课题2 月季的花药培养 (3).ppt

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1、 花中皇后月季又称花中皇后月季又称“月月红月月红”,自然花期自然花期5至至11月月,开花连续不断开花连续不断,通常扦插就可以成活通常扦插就可以成活。知识回顾单倍体育种的过程?单倍体育种的过程?花药离体培养(花药离体培养(N)单倍体植株(单倍体植株(N)秋水仙素处理,秋水仙素处理,使染色体翻倍使染色体翻倍植株(植株(2N)特点:特点:1 明显缩短育种年限明显缩短育种年限2 后代植株都为纯合子。后代植株都为纯合子。正常植株(正常植株(2N)课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养花的结构花的结构花托花托花萼花萼花瓣花瓣雄蕊雄蕊花药花药花丝花丝雌蕊雌蕊柱头柱头花柱花柱子房子房花丝花丝花药:花药:

2、囊状结构,内有很多花粉囊状结构,内有很多花粉(一)被子植物的花粉发育(一)被子植物的花粉发育1 雄蕊雄蕊一、基础知识一、基础知识2 花粉的概念花粉的概念:由由花粉母细胞花粉母细胞经过经过减数分裂减数分裂形成形成的的单倍体的生殖细胞单倍体的生殖细胞.被子植物花粉的发育过程被子植物花粉的发育过程小孢子母细胞小孢子母细胞减数分裂减数分裂4个小孢子个小孢子(小孢子四分体时期小孢子四分体时期)小孢子小孢子(单核居中期单核居中期)小孢子小孢子(单核靠边期单核靠边期)小孢子小孢子 生殖细胞核生殖细胞核+花粉管细胞核花粉管细胞核有丝分裂有丝分裂(花粉粒的双核期)(花粉粒的双核期)生殖细胞将再进行一次有丝分裂,

3、形成两个精子生殖细胞将再进行一次有丝分裂,形成两个精子(二)产生花粉植株的两种途径(二)产生花粉植株的两种途径移栽移栽花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 花药中花药中的花粉的花粉脱分化脱分化 分化分化 丛芽丛芽 再分化再分化 丛芽丛芽 诱导诱导生根生根体细胞胚(胚状体):在组织培养过程中,某些细胞在形态上转体细胞胚(胚状体):在组织培养过程中,某些细胞在形态上转变为与变为与合子发育成的胚非常相似的结构合子发育成的胚非常相似的结构,发育过程亦与合子胚类,发育过程亦与合子胚类似似原因:培养基中的激素种类及浓度配比原因:培养基中的激素种类及浓度配比部分花药通过胚状体途

4、径形成小植株部分花药通过胚状体途径形成小植株烟草花药培养烟草花药培养胚状体发育途径愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养水稻花药培养愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药接种在平板上的水稻花药(三三)、影响花药培养的主要因素、影响花药培养的主要因素1、材料的选择、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同植物的诱导成功率不同不同.同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响直接的影响.(一般选月季的初花期)(一般选月季的初花期)合适的花粉发育期合

5、适的花粉发育期(单核居中期与靠边期(单核居中期与靠边期之间)之间)2、培养基的组成、培养基的组成(MSMS培养基培养基+不同比例的植物生长调节激素)不同比例的植物生长调节激素)实验操作实验操作尝试从雄蕊上剥离花药注意:剥离花药时,要尽量注意:剥离花药时,要尽量不损伤不损伤花药花药,同时还要同时还要彻底去除花丝彻底去除花丝。(一)材料选取(一)材料选取 2、通过、通过镜检镜检来确定是否处于适宜的发育期来确定是否处于适宜的发育期。方法:方法:醋酸洋红法醋酸洋红法(将染色体染成红色将染色体染成红色)焙花青焙花青-铬矾法铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看从花药看:月季的初

6、花期:月季的初花期 从花粉看:从花粉看:单核期单核期 从花蕾看从花蕾看:完全未开放的:完全未开放的 花药(载玻片上)花药(载玻片上)1%的醋酸洋红的醋酸洋红1滴滴用镊柄将花药捣碎,用镊柄将花药捣碎,盖上盖玻片盖上盖玻片镜检(花粉粒的细胞核被染成红色)镜检(花粉粒的细胞核被染成红色)花药(在卡诺氏固定液中处理花药(在卡诺氏固定液中处理20min)取出,置于载玻片上取出,置于载玻片上焙花青铬矾溶液染色焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片盖上盖玻片镜检(花粉粒的细胞核镜检(花粉粒的细胞核被染成蓝黑色)被染成蓝黑色)二、材料的消毒二、材料的消毒:花蕾(70酒精)大约30s(无菌水)清洗(无菌吸水纸)吸干水分(

7、1氯化汞溶液)24min(无菌水)冲洗为什么花瓣松动会给为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难?材料的消毒带来困难?答:花瓣松动后,微答:花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药,生物就可能侵入到花药,给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。为什么选择未开放的为什么选择未开放的花蕾?花蕾?(三)接种和培养(三)接种和培养 1 1 灭菌后花蕾,要在灭菌后花蕾,要在 下除去萼片和花瓣,下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。并立即将花药接种到培养基上。3 通常每瓶接种花药通常每瓶接种花药 ,温度控制在,温度控制在 左左右,右,。幼小植株形成后才。幼小植株形成后才 。2 在剥离花药时,要尽量在剥离花药时,要尽量 (同时还要彻底(同时还要彻底 。4 进一步鉴定和筛选:进一步鉴定和筛选:常常会出现染色体倍性的变常常会出现染色体倍性的变化化无菌条件无菌条件不损伤花药不损伤花药去除花丝去除花丝7-10个个25不需要光照不需要光照需要光照需要光照

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