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1、血栓与止血常规七项检测血栓与止血常规七项检测单卫民中国：中国：两千年前有了血栓原始概念 无病理资料近代近代医学（医学（18181818年）年）Laechnec首次描述肺梗死：机制不详18461846年年VirchowVirchow提出为深静脉血栓脱落导致2020世纪世纪7070年前：年前：血栓栓塞与疾病有联系2020世纪世纪70907090年代研究：年代研究：血栓栓塞性疾病成为威胁人类健康的非常重要因素现代最重要的致死病因：现代最重要的致死病因：各种梗死 心肌梗死、脑梗死、肺梗死=癌症的5倍血栓性疾病的发展史血栓性疾病的发展史血栓性疾病的流行病学数据血栓性疾病的流行病学数据世界人口死亡原因分析
2、世界人口死亡原因分析(WHO statistics)%5.1%6.3%9.0%12.5%14.2%24.5%血栓性疾病 感染 癌症 意外事故51015202530 肺部疾病 艾滋病中国国家心血管病中心发布中国国家心血管病中心发布中国心血管病报告中国心血管病报告2011指出指出，l 我国心血管病（包括脑血管病）现患人数约为亿亿，每10个成年人中就有2人患心血管病。l 我国人总死亡病因分析中，每5个死亡人中就有2人死于 心血管病。心血管病死亡占总死亡原因的41%，居各居各 种死因的首位种死因的首位。l 我国每天心血管病死亡9590人，估计每10秒钟心血管 病死亡1人。u血栓形成是导致心、脑和外周血
3、管事件的最后关键环节，是致死或致残的直接原因，没有血栓就没有心血管病！u血栓性疾病中，静脉血栓占70左右，动脉血栓占30左右。u尸解资料显示，静脉血栓的发生率比动脉血栓高4倍，但只有11%15%被生前临床诊断。大多数静脉血栓没有症状，易被漏诊、误诊。国家采取的措施国家采取的措施2004年中华医学杂志组织专家撰文，系统讲解血栓栓塞性疾病基础理论、诊断、治疗和预防共13讲2005年中国医师协会循证医学专业委员会在全国全面启动“血栓栓塞性疾病防治技术推广血栓栓塞性疾病防治技术推广”项目2007年中华医学会组织专家在全国500家医院举办“血栓性疾病预防和抗血小板治疗临床策略”继续教育项目多个专业学科出
4、台血栓栓塞性疾病诊疗指南或专家共识介入科介入科血管外科血管外科呼吸科呼吸科ICU普通外科普通外科老年科老年科肿瘤科肿瘤科骨骨科科内分泌内分泌神经科神经科肾病肾病科科儿科儿科妇产科妇产科血栓血栓动脉及静脉动脉及静脉外科和内科外科和内科心脏科心脏科神经外科神经外科血液科血液科泌尿外科泌尿外科创伤外科创伤外科心胸外科心胸外科血栓栓塞与疾病血栓栓塞与疾病血栓栓塞与疾病血栓栓塞与疾病覆盖临床各科覆盖临床各科 内、外、妇、儿、五官科等等所有学科包含各个脏器包含各个脏器血管血管：大小动脉、静脉、毛细血管最严重、最重要的血栓塞性疾病最严重、最重要的血栓塞性疾病 心、脑血管血栓病，深静脉血栓（DVT）肺栓塞的并
5、发症，外周动脉闭塞性疾病以及DIC 出、凝血检查出、凝血检查到到血栓与止血检查血栓与止血检查出、凝血出、凝血：强调出血为主，凝血为辅血栓与止血血栓与止血：强调凝血（血栓形成）-出血性疾病：2030%-血栓性疾病：7080%静脉血栓70%，动脉血栓30%重点关注重点关注：血栓性疾病 现状现状目前已通过FDA认证的血栓与止血项目有156种。发达国家占常规试验的三分之一，我国差距非常明显血栓与止血的筛查试验并未完全普及临床要求临床要求 出血性疾病的筛查和确诊 血栓性疾病与血栓前状态的检查和预测 抗凝治疗和溶栓治疗的用药指导和预后估计 常用的血栓与止血检测项目常用的血栓与止血检测项目血小板计数、血小板
6、功能检测PT、APTT、Fbg、TT各种凝血因子、vWFAT、PC、PSFDP、D-D、2-PI、PLG狼疮抗凝物肝素推荐常规筛查七项推荐常规筛查七项 含盖 血液凝固系统、抗凝系统和纤溶系统为临床提供患者血栓与止血功能的基础信息 能实现自动化快速检测 成本较低PT、APTT、Fbg、TT、AT、FDP、D-Dimer1 1、PTPT的临床应用的临床应用 PT PT：秒计：秒计活动度活动度PTPT比值比值INRINR（国际标准化比值）（国际标准化比值）、评估外源凝血因子缺陷、评估外源凝血因子缺陷 、评估肝病和维生素、评估肝病和维生素K K缺乏症缺乏症 、评估口服抗凝剂治疗评估口服抗凝剂治疗 、易
7、栓症、血栓前状态和脑、肺等静脉血栓二级预防易栓症、血栓前状态和脑、肺等静脉血栓二级预防 、手术前止血功能的筛查手术前止血功能的筛查14 PTPT反映反映4 4种维生素种维生素K K依赖因子中的三种：依赖因子中的三种：F（凝血酶原）F F 华法林的作用华法林的作用 抗凝效果：减少抗凝效果：减少FF，效果相对较弱，起效需，效果相对较弱，起效需2d2d。抗栓效果：减少抗栓效果：减少F和和FF，作用重要，起效需，作用重要，起效需6d6d。PTPT对华法林的监测对华法林的监测口服抗凝剂治疗的监测范围口服抗凝剂治疗的监测范围162.53.0心肌梗死、动脉血栓和人工瓣膜置换 2.53.0反复性深静脉血栓形成
8、和反复性肺栓塞 2.02.8治疗深静脉血栓形成、肺栓塞和脑缺血发作2.02.5腰部、股骨骨折手术 1.52.5预防深静脉血栓形成 INRINR范围范围 疾病疾病 172 2、APTTAPTT的临床应用的临床应用评估内源凝血因子缺陷评估内源凝血因子缺陷筛查狼疮样抗凝物筛查狼疮样抗凝物监测肝素的临床应用监测肝素的临床应用检测水蛭素的应用检测水蛭素的应用手术前止血功能的筛查手术前止血功能的筛查 凝血因子抑制物和狼疮抑制物凝血因子抑制物和狼疮抑制物 APTT 延长肝素与肝素与APTTAPTT 肝素通常采用APTT监测，以判断疗效，该值一般应维持于正常值的倍。不同设备与试剂APTT参考值略有不同。即使A
9、PTT在治疗范围内，也可出现严重的出血并发症。肝素与肝素与APTT APTT 肝素的耐药性肝素的耐药性 富组胺糖蛋白、弹力蛋白、PF4 等可竞争性抑制肝素 与抗凝血酶结合。遗传性抗凝血酶缺乏（AT 40%60%）。肝硬化、肾病综合征、DIC等（AT 30%）。上述情况存在时，即使给予大剂量肝素亦不能使 APTT延长。PTPT、APTTAPTT联合分析联合分析 3 3、纤维蛋白原（、纤维蛋白原（FbgFbg）的临床应用）的临床应用2.在手术前和血栓的溶栓、抗凝治疗在手术前和血栓的溶栓、抗凝治疗3.诊断局部缺血心脏病的危险性诊断局部缺血心脏病的危险性4.预防血栓形成（独立因素）预防血栓形成（独立因
10、素）5.肿瘤病人化疗、转移肿瘤病人化疗、转移6.DIC方法学问题方法学问题 ClaussClauss法法功能检测，操作简单，结果可靠，功能检测，操作简单，结果可靠，WHOWHO推推荐为荐为Fib-CFib-C的参考方法（凝血酶为的参考方法（凝血酶为3030100U/ml100U/ml，OVBOVB的的pHpH值应在）；值应在）；PTPT演算法演算法更快速，简便，且重复性较好，当更快速，简便，且重复性较好，当FibFib在在正常范围或轻度异常时，与正常范围或轻度异常时，与ClaussClauss法结果差异不大，法结果差异不大，但当但当FibFib或或FibFib时，时，PTPT演算法结果不可信，
11、一般高演算法结果不可信，一般高于于ClaussClauss法法；免疫法、比浊法和化学法操作繁琐，均非免疫法、比浊法和化学法操作繁琐，均非FibFib功能检功能检测法，故与生理性测法，故与生理性FibFib活性不一定总是成平行关系。活性不一定总是成平行关系。4 4、凝血酶时间（、凝血酶时间（TTTT）原发性或继发性纤溶亢进时产生大量FDP，干扰纤维蛋白的聚合，导致TT延长。普通肝素或水蛭素治疗时，TT显著延长。溶栓治疗时，FDP增高，纤维蛋白原降低，TT延长。严重肝病、肝移植、恶性肿瘤、SLE、流行性出血热、过敏性休克等疾病可导致血浆肝素样物质增多。纤维蛋白原质或量的异常：低纤维蛋白原血症、异常
12、纤维蛋白原血症，TT延长。TT延长延长硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白/甲苯胺蓝纠正试验甲苯胺蓝纠正试验TT正常（被纠正）正常（被纠正）TT延长（不被纠正）延长（不被纠正）Fg/FDPs测定测定肝素肝素/类肝素物质类肝素物质 正常血浆：患者血浆（正常血浆：患者血浆（11）纠正试验）纠正试验 TT正常（被纠正）正常（被纠正）TT延长（不被纠正）延长（不被纠正）凝血因子缺乏凝血因子缺乏 凝血因子抑制物存在凝血因子抑制物存在 抗凝血酶（抗凝血酶（antithrombinantithrombin，ATAT ）由肝脏、血管内皮细胞、）由肝脏、血管内皮细胞、巨核细胞合成，巨核细胞合成，依赖肝素的丝氨酸蛋白酶抑制剂
13、，是人体内主要的血浆抗依赖肝素的丝氨酸蛋白酶抑制剂，是人体内主要的血浆抗 凝物质，尤其对凝血酶的灭活能力占所有抗凝蛋白的凝物质，尤其对凝血酶的灭活能力占所有抗凝蛋白的70%70%80%80%。ATAT与酶与酶1 1：1 1复合物复合物，这种共价结合是不可逆的，这种共价结合是不可逆的，肝素作用于肝素作用于ATAT的赖氨酸残基从而大大增强的赖氨酸残基从而大大增强ATAT的抗凝酶活性的抗凝酶活性（20002000倍以上倍以上）。5 5、抗凝血酶、抗凝血酶(AT)(AT)XII纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白凝块内源途径XIIXVIIIXVII抗凝血酶抗凝血酶外源途径组织因子VII蛋白 C 系统 凝固抑制
14、凝固抑制肝素与肝素与ATAT肝素是一种酸性粘多糖，主要由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生，存在于大多数组织中，在肝、肺、心和肌肉组织中丰富。在体内、体外均具有抗凝作用。肝素作为辅因子，作用于AT的赖氨酸残基，可使AT灭活凝血酶作用大大增强，促进AT与凝血酶结合更快，更稳定使凝血酶立即失活。UFH分子量15000d抗Xa与抗IIa活性相似LMWH平均分子量4000-5000d 抗Xa大于抗IIa活性(抗Xa：抗IIa=24:1)UFHUFH与与LMWHLMWH抗凝机制抗凝机制ACCP7.Chest.2004;126:188-203;WALENGA JM,et al.Turk J Haematol 20
15、02;19(2):137-150;J EFFREY I.WEITZ.The New England Journal of Medicine.1997;337:688-698;Alban S.Current Pharmaceutical Design.2008;14:1152-1175 AT AT缺陷缺陷 遗传性AT缺陷：导致VTE和PE，动脉血栓少见。合成障碍（肝脏受损）在肝硬化、重症肝炎、肝癌晚期、急性肝功能衰竭、早产儿等，由于合成减少，AT活性与水平减低，且常与疾病严重程度相关，可伴发血栓形成。消耗过度（DIC、脓毒血症、DVT、早幼粒白血病）。丢失过多：肾病综合征时，由于AT的分子量较小
16、，易从尿液中随蛋白流失。高血压所致慢性肾功能衰竭也会造成AT的大量丢失，进而导致高凝状态或血栓形成。抗肿瘤治疗对抗凝血系统的影响抗肿瘤治疗对抗凝血系统的影响抗肿瘤药物抗肿瘤药物引发血栓风险的机制引发血栓风险的机制环磷酰胺肝肾损害（1）肝损害：AT、PC、PS合成减少（2）肾损害：AT大量丢失氨甲喋呤丝裂霉素贝伐单抗血管内皮损伤（1）AT合成减少（2）TM缺陷，PC活化障碍沙利度胺来那度胺糖尿病对抗凝血酶的影响糖尿病对抗凝血酶的影响 凝血活化，消耗AntithombinAntithombin。血管内皮损伤引发AntithombinAntithombin活化障碍。肾脏损伤，导致Antithombi
17、nAntithombin从尿中大量丢失。酶活性中心被糖基化，AntithombinAntithombin活性降低。6 6、纤维蛋白（原）降解产物（、纤维蛋白（原）降解产物（FDPFDP）原发性、继发性纤溶亢进时，FDP 均增高。血管栓塞性疾病（AMI、CI、DVT）。白血病化疗诱导期后出血性血小板增多症。尿毒症、肝脏疾患或各种肿瘤。FDP/D-FDP/D-二聚体的产生二聚体的产生凝血系统凝血系统组织因子途径组织因子途径其他途径？其他途径？凝血酶原凝血酶原凝血酶凝血酶FXIIIFXIIIa纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶纤溶酶纤维蛋白单体纤维蛋白单体纤维蛋白原纤维蛋白原交联纤维蛋白交联纤维蛋白FDPX,Y
18、,D,E等碎等碎片片X,等碎片等碎片DD,DXD,DD/E,YXD等等复合物复合物纤溶系统纤溶系统纤溶纤溶凝固凝固7 7、D-D-二聚体临床应用进展二聚体临床应用进展随着技术的进步，临床应用也在不断深入早期替代早期替代FDP和和3P实验用于实验用于DIC的诊断和监测的诊断和监测高阴性预示能力和高灵敏度，用于高阴性预示能力和高灵敏度，用于VTE排除、早期排除、早期DIC的诊断和溶栓治疗监测的诊断和溶栓治疗监测VTE复发的监测，抗凝药物停药的风险评估复发的监测，抗凝药物停药的风险评估内、外、妇、儿多种疾病血栓风险评估、病程动态监测及预后评估内、外、妇、儿多种疾病血栓风险评估、病程动态监测及预后评估
19、恶性肿瘤的预警信号恶性肿瘤的预警信号.早期替代早期替代FDP和和3P实验用于实验用于DIC的诊断和监测的诊断和监测36诊断诊断DIC中应用中应用敏感性（%）特异性（%）诊断效率（%）单用FDPs1006787单用D-D 916180联用FDPs+DD919495 鉴别原发性纤溶和继发性纤溶（DIC）：前者FDPs，D-D/N；后者FDPs和D-D 都。FDPFDP与与D-D-二聚体联合检测的意义二聚体联合检测的意义变化特点变化特点临床疾病临床疾病FDPs（）D-D （）纤溶活性正常，即使临床有出血症状，也与纤溶症无关。FDPs（）D-D （）原发性纤溶（纤维蛋白原被降解）肝病、剧烈运动后、类风
20、湿关节炎FDPs（）D-D （）纤维蛋白被降解，而纤维蛋白原未被降解。几乎不可能出现，见于FDP假阴性。FDPs（）D-D （）纤维蛋白原和纤维蛋白同时被降解，见于继发性纤溶，如DIC和溶栓治疗后。举例：妊娠举例：妊娠2020/36/36周周D-D-二聚体与二聚体与FDPFDP的变化的变化目前市场上没目前市场上没有高灵敏的有高灵敏的FDP试剂试剂 D-D-二聚体检测应注意的几个问题二聚体检测应注意的几个问题方法学之间的可比性不同的结果表达方式参考区间与cutoff值试剂检测灵敏度要求标准化问题D-D-二聚体片段的异源性二聚体片段的异源性针对不同片段制备的单克隆抗体对同一份血浆中不同片段的结合能
21、力不同目前有目前有20多种多种单抗被使用单抗被使用。DDU与与FEUDDUDDU反映的是小分子片段(195KDa)D-二聚体的量，其校准物是纯化的D-二聚体FEUFEU反映的是大分子片段(340KDa)D-二聚体的量，其校准物是标化的纤维蛋白原水解生成的交联纤维蛋白降解产物，故用降解前纤维蛋白原分子的量来表达用FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的倍，但不建议进行形式和量纲的转换大分子片段D-二聚体检测可能能更灵敏的反映交联纤维蛋白早期水解情况参考区间与参考区间与cutoffcutoff值值参考区间参考区间：反映的是当地健康人群D-二聚体的水平cutoff值值：只是用来排除DVT和PE
22、，而不是用于区别健康人群与非健康人群妊娠女性、65岁以上的老年人应重新建立参考区间和cutoff值42排除静脉栓塞的试剂要求排除静脉栓塞的试剂要求建立排除诊断的阈值（cutoff值）必须有高的阴性预示值、灵敏度必须在阈值浓度水平有较好的重现性厂家应提供主要特征评估的数据来源CLSICLSI 59-A59-A（20102010）推荐的预测值特征：）推荐的预测值特征：无统一的国际标准目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用。存在两种报告单位：D-dimer（DDU）和纤维蛋白原当量(FEU)抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力不同的试剂有不同的干扰情况44检测标准化问题检测标准化问题45美国临
23、床实验室标准化协会（美国临床实验室标准化协会（CLSICLSI）H59-P H59-P推荐指南推荐指南4.2 阴性预测值结合临床诊断的PTP进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%4.3 测试范围涵盖制造商提供的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值4.4 线性D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.984.5 精密度 4.5.1 重复性用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15用高值异常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10.我国正在制定有关我国正在制定有关D-二聚体检测的质量管理规范二聚体检测的质量管理规范D D二聚体试剂标准二聚体试剂标准中国国家标准（讨论稿）中国国家标准（讨论稿）.