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1、实验二实验二 叶绿体色素提取、分离及理化性质鉴定叶绿体色素提取、分离及理化性质鉴定 高等植物叶绿体色素的种类高等植物叶绿体色素的种类叶绿素（叶绿素（chlorophyll）类胡萝卜素（类胡萝卜素（carotenoid）一、实验目的：一、实验目的：了解并掌握叶绿体色素的提取、分离的原理和方法；了解了解并掌握叶绿体色素的提取、分离的原理和方法；了解叶绿体色素的理化性质；了解叶绿体色素的光学特性在光叶绿体色素的理化性质；了解叶绿体色素的光学特性在光合作用中的意义合作用中的意义二、原理二、原理三、器材与试剂三、器材与试剂1、仪器：漏斗、大试管、钵体、烧杯、滤纸、盖玻片、仪器：漏斗、大试管、钵体、烧杯、
2、滤纸、盖玻片、酒精灯酒精灯2、试剂：乙醇、试剂：乙醇、CaCO3、石英砂、石英砂、CCl4、盐酸、醋酸铜、盐酸、醋酸铜、KOH、苯、苯3、材料：菠菜叶片、材料：菠菜叶片四、方法四、方法叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取取菠菜叶子取菠菜叶子10g，剪碎，加石英砂和碳酸钙少许，乙醇约，剪碎，加石英砂和碳酸钙少许，乙醇约5ml，研磨成匀浆，再加乙醇，研磨成匀浆，再加乙醇15ml，用漏斗过滤，即为色素提取，用漏斗过滤，即为色素提取液。液。（1）纸层析法分离叶绿体色素）纸层析法分离叶绿体色素 取准备好的滤纸条（取准备好的滤纸条（215cm）,将其一端剪去两侧。用盖玻将其一端剪去两侧。用盖玻片蘸取叶绿体色素
3、提取液片蘸取叶绿体色素提取液,于滤纸的下端窄条的上方中央。于滤纸的下端窄条的上方中央。然后将滤纸条放入盛有然后将滤纸条放入盛有CCl4的烧杯中。（的烧杯中。（注意：色素线不要注意：色素线不要浸到液面以下！实验完毕回收浸到液面以下！实验完毕回收CCl4）胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a叶绿素叶绿素b 荧光现象荧光现象荧光现象荧光现象 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，叶绿素溶液在透射光下呈绿色，叶绿素溶液在透射光下呈绿色，叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈红色，称为在反射光下呈红色，称为在反射光下呈红色，称为在反射光下呈红色，称为荧光荧光荧光荧光现象现象现象现象 。（2）叶绿素的荧光现
4、象）叶绿素的荧光现象取上述色素乙醇提取液少许于试管中，在反射光和透射光下取上述色素乙醇提取液少许于试管中，在反射光和透射光下观察色素提取液的颜色有什么不同。反射光下观察到的溶液观察色素提取液的颜色有什么不同。反射光下观察到的溶液颜色颜色，即为叶绿素产生的荧光现象。，即为叶绿素产生的荧光现象。光光e第一单线态第一单线态第一三线态第一三线态体系间跨越基态基态荧荧光光磷磷光光（3）铜在叶绿素分子中的替代作用）铜在叶绿素分子中的替代作用取上述色素乙醇提取液少许于试管中，取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1滴滴1滴地加入盐酸，滴地加入盐酸，直至溶液出现褐绿色。然后加醋酸铜晶体直至溶液出现褐绿色。然后加醋
5、酸铜晶体2-3小粒，慢慢小粒，慢慢地在酒精灯上加热溶液，使溶液又产生亮绿色。地在酒精灯上加热溶液，使溶液又产生亮绿色。去镁叶绿素去镁叶绿素铜代叶绿素铜代叶绿素（4）黄色素和绿色素的分离）黄色素和绿色素的分离将叶绿体色素的提取液将叶绿体色素的提取液4毫升于大试管中，加入毫升于大试管中，加入1毫升毫升KOH-甲醇溶液，充分摇匀，然后加甲醇溶液，充分摇匀，然后加5毫升苯，摇匀，再沿试管壁慢毫升苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入慢加入11.5ml蒸馏水，轻轻混匀（勿激烈摇荡），观察分蒸馏水，轻轻混匀（勿激烈摇荡），观察分层现象。层现象。类胡萝卜素（黄色素）类胡萝卜素（黄色素）叶绿素（绿色素）叶绿素（绿色素）五、实验报告五、实验报告列出并解释实验现象。列出并解释实验现象。