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1、第一页，共五十一页。基因工程基因工程(jyn gngchng)背景背景(bijng)(bijng)：家蚕能够吐出家蚕能够吐出蚕丝为人类利用。但繁殖慢，蚕丝为人类利用。但繁殖慢，产量低。产量低。能否让大肠杆菌能否让大肠杆菌(d chn n jn)(d chn n jn)也能吐蚕丝也能吐蚕丝呢？呢？大肠杆菌繁殖很快，但不会大肠杆菌繁殖很快，但不会产丝。产丝。第二页，共五十一页。用人工方法，把甲生物的某个基因提取用人工方法，把甲生物的某个基因提取出来，在体外进出来，在体外进行行切割、拼接和重组切割、拼接和重组，然后将其，然后将其导入导入乙生物的细胞内进乙生物的细胞内进行大量行大量复制复制，并进行，并
2、进行表达表达，从而定向地改变，从而定向地改变(gibin)乙生物乙生物的遗传性状，或获得人类所需要的基因的遗传性状，或获得人类所需要的基因产物产物（蛋白质、多（蛋白质、多肽、酶）。肽、酶）。剪切拼接剪切拼接(pn ji)(pn ji)导导入入甲甲生生物物(shn(shngw)gw)取出所需基因取出所需基因生物生物新类型新类型表达表达新的新的生物生物产品产品乙乙生生物物第三页，共五十一页。基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接(pn(pn ji)ji)等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需
3、要以下三种工具：作最少需要以下三种工具：、基因、基因(jyn)(jyn)的手术刀的手术刀、基因、基因(jyn)(jyn)的针的针线线3 3、基因的运输工具、基因的运输工具第四页，共五十一页。主要主要(zhyo)(zhyo)在在原核生物原核生物中。中。特异性特异性。即一种限制性内切酶只能识别一。即一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将上将DNA分子分子(fnz)(fnz)切断切断（使连接脱氧核苷使连接脱氧核苷酸的酸的磷酸二酯键磷酸二酯键断裂）断裂）。已发现已发现(fxin)(fxin)数千数千种种种类种类:来源来源:特点特点:、基因
4、的剪刀基因的剪刀限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶第五页，共五十一页。例如例如(lr)(lr)：大肠杆菌的一种限制酶能识别：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在序列，并在G和和A之间切开。之间切开。限限制制(xinz(xinzh)h)酶酶第六页，共五十一页。G A A T T CC T T A A G55553333粘性粘性(zhn xn)(zhn xn)末端末端粘性粘性(zhn xn)(zhn xn)末端末端限制性限制性内切酶内切酶C T T A AG5533A A T T CG3355被限制酶切开的被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他
5、们个伸出的核苷酸，他们两个两个之间正好之间正好反向反向互补配对，互补配对，这样的切口叫粘性这样的切口叫粘性(zhn xn)末端。末端。被同一种限制酶切被同一种限制酶切断的几个断的几个DNA就具有相同的粘性末端，能够通过互就具有相同的粘性末端，能够通过互补进行配对。补进行配对。第七页，共五十一页。T G C AA C G T55333355不不同同的的限限制制(xinzh)酶酶所所形形成成的的粘粘性性末末端端不不同同A C GT5533G C AT3355另一种另一种限制酶限制酶第八页，共五十一页。、基因、基因(jyn)(jyn)的针的针线线作用作用(zuyng)(zuyng)(zuyng)(z
6、uyng)：将粘性末端碱基互补的两个将粘性末端碱基互补的两个(lin)DNA片段连接起来，使之成为一个完整的片段连接起来，使之成为一个完整的DNA分子分子（使两个（使两个DNA片段通过片段通过磷酸二酯键磷酸二酯键连接成一个连接成一个DNA分子）分子）。DNA连接酶连接酶第九页，共五十一页。C T T A AG A A T T CG连接酶连接酶连接酶连接酶第十页，共五十一页。3 3、基因、基因(jyn)(jyn)的运输的运输 工具工具基因载体基因载体(zit)(zit)(zit)(zit)的条件：的条件：能够在宿主细胞能够在宿主细胞(xbo)(xbo)中复制并稳定地保存。中复制并稳定地保存。具有
7、多个限制酶切点（具有多个限制酶切点（每种限制酶切点只每种限制酶切点只有一个有一个），以便与外源基因连接。），以便与外源基因连接。具有标记基因，便于进行筛选。具有标记基因，便于进行筛选。载体载体要把甲生物取出的基因送到乙生物的细胞中去，需要把甲生物取出的基因送到乙生物的细胞中去，需要运输基因的载体。要运输基因的载体。第十一页，共五十一页。最常用的基因最常用的基因(jyn)(jyn)载体是细菌细胞质的载体是细菌细胞质的质粒质粒（核区）（核区）质粒（细胞质质粒（细胞质DNA）大肠杆菌大肠杆菌质粒质粒质粒质粒能能能能自主复制自主复制自主复制自主复制的的的的双链环状双链环状双链环状双链环状DNADNA分
8、子，分子，分子，分子，存在于细菌存在于细菌存在于细菌存在于细菌核区以外核区以外核区以外核区以外(ywi)(ywi)，带有少量基因，其中带有少量基因，其中带有少量基因，其中带有少量基因，其中常含常含有有有有抗生素抗性基因（如四环素抗生素抗性基因（如四环素抗生素抗性基因（如四环素抗生素抗性基因（如四环素的抗性基因）的抗性基因）的抗性基因）的抗性基因），使细菌有抗药性，一个细菌中有多个质粒。，使细菌有抗药性，一个细菌中有多个质粒。，使细菌有抗药性，一个细菌中有多个质粒。，使细菌有抗药性，一个细菌中有多个质粒。第十二页，共五十一页。最常用的基因最常用的基因(jyn)(jyn)载体是细菌细胞质的载体是细
9、菌细胞质的质粒质粒（核区）（核区）质粒（细胞质质粒（细胞质DNA）大肠杆菌大肠杆菌质粒与宿主细胞的关系：质粒与宿主细胞的关系：质粒与宿主细胞的关系：质粒与宿主细胞的关系：1 1、质粒的存在对宿主细胞、质粒的存在对宿主细胞、质粒的存在对宿主细胞、质粒的存在对宿主细胞无影响无影响无影响无影响(yngxing)(yngxing)。2 2、质粒的复制、质粒的复制、质粒的复制、质粒的复制只能只能只能只能在宿主细胞内完成。在宿主细胞内完成。在宿主细胞内完成。在宿主细胞内完成。第十三页，共五十一页。抗生素抗性基因（标抗生素抗性基因（标记基因）记基因）（细胞质（细胞质DNA）（核区）（核区）质粒质粒(细胞质细
10、胞质DNA)大肠杆菌大肠杆菌控制质粒控制质粒DNA转转移的基因移的基因第十四页，共五十一页。4 4、筛选含有、筛选含有(hn yu)(hn yu)目的基因的受体细目的基因的受体细胞胞1 1、获得目的、获得目的(md)(md)基因基因2、形成重组、形成重组(zhn z)DNA分子分子3 3、将、将重组重组DNA分子分子导入受体细胞导入受体细胞5 5、目的基因的表达、目的基因的表达第二节基因工程的原理和技术第二节基因工程的原理和技术u基因工程的基本操作步驟基因工程的基本操作步驟第十五页，共五十一页。逆转录法：逆转录法：信使信使(xnsh)(xnsh)RNARNA逆转录酶逆转录酶DNADNA单链单链
11、合成合成DNADNA双链双链(基因基因(jyn)(jyn)直接直接(zhji)(zhji)合成法：合成法：组成蛋白质的氨组成蛋白质的氨基酸序列基酸序列推测推测信使信使RNARNA核苷酸序列核苷酸序列推测推测基因单核基因单核苷酸序列苷酸序列合成合成基因双链基因双链、获得目的基因、获得目的基因（1 1）化学合成法）化学合成法（目的基因的序列（目的基因的序列巳知巳知）第十六页，共五十一页。人工合成人工合成(rn n h chn)(rn n h chn)(rn n h chn)(rn n h chn)(基因基因(jyn)(jyn)(jyn)(jyn)比较小比较小)DNA合成合成(hchng)(hchn
12、g)仪仪第十七页，共五十一页。（2 2）用聚合酶链式反应）用聚合酶链式反应(lin sh fn yng)(lin sh fn yng)(PCR)(PCR)扩增目的基扩增目的基因因第十八页，共五十一页。1234522557294时间（min）温度（）PCR反应(fnyng)适温延伸3高温变性1低温退火2重复(chngf)13步2530轮目的DNA片段(pin dun)扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍第十九页，共五十一页。第二十页，共五十一页。（3 3）从基因文库中分离）从基因文库中分离(fnl)(fnl)：目的基因目的基因(jyn)(jy
13、n)的脱氧核苷酸序列是的脱氧核苷酸序列是未知的未知的，可以从基因文库中找到目的基因（酶切）。可以从基因文库中找到目的基因（酶切）。（2 2）用聚合酶链式反应）用聚合酶链式反应(lin sh fn yng)(lin sh fn yng)(PCR)(PCR)扩增目的基因扩增目的基因第二十一页，共五十一页。基因组文库基因组文库(wnk)的构建模式图的构建模式图通过对通过对受体菌受体菌的培养而的培养而储存储存(chcn)基基因因第二十二页，共五十一页。2、形成重组、形成重组(zhn z)DNA分子分子用用相同相同的限制性核酸的限制性核酸(h sun)内切酶分别切割目的内切酶分别切割目的基因和载体；基因
14、和载体；目的目的(md)(md)基因与载体的结合过程基因与载体的结合过程基因重组基因重组用用DNA连接酶将目的连接酶将目的基因和载体连接在一起，形基因和载体连接在一起，形成重组成重组DNA分子（或重组分子（或重组质粒）。质粒）。第二十三页，共五十一页。3、将重组、将重组(zhn z)DNA分子导入受体细胞分子导入受体细胞导入导入扩增扩增将重组将重组(zhn z)DNA分子导入受体细胞并使之扩增。分子导入受体细胞并使之扩增。a a、为使、为使重组的质粒更容易重组的质粒更容易(rngy)(rngy)进入大肠杆菌进入大肠杆菌，用，用氯化钙氯化钙处理大肠杆菌，处理大肠杆菌，增加增加大肠杆菌大肠杆菌细胞
15、壁的通透性细胞壁的通透性。a.如要获得目的基因的如要获得目的基因的表达产物，表达产物，通通常以大肠杆菌等无害易得的细菌为受常以大肠杆菌等无害易得的细菌为受体。体。b.如要如要改良某种生物的性状改良某种生物的性状时，要以时，要以改良的生物细胞为受体。改良的生物细胞为受体。问题：谁是受体？问题：谁是受体？第二十四页，共五十一页。3、将重组、将重组(zhn z)DNA分子导入受体细胞分子导入受体细胞将重组将重组(zhn z)DNA分子导入受体细胞并使之扩增。分子导入受体细胞并使之扩增。1 1、受体为植物细胞：农杆菌介导法、受体为植物细胞：农杆菌介导法 基因基因(jyn)(jyn)枪法枪法 花粉花粉管
16、道法管道法 b.如要如要改良某种生物的性状改良某种生物的性状时，要以改良的生物细胞为受体。时，要以改良的生物细胞为受体。2 2、受体为动物细胞：基因枪法、受体为动物细胞：基因枪法 显微注射法显微注射法第二十五页，共五十一页。1.1.将目的基因导入植物将目的基因导入植物(zhw)(zhw)细胞细胞农杆菌转化农杆菌转化(zhunhu)(zhunhu)法法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法第二十六页，共五十一页。（1 1）农杆菌）农杆菌(gnjn)(gnjn)转化法转化法特点：特点：易感染易感染(gnrn)(gnrn)双子叶植物和双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植裸子植物，对大多数单子叶植
17、物没有感染物没有感染(gnrn)(gnrn)能力能力原理：原理：TiTi质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA可以转移可以转移(zhuny)(zhuny)到受体细胞，到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的并整合到受体细胞染色体的DNADNA上。上。第二十七页，共五十一页。转化转化(zhunhu)(zhunhu)过程过程:TiTi质粒质粒目的目的(md)(md)基基因因构建构建(u jin)表达表达载体载体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细胞植物细胞染色染色DNADNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌第二十八页，共五十一页。基因枪法基因枪法(qingf)(qingf)又又称微弹轰击法，是
18、称微弹轰击法，是利利用压缩气体产生的动用压缩气体产生的动力力，将包裹在金属颗，将包裹在金属颗粒表面的表达载体粒表面的表达载体DNADNA打入受体细胞中打入受体细胞中，使目的基因与其整合并使目的基因与其整合并表达的方法。表达的方法。（2 2）基因）基因(jyn)(jyn)枪法枪法适用适用适用适用(shyng)(shyng)(shyng)(shyng)于于于于单子叶植单子叶植单子叶植单子叶植物物物物第二十九页，共五十一页。（3 3）花粉）花粉(hufn)(hufn)通道法通道法 植物花粉在柱头上植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过萌发后，花粉管要穿过花柱花柱(huzh)(huzh)直通胚囊。花直通
19、胚囊。花粉管通道法就是在植物粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加柱头，然后，滴加DNADNA（含目的基因），使目（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道的基因借助花粉管通道进入受体细胞。进入受体细胞。适用适用适用适用(shyng)(shyng)(shyng)(shyng)于于于于被子植被子植被子植被子植物物物物第三十页，共五十一页。胚珠(pi zh)花药(huyo)花丝(hu s)柱头花柱子房壁子房雄蕊雌蕊第三十一页，共五十一页。2.2.将目的将目的(md)(md)基因导入动物细胞基因导入动物细胞（1 1）方法）方
20、法(fngf)(fngf)：显微注射法：显微注射法（将基因表达载体（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到提纯，用显微仪注射到 受精卵受精卵中）中）第三十二页，共五十一页。（2 2）操作程序）操作程序:提纯含目的提纯含目的(md)基因表达载体基因表达载体取受精卵取受精卵显微显微(xin wi)注射注射移植移植(yzh)到子宫到子宫受精卵发育受精卵发育新性状动物新性状动物第三十三页，共五十一页。4 4、筛选含有、筛选含有(hn yu)(hn yu)目的基因的受体细胞目的基因的受体细胞尽管使用了大量的受体细胞，但真正导入了尽管使用了大量的受体细胞，但真正导入了重组重组DNA分子的受体细胞很少，因此必须
21、分子的受体细胞很少，因此必须(bx)将它将它从中检测出来。从中检测出来。筛选的方法主要依赖于筛选的方法主要依赖于质粒中的抗性基因质粒中的抗性基因所所表达表达(biod)(biod)的产物进行筛选。的产物进行筛选。第三十四页，共五十一页。四环素抗性基因四环素抗性基因四环素抗性基因四环素抗性基因（标记基因）（标记基因）（标记基因）（标记基因）四环素四环素四环素四环素培养基培养基培养基培养基生长生长(shngzhng)(shngzhng)被被抑制抑制供体供体DNA质粒质粒重组重组重组重组DNADNA目的基因目的基因正常正常(zhngchng)(zhngchng)生活生活四环素四环素四环素四环素培养基
22、培养基培养基培养基受体细胞受体细胞受体细胞受体细胞第三十五页，共五十一页。问题问题1 1：在受体细胞中检测到含有目的基因在受体细胞中检测到含有目的基因(jyn)(jyn)，能说明转基因成功吗？能说明转基因成功吗？不能。还要看最后该目的基因是否不能。还要看最后该目的基因是否(sh fu)(sh fu)在受体细胞表达。在受体细胞表达。5 5、目的、目的(md)(md)基因的表达基因的表达问题问题2 2：如何检测？如何检测？检测的方法主要看导入的目的基因是否表达出产检测的方法主要看导入的目的基因是否表达出产物，或要看受体生物是否表现出相应的性状。物，或要看受体生物是否表现出相应的性状。基因工程是否获
23、得成功，最重要的是要看目的基基因工程是否获得成功，最重要的是要看目的基因是否在受体细胞中得到表达。因是否在受体细胞中得到表达。第三十六页，共五十一页。产物产物(chnw)(chnw)的检测的检测无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落(jnlu)(jnlu)，检测菌落，检测菌落(jnlu)(jnlu)中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落达产物的菌落(jnlu)(jnlu)，保留有表达产物的进一步培养、研究。，保留有表达产物的
24、进一步培养、研究。第三十七页，共五十一页。如用棉叶饲喂棉铃虫，如用棉叶饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，如虫吃后不出现中毒症状，说明未导入目的基因或导入说明未导入目的基因或导入的目的基因未表达的目的基因未表达(biod)(biod)。如。如虫吃后中毒死亡，则说明导虫吃后中毒死亡，则说明导入了抗虫基因并得到表达入了抗虫基因并得到表达(biod)(biod)。性状性状(xngzhung)(xngzhung)的检测的检测第三十八页，共五十一页。如转入了人胰岛素原基因的大肠杆菌，可如转入了人胰岛素原基因的大肠杆菌，可以以(ky)(ky)合成人胰岛素原。经进一步加工后可获得合成人胰岛素原。经进一步加工
25、后可获得具有生物活性的胰岛素。具有生物活性的胰岛素。如转入了人胰岛素原基因的酵母菌，是如转入了人胰岛素原基因的酵母菌，是否否(sh fu)(sh fu)需要进一步加工？需要进一步加工？第三十九页，共五十一页。1.不属于质粒被选为基因运载体的理由是不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制、能复制 B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点 C、具有、具有(jyu)(jyu)标记基因标记基因 D、它是环状、它是环状DNAD练习练习(linx)(linx)(linx)(linx)第四十页，共五十一页。2.有关基因工程的叙述中，错误的是有关基因工程的叙述中，错误的是 A、DNA连接酶将黏性末端的碱基
26、对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限限制制性性核核酸酸(h(h sun)sun)内内切切酶酶用用于于目目的的基基因因的的获获得得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、一种限制酶只能识别一种特定的脱氧苷酸一种限制酶只能识别一种特定的脱氧苷酸 序列序列A第四十一页，共五十一页。3.有关基因工程的叙述有关基因工程的叙述(xsh)(xsh)正确的是正确的是 A、限制酶只在获得目的基因时才用、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基
27、因提供、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料资料D第四十二页，共五十一页。4.基基因因工工程程是是在在DNA分分子子水水平平上上进进行行设设计计施施工工的的。在在基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤中中，不不进进行行碱碱基基互互补补配配对对的的步骤是步骤是 A、人工合成目的基因、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合(jih)(jih)C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达C第四十三页，共五十一页。1 1（全国卷）采用基因工程的方法培育抗虫棉，（全国卷）采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列下列(xili)(xi
28、li)导入目的基因的作法正确的是导入目的基因的作法正确的是 （）将毒素蛋白注射到棉受精卵中将毒素蛋白注射到棉受精卵中将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，注射到棉受精卵序列，注射到棉受精卵 中中将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，与质粒重组，导序列，与质粒重组，导 入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行 组织培养组织培养将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，与细菌质粒重序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵组，注射到棉的子房并进入受精卵A B C D A B C D C C第四十四页，共五十一页。2（2009
29、年浙江卷）下列关于基因工程的叙述，错误年浙江卷）下列关于基因工程的叙述，错误 的是的是 ()A目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B限制性核酸内切酶和限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工连接酶是两类常用的工 具酶具酶 C人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无 生物活性生物活性 D载体载体(zit)上的抗性基因有利于筛选含重组上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞的细胞 和促进目的基因的表达和促进目的基因的表达D D第四十五页，共五十一页。3 3(2010(2010浙江卷浙江卷)在用基因工程
30、技术构建抗除草剂在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 ()A A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B B用用DNADNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因连接酶连接经切割的抗除草剂基因(jyn)(jyn)和载和载体体C C将重组将重组DNADNA分子导入烟草原生质体分子导入烟草原生质体D D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞A A第四十六页，共五十一页。4 4（20112011浙江卷）将浙江卷）将ada(ada(腺苷酸脱氨酶基因）通过腺苷酸脱氨酶基因）
31、通过质粒质粒pET28bpET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误下列叙述错误(cuw)(cuw)的是（）的是（）A.A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B.B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点点 C.C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个个adaada D.D.每个的每个的adaada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子C C第四十七页，共五十一页。6 6(2012(2012浙江卷
32、）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色浙江卷）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色浙江卷）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色浙江卷）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因色素合成的基因色素合成的基因色素合成的基因B B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因因因因B B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列(xili)(xili)操作正确的操作正确
33、的操作正确的操作正确的是（）是（）是（）是（）A A提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的mRNAmRNA，经逆转录获得互补的，经逆转录获得互补的，经逆转录获得互补的，经逆转录获得互补的 DNADNA，再扩增基因，再扩增基因，再扩增基因，再扩增基因B BB B利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库 中获取基因中获取基因中获取基因中获取基因B BC C利用利用利用利用DNADNA聚合酶将基因聚合酶将基因聚合酶将基因聚合
34、酶将基因B B与质粒连接后导入玫瑰细胞与质粒连接后导入玫瑰细胞与质粒连接后导入玫瑰细胞与质粒连接后导入玫瑰细胞D D将基因将基因将基因将基因B B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞A A第四十八页，共五十一页。第四十九页，共五十一页。(2011 (2011浙江五校联浙江五校联浙江五校联浙江五校联)用用用用DNADNA连接酶把被限制性核酸内切酶连接酶把被限制性核酸内切酶连接酶把被限制性核酸内切酶连接酶把被限制性核酸内切酶(识别识别识别识别 序列和切点是序列和切点是序列和切
35、点是序列和切点是-GATC-)切割切割(qig)的质粒和被限制酶的质粒和被限制酶(识别序列识别序列识别序列识别序列 和切点是和切点是和切点是和切点是-GGATCC-)切割过的目的基因连接起来后，该重切割过的目的基因连接起来后，该重切割过的目的基因连接起来后，该重切割过的目的基因连接起来后，该重 组组组组DNADNA分子能够再被分子能够再被分子能够再被分子能够再被限制酶限制酶切割开的概率是切割开的概率是切割开的概率是切割开的概率是 ()()A.1/2 B.7/16 C.1/16 D.1/4 A.1/2 B.7/16 C.1/16 D.1/4B第五十页，共五十一页。内容(nirng)总结第一章基因工程。限制性核酸内切酶。DNA连接酶。载体。易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。基因工程是否获得成功，最重要的是要看目的基因是否在受体细胞中得到表达。如转入了人胰岛素原基因的大肠杆菌，可以合成人胰岛素原。D、一种限制酶只能(zh nn)识别一种特定的脱氧苷酸。C人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无。A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸。B第五十一页，共五十一页。