上并写上并写上并写上座位号（如右图）座位号（如右图）座位号（如右图）座位号（如右图）2、浸润、浸润3 3、点样、点样 （毛细管，一根，放回）（毛细管，一根，放回）（毛细管，一根，放回）（毛细管，一根，放回）4 4、电泳、电泳 点样面朝下点样面朝下点样面朝下点样面朝下 点样端置于负极点样端置于负极点样端置于负极点样端置于负极5、染色染
10、色 染色染色染色染色10min10min10min10min6 6、漂洗、漂洗 脱色各脱色各脱色各脱色各5min5min（、）最后，水洗最后，水洗（二）侧血压（二）侧血压 1 1 1 1、血压计的构造：减压计、袖带、血压计的构造：减压计、袖带、血压计的构造：减压计、袖带、血压计的构造：减压计、袖带、气球气球气球气球 2 2 2 2、安静时收缩压、安静时收缩压、安静时收缩压、安静时收缩压/舒张压舒张压舒张压舒张压 （120/80mmHg120/80mmHg120/80mmHg120/80mmHg）3 3 3 3、运动后的收缩压、运动后的收缩压、运动后的收缩压、运动后的收缩压/舒张压舒张压舒张压舒张压四、实验报告四、实验报告1、将电泳后的醋酸纤维薄膜、将电泳后的醋酸纤维薄膜 贴在报告本上并在旁边用贴在报告本上并在旁边用 铅笔按样描图铅笔按样描图2、记录血压（安静、运动）、记录血压（安静、运动）预习：实验十七预习：实验十七