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1、血栓与止血常规七项检测血栓与止血常规七项检测单卫民2022.04.27第一页，共四十七页。第二页，共四十七页。中国：两千年前有了血栓原始概念中国：两千年前有了血栓原始概念 无病理资料无病理资料近代医学近代医学18181818年年LaechnecLaechnec首次描述肺梗死：首次描述肺梗死：机制不详机制不详18461846年年VirchowVirchow提出为深静脉血栓脱落导致提出为深静脉血栓脱落导致2020世纪世纪7070年前：血栓栓塞与疾病有联系年前：血栓栓塞与疾病有联系2020世纪世纪70907090年代研究：血栓栓塞性疾病成为威胁人类健康的非常重年代研究：血栓栓塞性疾病成为威胁人类健康
2、的非常重要因素要因素现代最重要的致死病因：各种梗死现代最重要的致死病因：各种梗死 心肌梗死、脑梗死、肺梗死心肌梗死、脑梗死、肺梗死=癌症的癌症的5 5倍倍血栓性疾病的开展史血栓性疾病的开展史第三页，共四十七页。血栓性疾病的流行病学数据血栓性疾病的流行病学数据世界人口死亡原因分析世界人口死亡原因分析(WHO statistics)%5.1%6.3%9.0%12.5%14.2%24.5%血栓性疾病 感染 癌症 意外事故51015202530 肺部疾病 艾滋病第四页，共四十七页。中国国家心血管病中心发布中国国家心血管病中心发布?中国心血管病报告中国心血管病报告2022?指出，指出，我国心血管病包括脑
3、血管病现患人数约为我国心血管病包括脑血管病现患人数约为2.3亿，亿，每每10个成年人中就有个成年人中就有2人患心血管病。人患心血管病。我国人总死亡病因分析中，每我国人总死亡病因分析中，每5个死亡人中就有个死亡人中就有2人死于人死于 心血管病。心血管病死亡占总死亡原因的心血管病。心血管病死亡占总死亡原因的41%，居，居各各 种死因的首位。种死因的首位。我国每天心血管病死亡我国每天心血管病死亡9590人，估计每人，估计每10秒钟心血管秒钟心血管 病死亡病死亡1人。人。第五页，共四十七页。u血栓形成是导致心、脑和外周血管事件的最后关键环节，是致死或致残的直接原因，没有血栓就没有心血管病！u血栓性疾病
4、中，静脉血栓占70左右，动脉血栓占30左右。u尸解资料显示，静脉血栓的发生率比动脉血栓高4倍，但只有11%15%被生前临床诊断。大多数静脉血栓没有病症，易被漏诊、误诊。第六页，共四十七页。国家采取的措施国家采取的措施2004年?中华医学杂志?组织专家撰文，系统讲解血栓栓塞性疾病根底理论、诊断、治疗和预防共13讲2005年中国医师协会循证医学专业委员会在全国全面启动“血栓栓塞性疾病防治技术推广工程2007年中华医学会组织专家在全国500家医院举办“血栓性疾病预防和抗血小板治疗临床策略继续教育工程多个专业学科出台血栓栓塞性疾病诊疗指南或专家共识第七页，共四十七页。介入科介入科血管外科血管外科呼吸科
5、呼吸科ICU普通外科普通外科老年科老年科肿瘤科肿瘤科骨骨科科内分泌内分泌神经科神经科肾病肾病科科儿科儿科妇产科妇产科血栓血栓动脉及静脉动脉及静脉外科和内科外科和内科心脏科心脏科神经外科神经外科血液科血液科泌尿外科泌尿外科创伤外科创伤外科心胸外科心胸外科血栓栓塞与疾病血栓栓塞与疾病第八页，共四十七页。血栓栓塞与疾病血栓栓塞与疾病覆盖临床各科覆盖临床各科 内、外、妇、儿、五官科等等所有学科内、外、妇、儿、五官科等等所有学科包含各个脏器包含各个脏器血管：大小动脉、静脉、毛细血管血管：大小动脉、静脉、毛细血管最严重、最重要的血栓塞性疾病最严重、最重要的血栓塞性疾病 心、脑血管血栓病，深静脉血栓心、脑血
6、管血栓病，深静脉血栓DVTDVT 肺栓塞的并发症，外周动脉闭塞性疾病以及肺栓塞的并发症，外周动脉闭塞性疾病以及DICDIC第九页，共四十七页。出、凝血检查出、凝血检查到到血栓与止血检查血栓与止血检查出、凝血：强调出血为主，凝血为辅出、凝血：强调出血为主，凝血为辅血栓与止血：强调凝血血栓形成血栓与止血：强调凝血血栓形成 -出血性疾病：出血性疾病：2030%2030%-血栓性疾病：血栓性疾病：7080%7080%静脉血栓静脉血栓70%70%，动脉血栓，动脉血栓30%30%重点关注：血栓性疾病重点关注：血栓性疾病第十页，共四十七页。现状现状目前已通过FDA认证的血栓与止血工程有156种。兴旺国家占常
7、规试验的三分之一，我国差距非常明显血栓与止血的筛查试验并未完全普及临床要求 出血性疾病的筛查和确诊 血栓性疾病与血栓前状态的检查和预测 抗凝治疗和溶栓治疗的用药指导和预后估计第十一页，共四十七页。常用的血栓与止血检测工程常用的血栓与止血检测工程血小板计数、血小板功能检测PT、APTT、Fbg、TT各种凝血因子、vWFAT、PC、PSFDP、D-D、2-PI、PLG狼疮抗凝物肝素第十二页，共四十七页。推荐常规筛查七项推荐常规筛查七项 含盖 血液凝固系统、抗凝系统和纤溶系统为临床提供患者血栓与止血功能的根底信息 能实现自动化快速检测 本钱较低PT、APTT、Fbg、TT、AT、FDP、D-Dime
8、r第十三页，共四十七页。1 1、PTPT的临床应用的临床应用 PT PT：秒计：秒计活动度活动度PTPT比值比值INRINR国际标准化比值国际标准化比值 、评估外源凝血因子缺陷、评估外源凝血因子缺陷 、评估肝病和维生素、评估肝病和维生素K K缺乏症缺乏症 、评估口服抗凝剂治疗、评估口服抗凝剂治疗 、易栓症、血栓前状态和脑、肺等静脉血栓二级预防、易栓症、血栓前状态和脑、肺等静脉血栓二级预防 、手术前止血功能的筛查、手术前止血功能的筛查14第十四页，共四十七页。PTPT反映反映反映反映4 4种维生素种维生素种维生素种维生素K K依赖因子中的三种：依赖因子中的三种：依赖因子中的三种：依赖因子中的三种
9、：F F凝血酶原凝血酶原凝血酶原凝血酶原 F F F F华法林的作用华法林的作用华法林的作用华法林的作用 抗凝效果：减少抗凝效果：减少抗凝效果：减少抗凝效果：减少F F，效果相对较弱，起效需，效果相对较弱，起效需，效果相对较弱，起效需，效果相对较弱，起效需2d2d。抗栓效果：减少抗栓效果：减少抗栓效果：减少抗栓效果：减少F F和和和和F F，作用重要，起效需，作用重要，起效需，作用重要，起效需，作用重要，起效需6d6d。PTPT对华法林的监测对华法林的监测第十五页，共四十七页。口服抗凝剂治疗的监测范围口服抗凝剂治疗的监测范围162.53.0心肌梗死、动脉血栓和人工瓣膜置换 2.53.0反复性深
10、静脉血栓形成和反复性肺栓塞 2.02.8治疗深静脉血栓形成、肺栓塞和脑缺血发作2.02.5腰部、股骨骨折手术 1.52.5预防深静脉血栓形成 INRINR范围范围 疾病疾病 第十六页，共四十七页。172 2、APTTAPTT的临床应用的临床应用评估内源凝血因子缺陷评估内源凝血因子缺陷筛查狼疮样抗凝物筛查狼疮样抗凝物监测肝素的临床应用监测肝素的临床应用检测水蛭素的应用检测水蛭素的应用手术前止血功能的筛查手术前止血功能的筛查第十七页，共四十七页。凝血因子抑制物和狼疮抑制物凝血因子抑制物和狼疮抑制物 APTT 延长第十八页，共四十七页。肝素与肝素与APTTAPTT 肝素通常采用APTT监测，以判断疗
11、效，该值一般应维持于正常值的1.52.5倍。不同设备与试剂APTT参考值略有不同。即使APTT在治疗范围内，也可出现严重的出血并发症。第十九页，共四十七页。肝素与肝素与APTT APTT 肝素的耐药性肝素的耐药性 富组胺糖蛋白、弹力蛋白、富组胺糖蛋白、弹力蛋白、富组胺糖蛋白、弹力蛋白、富组胺糖蛋白、弹力蛋白、PF4 PF4 等可竞争性抑制肝素等可竞争性抑制肝素等可竞争性抑制肝素等可竞争性抑制肝素 与抗凝血酶结合。与抗凝血酶结合。与抗凝血酶结合。与抗凝血酶结合。遗传性抗凝血酶缺乏遗传性抗凝血酶缺乏遗传性抗凝血酶缺乏遗传性抗凝血酶缺乏AT 40%60%AT 40%60%。肝硬化、肾病综合征、肝硬化
12、、肾病综合征、肝硬化、肾病综合征、肝硬化、肾病综合征、DICDIC等等等等AT 30%AT 30%。上述情况存在时，即使给予大剂量肝素亦不能使上述情况存在时，即使给予大剂量肝素亦不能使上述情况存在时，即使给予大剂量肝素亦不能使上述情况存在时，即使给予大剂量肝素亦不能使 APTT APTT延长。延长。延长。延长。第二十页，共四十七页。PT、APTT联合分析联合分析第二十一页，共四十七页。3 3、纤维蛋白原、纤维蛋白原FbgFbg的临床应用的临床应用1.监测凝血功能是否失效监测凝血功能是否失效2.在手术前和血栓的溶栓、抗凝治疗在手术前和血栓的溶栓、抗凝治疗3.诊断局部缺血心脏病的危险性诊断局部缺血
13、心脏病的危险性4.预防血栓形成独立因素预防血栓形成独立因素5.肿瘤病人化疗、转移肿瘤病人化疗、转移6.DIC第二十二页，共四十七页。方法学问题方法学问题 Clauss Clauss法法功能检测，操作简单，结果可靠，功能检测，操作简单，结果可靠，WHOWHO推荐推荐为为Fib-CFib-C的参考方法凝血酶为的参考方法凝血酶为3030100U/ml100U/ml，OVBOVB的的pHpH值值应在应在7.357.35；PT PT演算法演算法更快速，简便，且重复性较好，当更快速，简便，且重复性较好，当FibFib在正在正常范围或轻度异常时，与常范围或轻度异常时，与ClaussClauss法结果差异不大
14、，但当法结果差异不大，但当FibFib5.0g/L5.0g/L或或FibFib1.5g/L1.5g/L时，时，PT PT演算法结果不可信，演算法结果不可信，一般高于一般高于ClaussClauss法；法；免疫法、比浊法和化学法操作繁琐，均非免疫法、比浊法和化学法操作繁琐，均非FibFib功能检测法，功能检测法，故与生理性故与生理性FibFib活性不一定总是成平行关系。活性不一定总是成平行关系。第二十三页，共四十七页。4 4、凝血酶时间、凝血酶时间TTTT原发性或继发性纤溶亢进时产生大量FDP，干扰纤维蛋白的聚合，导致TT延长。普通肝素或水蛭素治疗时，TT显著延长。溶栓治疗时，FDP增高，纤维蛋
15、白原降低，TT延长。严重肝病、肝移植、恶性肿瘤、SLE、流行性出血热、过敏性休克等疾病可导致血浆肝素样物质增多。纤维蛋白原质或量的异常：低纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症，TT延长。第二十四页，共四十七页。TT延长硫酸鱼精蛋白/甲苯胺蓝纠正试验TT正常被纠正 TT延长不被纠正 Fg/FDPs测定肝素/类肝素物质 正常血浆：患者血浆11纠正试验 TT正常被纠正 TT延长不被纠正 凝血因子缺乏 凝血因子抑制物存在 第二十五页，共四十七页。抗凝血酶抗凝血酶antithrombin，AT 由肝脏、血管内皮细胞、由肝脏、血管内皮细胞、巨核细胞合成，巨核细胞合成，依赖肝素的丝氨酸蛋白酶抑制剂，是人体内主
16、要的血浆抗依赖肝素的丝氨酸蛋白酶抑制剂，是人体内主要的血浆抗 凝物质，尤其对凝血酶的灭活能力占所有抗凝蛋白的凝物质，尤其对凝血酶的灭活能力占所有抗凝蛋白的70%80%。AT与酶与酶1：1复合物，这种共价结合是不可逆的，复合物，这种共价结合是不可逆的，肝素作用于肝素作用于AT的赖氨酸残基从而大大增强的赖氨酸残基从而大大增强AT的抗凝酶活性的抗凝酶活性2000倍以上。倍以上。5 5、抗凝血酶、抗凝血酶(AT)(AT)第二十六页，共四十七页。XII纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白凝块内源途径XIIXVIIIXVII抗凝血酶抗凝血酶外源途径组织因子VII蛋白 C 系统 凝固抑制凝固抑制第二十七页，共四十七
17、页。肝素与肝素与ATAT肝素是一种酸性粘多糖，主要由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生，存在于大多数组织中，在肝、肺、心和肌肉组织中丰富。在体内、体外均具有抗凝作用。肝素作为辅因子，作用于AT的赖氨酸残基，可使AT灭活凝血酶作用大大增强，促进AT与凝血酶结合更快，更稳定使凝血酶立即失活。第二十八页，共四十七页。UFH分子量15000d抗Xa与抗IIa活性相似LMWH平均分子量4000-5000d 抗Xa大于抗IIa活性(抗Xa：抗IIa=24:1)UFHUFH与与LMWHLMWH抗凝机制抗凝机制ACCP7.Chest.2004;126:188-203;WALENGA JM,et al.Turk J H
18、aematol 2002;19(2):137-150;J EFFREY I.WEITZ.The New England Journal of Medicine.1997;337:688-698;Alban S.Current Pharmaceutical Design.2022;14:1152-1175第二十九页，共四十七页。AT AT缺陷缺陷 遗传性遗传性遗传性遗传性ATAT缺陷：导致缺陷：导致缺陷：导致缺陷：导致VTEVTE和和和和PEPE，动脉血栓少见。，动脉血栓少见。，动脉血栓少见。，动脉血栓少见。合成障碍肝脏受损在肝硬化、重症肝炎、肝癌晚期、急性肝合成障碍肝脏受损在肝硬化、重症肝炎、
19、肝癌晚期、急性肝合成障碍肝脏受损在肝硬化、重症肝炎、肝癌晚期、急性肝合成障碍肝脏受损在肝硬化、重症肝炎、肝癌晚期、急性肝功能衰竭、早产儿等，由于合成减少，功能衰竭、早产儿等，由于合成减少，功能衰竭、早产儿等，由于合成减少，功能衰竭、早产儿等，由于合成减少，ATAT活性与水平减低，且活性与水平减低，且活性与水平减低，且活性与水平减低，且常与疾病严重程度相关，可伴发血栓形成。常与疾病严重程度相关，可伴发血栓形成。常与疾病严重程度相关，可伴发血栓形成。常与疾病严重程度相关，可伴发血栓形成。消耗过度消耗过度消耗过度消耗过度DICDIC、脓毒血症、脓毒血症、脓毒血症、脓毒血症、DVTDVT、早幼粒白血病
20、。、早幼粒白血病。、早幼粒白血病。、早幼粒白血病。丧失过多：肾病综合征时，由于丧失过多：肾病综合征时，由于丧失过多：肾病综合征时，由于丧失过多：肾病综合征时，由于ATAT的分子量较小，易从尿液中的分子量较小，易从尿液中的分子量较小，易从尿液中的分子量较小，易从尿液中随蛋白流失。高血压所致慢性肾功能衰竭也会造成随蛋白流失。高血压所致慢性肾功能衰竭也会造成随蛋白流失。高血压所致慢性肾功能衰竭也会造成随蛋白流失。高血压所致慢性肾功能衰竭也会造成ATAT的大量丧的大量丧的大量丧的大量丧失，进而导致高凝状态或血栓形成。失，进而导致高凝状态或血栓形成。失，进而导致高凝状态或血栓形成。失，进而导致高凝状态或
21、血栓形成。第三十页，共四十七页。抗肿瘤治疗对抗凝血系统的影响抗肿瘤治疗对抗凝血系统的影响抗肿瘤药物抗肿瘤药物引发血栓风险的机制引发血栓风险的机制环磷酰胺肝肾损害（1）肝损害：AT、PC、PS合成减少（2）肾损害：AT大量丢失氨甲喋呤丝裂霉素贝伐单抗血管内皮损伤（1）AT合成减少（2）TM缺陷，PC活化障碍沙利度胺来那度胺第三十一页，共四十七页。糖尿病对抗凝血酶的影响糖尿病对抗凝血酶的影响 凝血活化，消耗Antithombin。血管内皮损伤引发Antithombin活化障碍。肾脏损伤，导致Antithombin从尿中大量丧失。酶活性中心被糖基化，Antithombin活性降低。第三十二页，共四十
22、七页。6 6、纤维蛋白原降解产物、纤维蛋白原降解产物FDPFDP原发性、继发性纤溶亢进时，FDP 均增高。血管栓塞性疾病AMI、CI、DVT。白血病化疗诱导期后出血性血小板增多症。白血病化疗诱导期后出血性血小板增多症。尿毒症、肝脏疾患或各种肿瘤。尿毒症、肝脏疾患或各种肿瘤。第三十三页，共四十七页。FDP/D-FDP/D-二聚体的产生二聚体的产生凝血系统凝血系统组织因子途径组织因子途径其他途径？其他途径？凝血酶原凝血酶原凝血酶凝血酶FXIIIFXIIIa纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶纤溶酶纤维蛋白单体纤维蛋白单体纤维蛋白原纤维蛋白原交联纤维蛋白交联纤维蛋白FDPX,Y,D,E等碎等碎片片X,等碎片等碎片
23、DD,DXD,DD/E,YXD等等复合物复合物纤溶系统纤溶系统纤溶纤溶凝固凝固第三十四页，共四十七页。7 7、D-D-二聚体临床应用进展二聚体临床应用进展 themegallery Company Logo随着技术的进步，临床应用也在不断深入早期替代早期替代FDP和和3P实验用于实验用于DIC的诊断和监测的诊断和监测高阴性预示能力和高灵敏度，用于高阴性预示能力和高灵敏度，用于VTE排除、早期排除、早期DIC的诊断和溶栓治疗监测的诊断和溶栓治疗监测VTE复发的监测，抗凝药物停药的风险评估复发的监测，抗凝药物停药的风险评估内、外、妇、儿多种疾病血栓风险评估、病程动态监测及预后评估内、外、妇、儿多种
24、疾病血栓风险评估、病程动态监测及预后评估恶性肿瘤的预警信号恶性肿瘤的预警信号.早期替代早期替代FDP和和3P实验用于实验用于DIC的诊断和监测的诊断和监测第三十五页，共四十七页。36诊断诊断DIC中应用中应用敏感性（%）特异性（%）诊断效率（%）单用FDPs1006787单用D-D 916180联用FDPs+DD919495 鉴别原发性纤溶和继发性纤溶DIC：前者FDPs，D-D/N；后者FDPs和D-D 都。FDPFDP与与D-D-二聚体联合检测的意义二聚体联合检测的意义第三十六页，共四十七页。变化特点变化特点临床疾病临床疾病FDPs（）D-D （）纤溶活性正常，即使临床有出血症状，也与纤溶
25、症无关。FDPs（）D-D （）原发性纤溶（纤维蛋白原被降解）肝病、剧烈运动后、类风湿关节炎FDPs（）D-D （）纤维蛋白被降解，而纤维蛋白原未被降解。几乎不可能出现，见于FDP假阴性。FDPs（）D-D （）纤维蛋白原和纤维蛋白同时被降解，见于继发性纤溶，如DIC和溶栓治疗后。第三十七页，共四十七页。themegallery Company Logo举例：妊娠举例：妊娠2020/36/36周周D-D-二聚体与二聚体与FDPFDP的变化的变化目前市场上没有目前市场上没有高灵敏的高灵敏的FDP试试剂剂第三十八页，共四十七页。D-D-二聚体检测应注意的几个问题二聚体检测应注意的几个问题 them
26、egallery Company Logo方法学之间的可比性不同的结果表达方式参考区间与cutoff值试剂检测灵敏度要求标准化问题第三十九页，共四十七页。D-D-二聚体片段的异源性二聚体片段的异源性针对不同片段制备的单克隆抗体对同一份血浆中不同片段的结合能力不同目前有目前有20多种多种单抗被使用单抗被使用。第四十页，共四十七页。DDU与与FEUDDUDDU反映的是小分子片段(195KDa)D-二聚体的量，其校准物是纯化的D-二聚体FEUFEU反映的是大分子片段(340KDa)D-二聚体的量，其校准物是标化的纤维蛋白原水解生成的交联纤维蛋白降解产物，故用降解前纤维蛋白原分子的量来表达用FEU表达
27、的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍，但不建议进行形式和量纲的转换大分子片段D-二聚体检测可能能更灵敏的反映交联纤维蛋白早期水解情况第四十一页，共四十七页。参考区间与参考区间与cutoffcutoff值值参考区间参考区间：反映的是当地健康人群D-二聚体的水平cutoff值值：只是用来排除DVT和PE，而不是用于区别健康人群与非健康人群妊娠女性、65岁以上的老年人应重新建立参考区间和cutoff值42第四十二页，共四十七页。排除静脉栓塞的试剂要求排除静脉栓塞的试剂要求建立排除诊断的阈值cutoff值必须有高的阴性预示值、灵敏度必须在阈值浓度水平有较好的重现性厂家应提供主要特征评估的数据来
28、源CLSI 59-ACLSI 59-A20222022推荐的预测值特征：推荐的预测值特征：第四十三页，共四十七页。无统一的国际标准目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用。存在两种报告单位：D-dimerDDU和纤维蛋白原当量(FEU)抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力不同的试剂有不同的干扰情况44检测标准化问题检测标准化问题第四十四页，共四十七页。45美国临床实验室标准化协会美国临床实验室标准化协会CLSICLSIH59-PH59-P推荐指南推荐指南第四十五页，共四十七页。4.2 阴性预测值结合临床诊断的PTP进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%4.3 测试范围涵盖制造商提供
29、的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值4.4 线性D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.984.5 精密度 4.5.1 重复性用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15用高值异常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10.我国正在制定有关我国正在制定有关D-二聚体检测的质量管理标准二聚体检测的质量管理标准D D二聚体试剂标准二聚体试剂标准中国国家标准讨论稿中国国家标准讨论稿.第四十六页，共四十七页。内容总结血栓与止血常规七项检测。我国人总死亡病因分析中，每5个死亡人中就有2人死于。心血管病死亡占总死亡原因的41%，居各。最严重、最重要的血栓塞性疾病。出、凝血：强调出血为主，凝血为辅。血小板计数、血小板功能检测。含盖 血液凝固系统、抗凝系统和纤溶系统。PT：秒计活动度PT比值INR国际标准化比值。凝血因子抑制物和狼疮抑制物。cutoff值：只是用来排除DVT和PE，而不是用于区别健康人群与非健康人群。.第四十七页，共四十七页。